Анализ пцр на гепатит в качественный что это такое и как его сдают
Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови. Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя.
Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.
Вы знаете как расшифровывается ПЦР?
ДаНет
Что такое ПЦР на гепатит В?
Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма.
По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.
ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.
Показания к исследованию
Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.
Исследования проходят:
- реципиенты донорской крови;
- больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
- инфицированные ВИЧ;
- беременные женщины;
- медицинские работники инфекционных отделений;
- лаборанты, исследующие кровь;
- больные с печеночными патологиями;
- все потенциально зараженные;
- люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.
Количественный ПЦР проводится:
- если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
- после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
- при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.
Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.
Виды ПЦР
Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру.
В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.
Количественный ПЦР на гепатит В
Показатель ПЦР количественный при гепатите B характеризует:
- интенсивность деления вируса в клетках печени;
- способность организма противостоять инфекции;
- правильность выбора противовирусных средств.
В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.
По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.
Качественный ПЦР
Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз.
В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты.
Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.
Расшифровка результатов ПЦР на гепатит В
Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.
Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.
Что делать если при ПЦР подтвердили гепатит В?
Важно обезопасить близких:
- отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
- пользоваться индивидуальным полотенцем;
- изолировать раны.
Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Источник
Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.
Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.
Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.
Что такое метод полимеразной цепной реакции?
Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.
Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.
Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.
Разновидности исследования ПЦР
Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:
- Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
- Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
- Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.
Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.
Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.
Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.
Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.
Показания к проведению
Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:
- Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
- Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
- Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
- Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
- Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
- При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
- Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
- Для контроля результативности проводимой терапии.
- После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.
ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.
Подготовка к проведению исследования и забор материала
Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:
- Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
- Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
- За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
- За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.
За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.
Забор крови происходит следующем образом:
- Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
- Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
- В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
- После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
- К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.
Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.
Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.
Преимущества ПЦР перед другими анализами
У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.
Плюсы исследования представлены в таблице:
| Прямая диагностика возбудителя патологии | Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента. |
| Специфичность исследования | ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки. |
| Высокая степень чувствительности | Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови. |
| Определение всех возбудителей | Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов. |
| Скрыто протекающие инфекции | Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью. |
Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.
Расшифровка результатов
Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.
Качественный
Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.
В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.
Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.
Количественный
Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.
| Результат | Расшифровка |
| Отрицательно | Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно. |
| От 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений. |
| 2,4*10^7 МЕ/мл | РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости. |
Генотипирование
Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.
Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.
Когда ПЦР отрицательно, а ИФА положительно
Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.
Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.
ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.
Стоимость исследования на гепатит С
Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.
В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.
Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:
| Название лабораторной службы | Ценовая политика |
| Хеликс | · Стоимость забора биологического материала – 170 рублей. · Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей. · Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня). · Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей. |
| Инвитро | · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей. · Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей. · Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей. · Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей. · Проведение генотипирования – от 1250 рублей. |
| Гемотест | · Цена количественного исследования 2200 рублей. · Качественная диагностика от 700 рублей. · Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей. · Забор крови из вены около 150 рублей. |
Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.
Источник
Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.
При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.
Виды ПЦР на вирусный гепатит В
Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.
Качественный ПЦР и его трактовка
Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:
- отрицательный результат — вируса нет;
- положительный результат — вирус обнаружен.
Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.
В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.
Количественный ПЦР
Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:
- Перед назначением лечения.
- Для оценки эффективности терапии.
- Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
- Для определения стадии, на которой находится заболевание.
Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:
1 МЕ/мл = 5 копий/мл
Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.
Трактовка количественного ПЦР
При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:
- < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
- от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
- 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
- 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.
Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:
- Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
- Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
- Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
- Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
- Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.
Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:
- ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
- ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
- ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.
Подготовка к обследованию
Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:
- Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
- Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
- Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.
Подводя итоги
На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.
Источник
