Аналитическая чувствительность вируса гепатита с

ПЦР анализ

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ – это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.

Для диагностики ВГC часто используется процедура качественного анализа. Это отдельная методика, дающая весьма точные результаты. На сегодняшний день это один из лучших способов определить наличие (или отсутствие) вируса гепатита C. Анализ может принести два результата. Вот возможные варианты:

• Вирус гепатита C кач. РНК не обнаружен – что это значит? Ответ прост: в крови нет фрагментов рибонуклеиновой кислоты ВГC. А если гепатит C РНК не обнаружено, то человек здоров;
• Вирус гепатита С кач. РНК обнаружено – что это значит? В этом случае анализ показал, что человек болен гепатитом C. Или, как минимум, инфицирован. Следовательно, ему требуется лечение.

Здесь обязательно нужно разобраться с сокращением «кач.», имеющемся в диагнозе. С его помощью врачи обозначают, что проводился именно качественный анализ крови. Если этого сокращения нет, то вполне возможно, что диагноз ставился иным способом. В частности, мог использоваться так называемый количественный анализ.

В целом, если гепатит C РНК не обнаружено, что это значит? А значит, что поводов для беспокойства нет. В случае если в крови нет и намека на ВГC, то лечение не требуется: организм справился с болезнью своими силами. Если же фрагменты рибонуклеиновой кислоты ВГC есть, то надо назначать соответствующий курс приема лекарств.

Основные особенности качественного анализа на наличие ВГC в крови

Гепатит C относится к заболеваниям, которые непросто диагностировать. Внешние признаки наличия этого вируса бессистемны, более того, в ряде случаев он себя никак не проявляет. Поэтому очень важно знать, как выявить наличие этой болезни у пациента. Здесь на помощь приходит качественный анализ крови. С его помощью устанавливается наличие или отсутствие фрагментов РНК ВГC в плазме крови.

Качественный анализ на наличие гепатита C проводится по методу полимеразной цепной реакции, сокращенно – ПЦР. Суть метода такова: используются особые ферменты, копирующие фрагменты РНК возбудителя гепатита C (или любого другого заболевания). После получения анализов лаборанты проверяют пробы по базе данных, выявляя разновидность вируса и его концентрацию в крови.

Специалисты называют следующие преимущества данного метода:

• Точность проверки. При правильном подходе специалисты способны гарантированно определить наличие/отсутствие вируса, равно как и его тип;
• Быстрое получение результатов анализов. Опытные лаборанты способны представить результат в течение 6-7 часов. Даже с учетом очереди, пациент получает требуемую информацию в кратчайшие сроки;
• Высокая чувствительность используемого оборудования. То есть, количество единиц вируса на миллилитр крови (МЕ/мл) может быть весьма низким, но анализ все равно выявит наличие инфекции;
• Низкая цена вопроса. В целом, проводимый анализ мало отличается по цене от других методик. При этом надежность метода качественного анализа (ПЦР) гораздо выше альтернативных вариантов.

Но имеется ряд важных моментов, которые стоит принимать в расчет при проведении анализа. В частности, нужно обращаться только в те клиники, в которых работают действительно хорошие специалисты. Малейшая неточность в работе сделает результат бесполезным. Более того, в этом случае возможно неправильное определение генотипа вируса, либо анализ покажет, что вирус в крови отсутствует. То есть, ценность результатов станет даже отрицательной.

Еще нужно учитывать, что у любого оборудования имеется нижний предел обнаружения вируса. То есть, если инфекция имеется в ничтожно малом количестве, она не будет обнаружена даже с помощью лучших приборов. Поэтому, при наличии подозрений на ВГC, рекомендуется повторить процедуру через определенный срок.

Принципы проведения качественного анализа на ВГC

В целом, к пациенту не имеется особых требований по подготовке к сдаче анализов. Все, что нужно сделать – сдать небольшое количество крови. Строго рекомендуется делать это натощак: в этом случае результаты диагностики будут более точными.

Стоит знать, что качественный анализ по методу ПЦР обычно назначается не сразу. Его рекомендуют проводить в следующих случаях:

• Обнаружение антител вируса гепатита C в крови пациента.
• Был обнаружен ВГC, но антитела в крови не имеются.
• При контроле проводимой противовирусной терапии.

В первых двух случаях качественный анализ назначается после сероконверсии. Если антител нет, но вирус обнаружен, нужно понять: какой именно генотип ВГC присутствует, и почему иммунная система не реагирует. Если есть антитела, то анализ позволяет разобраться: нужно ли лечение, или организм самостоятельно поборол болезнь.

Наконец, при контроле противовирусной терапии анализ делается для проверки эффективности лечения. В частности, метод ПЦР позволит понять, как препараты воздействуют на уже обнаруженный ВГC. Если эффект слабый, то на основе анализов врач решает, нужно ли менять лечение. Стоит запомнить: при контроле противовирусной терапии требуется особо чувствительное оборудование, способное обнаружить РНК гепатита C даже в самой низкой концентрации.

Заключение

Итак, для лучшего запоминания стоит напомнить, что означает тот или иной диагноз, поставленный при качественном анализе. Здесь имеются два варианта:

• Вирус гепатита C кач. РНК обнаружено – что это значит? Второй вариант, более короткий – гепатит C РНК обнаружено. Это, как его называют, положительный результат. Он означает, что в крови имеются фрагменты рибонуклеиновой кислоты ВГC. И человек инфицирован данным заболеванием.
• Вирус гепатита C РНК не обнаружен – что это значит? Либо, гепатит C РНК не обнаружено – что это значит, опять же? Это уже отрицательный результат. Анализ не обнаружил в крови фрагментов вируса. А значит, что организм победил инфекцию, и лечение не требуется.

Стоит запомнить: если человек инфицирован, то лечение надо начинать незамедлительно. Любое промедление в этом вопросе может иметь самые тяжелые последствия. И, конечно же, лечиться надо под руководством специалиста.

В последнее время в поисковиках интернет-ресурсов все чаще появляется запрос «количественный анализ на гепатит с расшифровкой».

Действительно, вирус гепатита распространен и опасен, заболевание поражает печень. Название его произошло от лат. hepatitis — воспаление печени. Заражение происходит через кровь либо половым путем, чаще болеют взрослые люди в возрасте от 25 до 50 лет.

Выделяют несколько типов этого заболевания. Гепатит С не имеет яркой выраженности, но в 40–70% случаев переходит в хроническую форму, способен вызвать цирроз печени и рак. Это заболевание требует точного диагностирования и расшифровки полученных данных, для чего разработаны методики. Одна из них — РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР

РНК (рибонуклеиновая кислота) — вид макромолекулы, одна из составляющих живой клетки. РНК отвечает за кодировку генетической информации. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет обыкновение мутировать. Известны 6 его подтипов, а также много субтипов.

Болезнь в своей хронической стадии приводит к фиброзу печени — разрастаются соединительные ткани, структура органа постепенно нарушается. Фиброз поддается своевременному лечению, так как печень не подверглась еще разрушительным процессам. В отличие от цирроза, тяжелого необратимого заболевания печени, в который может перерасти фиброз без принятия необходимых мер вовремя.

Человеку с подозрением на наличие у него вируса гепатита, определяют антитела к нему. Если их нет — заболевание исключается, при их наличии прибегают к методу ПЦР (полимеразной цепной реакции). В молекулярной биологии он является экспериментальным, но занимает ведущее место среди методик диагностирования инфекционных болезней. С помощью него можно значительно увеличить концентрацию фрагментов молекул в пробе. Через 10 дней после инфицирования РНК уже возможно определить в крови.

Этот метод является единственным, позволяющим выявить заболевание на ранних стадиях. Другими способами (напр., биохимическим исследованием крови) это сделать невозможно, так как печень еще не поражена.

Открыл метод в 1993 году биохимик Кэрри Муллис, за что получил Нобелевскую премию. ПЦР стал прорывом в медицине и науке, так как позволил быстро и точно определять инфекции в крови и других биологических материалах человека. Иными словами, метод ускорил развитие диагностики инфекционных заболеваний.

РНК-анализ HCV RNA методом ПЦР является эффективным по следующим причинам:

• имеет хорошую чувствительность — определяется даже малое количество вируса в крови;
• определяется сам вирус, а не побочные продукты, создаваемые им;
• определяется вид возбудителя.

Отличия количественного анализ HCV RNA от качественного

Метод ПЦР включает два основных способа исследования биологического материала на поиск вируса гепатита С:

Эти исследования имеют различные задачи.

Качественный анализ на гепатит с расшифровкой подтверждает наличие вируса после того как в крови уже найдены антитела к этому заболеванию. Если исследование дало положительный результат, значит, болезнь обнаружена. Иными словами, человек инфицирован. Если получен отрицательный результат, это означает, что человек не инфицирован, либо в наличии слишком маленькая концентрация вируса. Эта концентрация не обнаруживается таким способом.

Помимо этого клиническая картина заболевания строится на основании маркеров гепатита С и расшифровки анализа. Основные маркеры — иммуноглобулины (антитела) M и G. Наличие их в крови пациента указывает на нехарактерный процесс для здорового организма. На основании наличия этих антител больному, как правило, устанавливается первичный диагноз.

Количественный анализ назначается при первичном обнаружении антител и при необходимости проведения лечения.

Также количественный анализ на гепатит С назначают при выявлении микст-гепатитов (заражение сразу несколькими вирусами).

Количественный анализ с расшифровкой проводится с целью:

• прояснения окончательного диагноза;
• выстраивания прогнозов относительно течения заболевания и его лечения — продление, сокращение лечения либо изменение тактики;
• мониторинга терапии.

Чтобы результаты были верными, нужно соблюдать установленный режим перед тем как сдавать кровь:

• прийти в лабораторию натощак, последний раз принять пищу можно за 8 часов до процедуры;
• за два дня до исследования запрещен алкоголь, жирные и жареные продукты;
• ультразвуковые исследования, массаж, физиотерапию перед исследованием проводить нельзя;
• за день запрещен прием лекарств, если прием отдельных препаратов невозможно отменить, об этом сообщается до забора крови;
• перед процедурой рекомендуется снизить по возможности физические и нервные нагрузки.

Выполнение этих требований будет залогом получения верных результатов количественного анализа на гепатит С.

Расшифровка количественного анализа

После получения показателей количественного анализа необходимо сделать расшифровку результатов анализов на гепатит С. Результаты вычисляются и в единицах МЕ/мл, и в копиях на мл. Для получения результатов, пересчитанных в копии, применяют несколько методик.

• HCV Monitor (коэффициент пересчета на МЕ — 2,7);
• LCX HCV RNA (коэффициент пересчета на МЕ — 3,8).

Таблица. Расшифровка количественного анализа HCV RNA методом ПЦР.

Такая расшифровка результатов анализов на гепатит С помогает определить степень опасности заболевания в плане возможности его передачи. Чем больше обнаружена концентрация вируса в крови при расшифровке, тем выше вероятность заразить другого человека. Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения.

Норма количественного анализа

Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу.

Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. МЕ/мл, можно говорить о минимальной концентрации вируса в крови, но не об отсутствии заболевания. Нагрузку более 800 тыс. МЕ/мл определяют как высокую. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс. МЕ/мл.

Вероятность ошибочного результата

Получение ошибочного результата возможно. Это может быть объяснено несколькими причинами.

1. Ошибка работы диагностического центра — лаборатории. Иногда нарушаются правила проведения исследования, неверно подготавливаются образцы.
2. Исследуемый образец загрязнен.
3. Определение в крови гепарина — вещества, которое препятствует свертыванию крови.
4. Определение в крови ингибиторов — веществ, задерживающих физико-химические процессы.
5. Применение различных способов и реактивов в разных лабораториях.

Лучше проводить исследование в современной, хорошо себя зарекомендовавшей лаборатории. Для получения правильного результата важна чувствительность системы диагностики. Это нужно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой. Желательно, чтобы чувствительность была не ниже 50 МЕ/мл.

Частота проведения количественного анализа

Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания. Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем.

Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться. Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое. Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс. МЕ. После окончания лечения проводят расшифровку анализа гепатита С для исключения рецидивов.

Полезное видео

Общее представление о том, что такое анализ ПЦР можно составить, посмотрев следующее видео:

No related posts.