Анализ крови методом ифа на маркеры на гепатит с

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник

Гепатит С – инфекционное заболевание печени, вызванное РНК-содержащим вирусом. Медики называют его «ласковым убийцей» за бессимптомное течение в преобладающем большинстве случаев, склонностью к хронизации и способностью провоцировать развитие цирроза и рака печени. Зачастую о том, что эти тяжелые заболевания вызвал именно он, узнают на 3-4 стадии, обнаружив в крови больного маркеры гепатита С.

Источник заражения – человек, точнее – инфицирование возможно при попадании вируса с зараженной кровью в кровоток здорового человека. Возможность заражения гепатитом С создается при:

парентеральном введении лекарственных препаратов (подкожных, внутримышечных инъекциях, внутривенных инъекциях и капельницах) многоразовыми недостаточно обработанными иглами;

переливании крови и компонентов;

косметических манипуляциях с нарушением целостности кожи при использовании инструментов многоразового использования или плохо обработанных – маникюр, педикюр, татуаж;

стоматологических манипуляциях и операциях с теми же предпосылками;

половом контакте при условии нарушения целостности слизистых влагалища, прямой кишки, рта и попадании мельчайших капелек зараженной крови;

инфицировании матери, младенец может заразиться в родах.

Таким образом создаются предпосылки для широкого распространения инфекции. К группам риска относят сотрудников медицинских учреждений, наркозависимых, новорожденных от инфицированных матерей, а также потребителей услуг стоматологических клиник и косметических салонов.

Что такое маркеры гепатита С?

Маркеры гепатита С – это «визитная карточка» вируса, которую он обязательно оставляет при посещении организма-хозяина. Таких «визиток» бывает два вида:

присутствие в крови антигенов – маркеров самого вируса (частицы собственной оболочки или оболочки ядра)

наличие в крови антител-маркеров, выработанных организмом-хозяином при перенесенном заболевании – иммуноглобулинов.

Обнаружить в сыворотке крови маркер – антиген вириона (полноценной частицы) можно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), его присутствие определяется даже в инкубационном периоде – когда признаков заболевания еще нет, вирус только начинает размножаться, захватывая все новые клетки печени. Определение маркера становится возможным с 5-го дня после заражения.

Для определения маркеров-антител, то есть клеточного ответа организма на присутствие вируса, должно пройти какое-то время. Обычно для такого реакции иммунной системы необходимо от нескольких дней до нескольких недель. Выявляют такие маркеры-антитела с помощью иммуноферментного анализа (ИФА).

Кому необходимо сдавать анализ?

Совершенно очевидно, что диагностика наличия маркеров к гепатиту С необходима больным с поражениями печени. А также это исследование назначают в следующих случаях:

при стандартном обследовании перед хирургическими операциями;

при донорстве крови;

при постановке на учет при беременности и повторно перед родами;

при прохождении гемодиализа;

при профосмотрах сотрудников медучреждений, имеющих дело с биологическими жидкостями;

при сомнительном половом контакте.

Кроме того, анализ на маркеры к гепатиту С желательно сдать родственникам больного с установленным диагнозом.

Расшифровка результатов анализов

В первую очередь назначается ИФА для выявления специфических антител к вирусу гепатита С – иммуноглобулинов. Определяют их суммарное количество (анти-HCV) и по отдельности – для класса М и G.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Варианты результатов обследования:

Маркеры-антитела не обнаружены.
Это может означать, что: a) пациент не болен гепатитом С (исключение составляет возможность инфицирования за последние 6 месяцев); b) антитела-маркеры не успели выработаться, так как с начала заражения прошло недостаточное количество времени; c) погрешности в проведении исследования.

Обнаружены маркеры-иммуноглобулины класса М (IgM).
У пациента острая фаза заболевания, вирус активно размножается.

Обнаружены маркеры-иммуноглобулины класса G (IgG).
Свидетельствует о столкновении иммунной системы с вирусом в прошлом или о том, что у пациента хронический вирусный гепатит С.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют вирусную нагрузку с помощью ПЦР.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Если в сыворотке крови низкая концентрация вирионов, выдается заключение об отрицательном результате исследования – качественная оценка.

При количественной оценке – если вирионы в биологических жидкостях присутствуют – определяется их количество в 1 миллилитре исследуемого материала. Свидетельствует о быстроте развития болезни.

При достоверном обнаружении вируса гепатита С с помощью ПЦР проводится его генотипирование.

Может ли анализ быть ошибочным?

Важно помнить, что по однократному положительному результату диагноз гепатита С не выставляется. При случайном обнаружении любого из маркеров анализы пересдаются. Положительным может считаться 3-кратно проведенное обследование с сопоставимыми результатами.

Недостоверными результаты могут быть в случаях:

ошибки исследования или погрешностью самого метода (например, ПЦР является сверхчувствительным анализом и чаще других исследований «грешит» ложноположительными результатами);

проведенной накануне вакцинации;

при аутоиммунных заболеваниях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

новообразованиях;

гипертермии вследствие гриппа или другой инфекции.

Врачей не удивляют недостоверные результаты определения маркеров у беременных и у пациентов со II группой крови.

Что делать, если маркеры гепатита С оказались положительными?

Безусловно, даже случайно выявленное определение маркеров гепатита С требует обращения к специалисту. На сегодняшний день гепатит С излечим полностью! Появились новые современные лекарства, позволяющие навсегда избавиться от вируса. Подробнее читайте в нашей статье: “Эффективные противовирусные препараты от Гепатита С.”

Расшифровка анализов, постановка и верификация диагноза, назначение лечения – прерогатива врача и только врача. Специалист назначит дополнительное обследование, проведет и оценит УЗИ, биопсию печени, назначит адекватное лечение, отследит его эффективность.

Источник

Вирусный гепатит – тяжелая патология печени, которая приводит к различным осложнениям – фиброз, жировая инфильтрация, циррозное поражение. Лечебный эффект напрямую обусловлен своевременностью терапии, поэтому важно как можно раньше диагностировать опасное заболевание.

Маркеры гепатитов – одно из исследований, которое позволяет диагностировать недуг на ранней стадии развития. Оно базируется на выявлении специфических антигенов и антител, которые находятся в сыворотке крови.

Маркеры и их назначение

Особенность вирусных гепатитов в том, что на фоне раннего развития они не проявляются негативной симптоматикой. Когда проявляются симптомы, с которыми пациент идет к доктору, в большинстве случаев уже имеются функциональные нарушения печени.

Маркеры вирусного гепатита B и C – это специфические антигены и антитела в крови. Их определение в сыворотке крови подтверждает наличие патологии. Их можно обнаружить на фоне раннего развития болезни.

Чтобы выявить специфические и серологические маркеры к вирусным гепатитам, в медицинской практике используют разные исследования:

Иммунохимическая реакция крови посредством ИФА.
Реакция иммунной системы на вирусные инфекции.
Специализированное скрининговое исследование.
Иммунологические методики.

В зависимости от целей диагностики врачи назначают два вида исследований – специфический и неспецифический.

Специфическое исследование

Анализ на маркеры гепатита B и C позволяет выявить вид вирусной инфекции, который стал причиной заболевания. Специфическими маркерами выступают антигены гепатитов. Под антигенами понимают отдельные части вируса.

Когда они попадают в благоприятную среду – человеческий организм, то активно участвуют в формировании новых вирусных клеток, что приводит к быстрому прогрессированию патологии.

Неспецифическое исследование

К этому типу маркеров вирусных гепатитов относят антитела к имеющимся антигенам в крови больного. Такой вариант диагностики базируется на возможности организма продуцировать антитела – клетки иммунной системы, которые ориентированы на борьбу с патогенным возбудителем.

Если было выявлено наличие антител к антигенам, то это значит, что имеются патологические процессы в печени.

Маркеры разных видов гепатита

На фоне лабораторной диагностики вирусных гепатитов определение маркеров – один из достоверных способов, позволяющих на ранней стадии выявить болезнь.

Гепатит B

Тяжелое заболевание. На ранней стадии отсутствуют негативные симптомы, морфологические признаки на УЗИ; основной путь передачи инфекции – парентеральный. Однако с помощью маркеров на ранней стадии можно диагностировать заболевание.

В таблице представлены маркеры, которые присутствуют в крови больного на фоне заражения гепатитом B:

Антитела вирусной болезни	HBeAg и HBsAg
Антитела к антигенам	анти-HBs, анти-HBe, анти-HBc

С помощью алгоритма иммуноферментного исследования не только подтверждают отсутствие/наличие заболевания, но и выявляют стадию патологического процесса. Благодаря этому можно составить более точный прогноз, назначить результативную терапию.

Гепатит C

Среди всех гепатитов считается наиболее опасным. Согласно статистике, в мире более 150 млн людей, имеющих патологию в анамнезе.

Каждый год умирает свыше 350 тыс. человек.

Плохая статистика обусловлена периодом инкубации недуга – отсутствием симптоматики либо их незначительным проявлением.

Выявить гепатит в организме можно посредством таких маркеров:

HCV-RNA. Присутствует наличие в крови и печеночных тканях, когда патология находится в острой стадии. Определяется даже сразу после заражения.
Anti-HCV total (совокупные антитела). В крови можно диагностировать через 6 недель после инфицирования. При положительном результате говорят о вирусном агенте в организме. Обнаруживаются даже после полного излечения.
Anti-HCV core IgG. В крови больного определяются только спустя 11 недель после инфицирования. Наличие IgG свидетельствует о хронической форме патологии.
Anti-NS3. Всегда выявляются в крови на фоне острого течения патологического процесса.

Маркеры anti-NS4 и anti-NS5 выявляются только в запущенных случаях, когда наблюдаются функциональные поражения печени. После терапевтического курса их количество уменьшается – это говорит об эффективности проводимой терапии.

Болезнь Боткина и гепатит E

Болезнь Боткина – патология, характеризующаяся острым течением.

Распространенная причина инфицирования – несоблюдение элементарных правил гигиены.

К характерной симптоматике относят:

Пожелтение кожного покрова (не всегда, но в большинстве картин).
Нарушение работы железы.
Увеличение температуры тела.
Боль в правом боку.

Какой-либо особенной подготовки к исследованию не проводится, желательно сдавать кровь натощак. Болезнь отличается быстрым течением, отсутствием тяжелых осложнений, простотой терапии.

При исследовании на болезнь Боткина определяют такие маркеры:

РНК вирусного возбудителя. Признак того, что вирус стремительно размножается.
Свидетельствует о самом факте вирусного заражения.
Анти-ВГА IgG. Или патология в анамнезе, либо наличие иммунитета к болезни Боткина.
Анти-ВГА IgM – острый вирусный процесс.

Гепатит E получил широкое распространение в странах с жарким климатом. Причина – антисанитарные условия проживания людей. Приводит к нарушению функциональности тракта пищеварения, боли в области правого ребра. Расшифровывать маркеры гепатита E должен врач.

В таблице представлены основы расшифровки:

Маркер	Описание
РНК	Положительный результат – следствие активного распространения возбудителя
Ag	Подтверждение гепатита E
Анти-ВГЕ IgM	Острый патологический процесс
Анти-ВГЕ IgG	Перенесенное заболевание, наличие иммунитета

Гепатиты D и G

Под разновидностью D понимают антропонозную инфекцию, диагностируют только совместно с гепатитом типа B.

Симптоматика этих видов похожа, однако когда присоединяется форма D, возрастают риски скопления свободной жидкости в брюшной полости, выраженной отечности.

Маркеры гепатита с расшифровкой анализа:

РНК – активное распространение инфекционного процесса.
Анти-ВГД IgM – будет означать острое течение.
HDAg – наличие заболевания, если результат отрицательный – вируса нет.
Анти-ВГД IgG – пациент ранее болел, есть иммунитет.

Разновидность G возникает только совместно с другими гепатитами в анамнезе человека – при формах B, C, D. Так как симптоматика проявляется только в исключительных случаях, чаще всего протекает в хронической форме.

ИФА позволяет выявить наличие вируса, а ПЦР показывает количественные характеристики. Для диагностики недуга используется несколько методов в совокупности. Прогноз благоприятный при своевременном обнаружении, усугубляется, если присутствует алкогольное/аутоиммунное поражение печени, ВИЧ-инфекция, СПИД и др. тяжелые заболевания.

Стоимость анализов

При подозрении на гепатит пациент получает рекомендации от доктора по поводу диагностики; анализы можно сделать в частных лабораториях, например, Инвитро, Гемотест и др.

Примерная цена исследований:

Анализ на определение болезни – выявление anti-HAV IgG – качественное исследование – 600 рублей, срочно 1000 рублей. При качественном анализе результат отрицательный или положительный.
Количественное исследование на гепатит B путем определения anti-HBs 800 рублей (в результате будет конкретная цифра).
Диагностика гепатита C обойдется в 1500 рублей (два исследования).
Качественное ПЦР исследование гепатита B стоит около 1000 рублей, а количественное 4000 рублей. Ультрачувствительный качественный анализ – 3000 рублей, а количественный 3800 рублей.
Исследование на предмет устойчивости возбудителя к средствам противовирусного свойства – 12 000 рублей.

При выявлении заболевания дополнительно назначаются другие исследования, чтобы оценить состояние печени. Принцип лечения подразумевает комбинированную схему, в которую входят гепатопротекторы (средства улучшают работу печени), ферменты, противовирусные препараты, антибиотики (если выявлен инфекционный процесс) и др. лекарства.

Источник