Антитела к белкам вируса гепатита с и стадия заболевания

[07-010]
Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С

550 руб.

Определение в крови иммуноглобулинов IgG к белкам вируса гепатита С, которое используется для диагностики этого заболевания.

Синонимы русские

Антитела к белкам гепатита С;

Антитела к ВГС.

Синонимы английские

Antibodies to structural and non-structural proteins of HCV;

Antibodies to HCV.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования;
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Гепатит С – вирусное заболевание печени, отличительной чертой которого является бессимптомное течение и высокая частота прогрессии в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. Основной путь передачи гепатита С – через кровь и ее компоненты. Группы риска по заражению ВГС:

Медицинские работники;
Люди, использующие инъекционные наркотики;
Пациенты с ВИЧ;
Люди, которым были сделаны татуировки с помощью нестерильных инструментов;
Пациенты, получившие переливание крови или ее компонентов до 1992 г.;
Пациенты, получившие трансфузию факторов свертывания крови до 1987 г.;
Пациенты, получающие лечение гемодиализом в течение длительного времени;
Дети, рождённые от матерей с ВГС.

Следует отметить, что по крайней мере в 20 % случаев источник заражения установить не удается. В России наблюдается рост заболеваемости гепатитом С: в период с 1999 по 2011 гг. заболеваемость хроническим ВГС выросла в 3 раза. Как правило, пациенты с ВГС не догадываются о своем заболевании.

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-вирус, принадлежащий семейству Flaviviridae. При транскрипции его генома образуется единый белок длиной около 3000 аминокислот, который затем разрезается с помощью пептидаз клетки-хозяина и вирусных пептидаз с образованием структурных и неструктурных белков:

Структурные белки (коровый белок, Е1 и Е2, от англ. envelope glycoproteins – гликопротеины оболочки) необходимы для формирования вирусного капсида;
Неструктурные белки (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B, от англ. non-structural – неструктурные) выполняют различные регуляторные функции.

В ответ на заражение вирусом гепатита С в организме человека начинают вырабатываться антитела – иммуноглобулины M и G, которые можно исследовать для диагностики гепатита. Следует отметить, что при гепатите С синтез иммуноглобулинов М может наблюдаться на разных стадиях заболевания, как при остром, так и при хроническом гепатите, и поэтому не имеет никакого диагностического значения. Это важное отличие диагностики гепатита С от гепатита В (выявление иммуноглобулинов М при гепатите В наблюдается только в острую стадию). Таким образом, все серологические тесты для диагностики гепатита С основаны на выявлении иммуноглобулинов G к белкам этого вируса.

Структурные и неструктурные белки иммуногенны в разной степени. Показано, что наиболее выраженными иммуногенными свойствами обладают следующие белки (в скобках указан процент пациентов с хроническим гепатитом С, у которых в крови обнаруживаются антитела к указанному белку):

Коровый белок (97 %);
NS4B (86 %);
NS3 (68 %);
NS5A (53 %).

Менее иммуногенны белки E2 (31 %), NS4A(28 %) и E1 (22 %). NS2 и NS5B имеют очень слабые иммуногенные свойства, и антитела к ним у пациентов с ВГС выявляются редко.

Антитела к ВПС могут быть определены в крови приблизительно через 8 недель после первичного заражения. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться у людей с иммунодефицитом (например, ВИЧ-инфицированных), почечной недостаточностью и эссенциальной смешанной криоглобулинемией. Ложноположительные результаты также встречаются.

Вирусы гепатита С неоднородны по генетическому составу. На этом основании выделяют 6 генотипов ВПГ, геномы которых различаются на 30-35 %, и множество подтипов, различающихся на 20-25 %. В восточной Европе и США чаще встречаются генотипы 1a и 1b, тогда как для других стран характерны другие генотипы (например, Египет – генотип 4, Южная Африка – генотип 5). Показано, что иммунный ответ пациентов, инфицированных разными генотипами ВГС, различается. Это особенно справедливо в отношении антител к белкам E1, E2, NS3, NS4A и NS5A.

Качественный и количественный состав антител к ВГС у пациента остается достаточно постоянным в течение заболевания, в том числе и после проведенного лечения.

Антитела к гепатиту С – чувствительный, но недостаточно специфичный метод диагностики этого заболевания. Поэтому серологические тесты – это скрининговые тесты диагностики гепатита. При получении положительного результата исследования антител на гепатит С обязательно проводят подтверждающее исследование – анализ на РНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР). Кроме того, при подтверждении диагноза «гепатит С» может понадобиться генотипирование ВГС и гистологическое исследование печени или неинвазивные методы определения состояния печени (такие как ФиброМакс).

Для чего используется исследование?

Для диагностики гепатита С.

Когда назначается исследование?

При профилактическом обследовании, особенно если пациент принадлежит к группе риска по гепатиту С;
в некоторых случаях при устройстве на работу.

Что означают результаты?

Референсные значения

Выдается по компонентам:

IgG к антигену core

IgG к антигену NS3

IgG к антигену NS4

IgG к антигену NS5

Результат: орицательный.

Положительный результат:

гепатит С;
ложноположительный результат (чаще у пациентов, не относящихся к группам риска, например доноров крови).

Отрицательный результат:

норма;
ложноотрицательный результат (сопутствующая ВИЧ-инфекция, почечная недостаточность, эссенциальная смешанная криоглобулинемия).

Что может влиять на результат?

Время, прошедшее с момента заражения;
Состояние иммунной системы;
Сопутствующие заболевания почек;
Генотип вируса гепатита С.

Важные замечания

Это скрининговый тест. При получении положительного результата необходим дополнительный, подтверждающий тест (определение РНК вируса с помощью ПЦР);
результаты анализа следует интерпретировать с учетом дополнительных клинических, лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

[09-012] HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

[09-011] HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]

[09-010] HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]

[12-016] Гистологическое исследование гепатобиоптата (биоптата печени) с использованием стандартных методик

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики.

Литература

Kamili S, Drobeniuc J, Araujo AC, Hayden TM. Laboratory diagnostics for hepatitis C virus infection. Clin Infect Dis. 2012 Jul;55 Suppl 1:S43-8.
Virol J. 2009 Jun 23;6:84. doi: 10.1186/1743-422X-6-84. Sillanpää M, Melén K, Porkka P, Fagerlund R, Nevalainen K, Lappalainen M, Julkunen. Hepatitis C virus core, NS3, NS4B and NS5A are the major immunogenic proteins in humoral immunity in chronic HCV infection.Virol J. 2009 Jun 23;6:84.
Стела Бивол, Аня Саранг. Гепатит С в России: эпидемия бездействия. Фонд содействия защите здоровья и социальной справедливости им. Андрея Рылькова, 2013.

Источник

Фото 1 Гепатит С — один из наиболее опасных диагнозов, с которым может столкнуться человек. Это серьезное воспалительное заболевание печени.

Заражение всегда происходит через кровь, и лишь в 20% случаев острого течения заболевания его возможно вылечить. В остальных 80% гепатит С переходит в хроническую форму и нередко приводит к летальному исходу. Основным методом диагностики является определение наличие антител к заболеванию.

Что означает, если тела обнаружены?

Когда в организм человека попадает вирус, долгое время он не дает о себе знать. В этом заключается сложность диагностики и невозможность выявить заболевание до того, как человек успел заразить кого-либо из окружающих. Для гепатита С характерен долгий инкубационный период, иными словами — до первой симптоматики может пройти продолжительное время.

Во время проникновения любого инородного объекта в организм человека, будь то вирус, инфекция, другой болезнетворный организм, иммунная система сразу же его распознает и направляет все свои силы на борьбу с патогенным объектом. Это всегда очень мелкие, микроскопические частицы, которые человек не в состоянии увидеть невооруженным взглядом или почувствовать их проникновение.

Когда иммунная система обнаруживает чужеродный объект, она посылает сигналы о необходимости выработки иммуноглобулинов. Это специфические защитные вещества, которые связываются с патогеном, чтобы его уничтожить. Если речь идет, например, о банальном ОРЗ, иммунитету либо хватает сил справиться с вирусом, либо сразу же появляются симптомы — кашель, насморк, повышение температуры, слабость, и тогда человек обращается к врачу и начинает помогать иммунитету уничтожать болезнетворные частички путем приема противовирусных препаратов или антибиотиков.

При гепатите С иммунитету не хватает сил справиться с вирусом, но и симптоматика не появляется сразу. Пока вирус находится в организме, белковые соединения крови, выполняющие защитную функцию, — иммуноглобулины — продолжают образовываться.

Диагностика осуществляется обычно таким способом: небольшое количество крови пациента смешивают с чистыми антигенами (вирусами). Далее наблюдают за реакцией: если в крови присутствуют антитела к вирусу, то они свяжутся с антигенами, образуя прочный комплекс “антитело-антиген”. Соответственно, врач делает вывод о присутствии в организме гепатита С.

ВНИМАНИЕ! Наличие в крови антител к гепатиту С не является однозначным поводом к постановке диагноза.

В некоторых случаях возможен ложноположительный результат, поэтому обнаружение антител к гепатиту С — это не подтверждение того, что человек заражен. При таком результате требуется пройти еще несколько диагностических процедур.

Классификация

Существует несколько типов антител к гепатиту С, которые могут быть обнаружены при диагностике. Что они означают и в чем их отличия?

Иммуноглобулины G (анти-HCV IgB) встречаются чаще всего и в самом большом количестве. Антитела этого типа обнаруживаются на начальных этапах заражения, при вялотекущем течении болезни либо при инфицировании в прошлом. При наличии иммуноглобулинов к гепатиту С требуется дополнительное исследование ПЦР.
Антитела к ядерным структурам (анти-HCVcoreIgM) патогенного объекта. Маркеры этого типа обнаруживаются сразу же после заражения или в моменты острого протекания заболевания: при снижении иммунитета, при обострении хронической формы. Во время ремиссии антитела практически никогда не встречаются.
Антитела к структурным белковым соединениям возбудителя (анти-HCV total). Этот показатель — общее количество иммуноглобулинов G и М — очень важен в определении стадии заболевания и позволяет сделать вывод уже спустя 1-1,5 месяца после проникновения возбудителя в организм. Положительный маркер позволяет говорить о перенесенном заболевании или ее хроническом характере, потому как антитела сохраняются на всю жизнь.
Антитела к неструктурным белкам возбудителя (анти-HCVNS). Этот маркер указывает на наличие одного или сразу нескольких антител из трех: NS3, NS4, NS5. NS3 — маркер, который обнаруживается в самом начале заболевания и выступает в роли индикатора инфицирования. Если количество антител продолжает оставаться большим на протяжении долгого времени, можно сделать вывод о приобретении хронического характера заболевания.Другие же два вида маркеров характерны для поздней стадии гепатита. NS4 отражает степень поражения органа, а NS5 — показатель перехода гепатита в хроническую форму. Как только их количество начинается снижается, можно прогнозировать ремиссию.

Существует еще один маркер — HCV-RNA, который можно выявить только с применением высокочувствительных тестов. Суть исследования заключается в поиске генетического кода возбудителя в крови человека. Достоинство этого метода диагностики в возможности выявить заболевание еще на доклинической фазе, когда антитела отсутствуют.

Время появления

Разные виды антител появляются спустя разное время после попадания в организм возбудителя. Благодаря этим особенностям можно выявить заболевание на начальных этапах, определить стадию гепатита, форму (острую или хроническую), а также уровень активности вируса.

Раньше всего можно обнаружить иммуноглобулины М: уже в первые 6 недель после попадания вируса в организм. Как только их число начинает снижаться, можно говорить об окончании острой фазы и переходе гепатита в хроническую форму.
Антитела к суммарным иммуноглобулинам могут быть обнаружены на втором месяце инфицирования
Спустя 3 месяца после заражения обнаруживаются иммуноглобулины G. Наличие антител этого типа в крови говорит о переходе гепатита в хроническую фазу.
Маркеры к неструктурным белкам выявляются в разное время: NS3 обычно обнаруживается в первые 2-3 месяца после заражения, а NS4 и NS5 — на более поздних стадиях заболевания.

Способы определения

Фото В настоящее время для диагностики гепатитов применяются две группы методов:

Серологический метод, или иммуноферментный анализ (ИФА).
Молекулярно-биологический.

Каждый из этих методов может применяться и для скрининга, и для подтверждения диагноза, и рассматриваться в рамках пролонгированного мониторинга пациента, вылечившегося от гепатита С.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Данный метод эффективен на ранних стадиях заболевания, когда никаких внешних признаков гепатита не обнаружено. Для исследования требуется антиген — вирус гепатита С — и кровь пациента. На лабораторном стекле антиген и биологический материал смешиваются, после чего специалист изучает раствор под микроскопом с целью выявления антител к HCV.

СПРАВКА! ИФА позволяет не только выявить наличие антител, но и по типу обнаруженных маркеров сделать вывод о стадии и форме протекания гепатита С.

По результатам одного только ИФА нельзя ставить диагноз. Обычно обнаружение маркеров является сигналом для дополнительной диагностики при помощи метода ПЦР или повторного ИФА.

По словам специалистов, точность данного метода достигает 95%. Однако с помощью иммуноферментного анализа невозможно выявить наличие самого вируса, а присутствие в крови антител может свидетельствовать о уже перенесенном гепатите С или другом заболевании (например, аутоиммунном). И если говорить о вероятности обнаружения антител в 95%, то у 40% из них сам вирус может быть не обнаружен. Поэтому ИФА недостаточно, чтобы диагностировать гепатит С, и в любом случае требуется дополнительное исследование — с помощью метода RIBA.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Наиболее информативным и точным методом диагностики, по которому уже можно судить о наличии гепатита С, является ПЦР. Отличие этого метода в том, что с его помощью обнаруживают не антитела к вирусу, а сам вирус, точнее — его РНК.

Так, если при помощи ИФА можно только сказать, что инфицирование есть или имело место быть, но ПЦР позволяет определить активность вируса, прогнозировать исход заболевания.<

Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью метода ПЦР возможно уже через 1-2 недели после заражения, поэтому данный метод считается более достоверным.

Несмотря на высокую точность метода, его тоже нельзя считать основанием для постановки диагноза.

ВНИМАНИЕ! По рекомендациям ВОЗ постановка диагноза возможна только в том случае, если вирус в крови человека был обнаружен трижды.

В остальном метод ПЦР применяется с разными целями:

В качестве подтверждения или опровержения результатов ИФА;
Для отделения гепатита С от других форм гепатита;
Для выявления острой стадии гепатита С;
Для разделения инфицирования новорожденных от серопозитивных по вирусу гепатита С матерей;
Для отслеживания эффективности терапии.

Расшифровка результатов

Фото 4 Если говорить об иммуноферментном анализе, там может быть только два результата: положительный или отрицательный. В первом случае говорят, что антитела к вирусу гепатита С обнаружены, во втором — нет. Ни один, ни другой результат не могут считаться истинными, пока не будет проведено несколько анализов либо исследований разными методами.

В исключительных случаях требуется количественное обозначение результатов: тогда наличие антител выражается в цифрах или нескольких знаках “+” или “–”.

Метод ПЦР также может выражать количественные или качественные показатели. Количественный анализ позволяет сделать вывод об интенсивности развития заболевания, эффективности лечения или, напротив, развитии резистентности к противовирусным препаратам.

СПРАВКА! Количественное определение РНК вируса позволяет сделать прогноз об эффективности лечения интерфероном-альфа.

Так, в зависимости от количества вирусных частиц, выделяют низкий (от 102 до 104), средний (от 105 до 107) и высокий (свыше 108) уровень концентрации в организме.

Качественное обозначение результатов ПЦР-исследование также выражается в знаках “+” и “–” и означает, что вирус либо присутствует, либо отсутствует.

Почему антитела в крови есть, а вируса нет?

Ситуация, при которой антитела обнаружены, а вируса гепатита С нет, называется ложноположительный результат. Это основная причина, которая не позволяет ставить диагноз на основе только данных ИФА. Ложноположительный результат нередко встречается у беременных, при аутоиммунных заболеваниях, при проведении анти-ВИЧ-терапии и других заболеваниях.

Еще одно возможное объяснение — это уже вылеченное заболевание. То есть, по сути, гепатит С в течение некоторого времени протекал бессимптомно или был принят за другое заболевание (иногда — обычное ОРЗ), но иммунитет сам смог побороть вирус гепатита С. Наличие антител G в крови говорит о том, что иммунитет уже сталкивался с вирусом, но если результаты ПЦР-теста отрицательные, беспокоиться не о чем.

При обнаружении специфических антител в крови человека необходимо сдавать повторный анализ через 2-3 недели. После этого может потребоваться проведение иных клинических, инструментальных, серологических и биохимических исследований.

Полезное видео

Также рекомендуем посмотреть видео, в котором рассказывается о диагностике гепатита С:

Заключение

Анализ на выявление антител к гепатиту С — показательный, но не ключевой метод диагностики. Нередко положительный результат ИФА шокирует беременных женщин или тех, у кого никогда не было подозрения на гепатит С. На основании одного только ИФА или ПЦР нельзя ставить диагноз: требуются дополнительные методы исследования, в том числе — биопсия и УЗИ печени, повторные серологические или биохимические анализы, которые уже могут стать поводом для диагностирования гепатита С. В настоящее время наиболее точным и информативным считается метод ПЦР.

Источник