Антитела к гепатиту с коэффициент позитивности

Вирусный гепатит С представляет серьезную медико-социальную проблему. Около 180 млн. человек в мире сегодня страдают этим заболеванием, 350 тысяч ежегодно умирает. Длительное скрытое (бессимптомное) течение заболевания приводит к запоздалой диагностике. Анализ на гепатит С проводится с целью диагностики заболевания, дифференциальной диагностики, с его помощью определяют ранее перенесенное заболевание «на ногах».

Исследование применяется у лиц с симптомами гепатита С, повышенным уровнем ферментов печени, при получении сведений о перенесенном ранее заболевании неуточненной этиологии, у лиц из групп риска и скрининговых исследованиях.

Диагностика гепатита С проводится в 2 этапа:

1 этап. Определение наличия в сыворотке крови антител к вирусу (анти HCV).

2 этап. При наличии анти HCV проводится тест на наличие РНК (рибонуклеиновой кислоты) методом ПЦР на гепатит С. Тест позволяет выявить фазу процесса — «активная/неактивная», решить вопрос о необходимости лечения. Известно, что около 30% инфицированных лиц, самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются. С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.

Степень поражения печени определяется с помощью биопсии или других инвазивных и неинвазивных тестов (например, фибротест). Степень стеатоза печени определяется с помощью стеатотеста. Во всех случаях диагностика гепатита С должна базироваться на данных эпидемиологического расследования, клинике заболевания и данных биохимического исследования крови.

Рис. 1. Тяжелые последствия вирусного поражения печени — напряженный асцит.

Анализ на гепатит С: анти HСV

Антитела к вирусам (анти HCV) являются специфическими маркерами инфицирования. В организме больного человека к белкам вируса (антигенам) вырабатываются специфические антитела — иммуноглобулины класса IgM и IgG (анти HCV IgM/IgG).

При получении положительного результата на антитела выполняется подтверждающий тест — определение суммарных антител к структурным и неструктурным белкам вируса. К структурным оболочечным белкам вируса Е1 и Е2 вырабатываются aнти HCV IgM, нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG), к 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG).

Для выявления антител к вирусу гепатита С используется иммуноферментный анализ (ИФА). Для подтверждения (+) результатов ИФА применяют подтверждающие тесты — RIBA (рекомбинатный иммуноблотинг), реже Inno-Lia (анализ синтетических пептидов).

Анализ на анти HCV IgM

Антитела IgM появляются в сыворотке крови через 4 — 6 недель после инфицирования и быстро достигают максимума. По окончании острого процесса (через 5 — 6 мес.) их концентрация падает.
Длительная регистрация наличия анти HCV IgM говорит о том, что гепатит С приобрел хроническое течение.
Повышение уровня IgM в период хронического течения говорит о реактивации инфекционного процесса.
Уровень иммуноглобулинов IgM позволяет проводить оценку эффективности лечения.

Анализ на анти HCV IgG

Антитела IgG появляются в сыворотке крови больного через 11 — 12 недель после инфицирования. На 5 — 6 месяце регистрируется пик концентрации. Далее антитела сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и период выздоровления.

Анализ на суммарные антитела к вирусу гепатита С

Суммарные антитела к вирусу (аnti HCV total) используются для диагностики «свежих» случаев заболевания. Суммарные антитела — это антитела нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG) и 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG) — aнти HCV NS3, aнти HCV NS4 и aнти HCV NS5.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С появляются в сыворотке крови инфицируемого спустя 11 — 12 недель от начала инфицирования, достигают пика к 5 — 6 месяцу и сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и в течение 5 — 9 лет после периода выздоровления.

Каждый из видов антител имеет самостоятельное диагностическое значение:

Анти HCV C (cor) являются основными показателями контакта с вирусами гепатита С.
Анти HCV NS3 выявляются одними из первых в процессе сероконверсии (выработки антител в ответ на присутствие вируса), указывают на остроту инфекционного процесса и свидетельствуют о высокой вирусной нагрузке. С их помощью определяется гепатит С у больных, не подозревающих у себя наличие инфекции. Продолжительное нахождение анти HCV NS3 в сыворотке крови говорит о высоком риске хронизации процесса.
Анти HCV NS4 говорят о том, что гепатит С имеет длительное течение. По уровню титров антител можно судить о степени поражения печени.
Анти HCV NS5 указывают на наличие вирусной РНК. Их обнаружение в острый период является предвестником хронизации процесса. Высокие титры антител на фоне лечения говорят о том, что больной не отвечает на лечение.
Анти HCV NS4 и анти HCV Данный вид антител появляются на поздних сроках развития гепатита. Их снижение указывает на формирование ремиссии инфекционного процесса. После излечения титры антител NS4 и NS5 снижаются в течение 8 — 10 лет. От повторного заражения этот вид антител не защищает.

Рис. 2. Макропрепарат. Цирроз печени — грозное осложнение вирусного гепатита С.

к содержанию ↑

Расшифровка анализа на гепатит С — анти HСV

Отсутствие антител к вирусу гепатита С обозначается термином «Норма». Однако это не всегда это обозначает отсутствие заболевания у человека. Так отсутствие антител в крови у инфицированного человека регистрируется до момента их появления в крови — в срок до 6-и месяцев с момента заражения (в среднем через 12 недель). Период отсутствия антител в крови инфицируемого называется «серологическим окном». Высокой специфичностью (до 99,7%) обладают тест-системы 3-го поколения (ELISA-3). Около 0,3% приходится на получение ложноположительных результатов.

Наличие анти HCV свидетельствуют о текущей инфицированности или перенесенной в прошлом инфекции.

Обнаружение антител IgM и антител Corе IgG , нарастание титров антител Corе IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков острого гепатита говорит об остром периоде заболевания.
Обнаружение антител IgM, анти HCV Corе IgG, анти HCV NS IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков заболевания указывает на реактивацию хронического гепатита С.
Обнаружение анти HCV Corе IgG и анти HCV NS IgG при отсутствии клинических и лабораторных признаков заболевания и отрицательном результате ПЦР говорит о наличии у больного хронического гепатита в латентной фазе.

Рис. 3. Макропрепарат печени. Первичный рак печени — грозное осложнение гепатита С.

к содержанию ↑

ПЦР на гепатит С

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является «золотым стандартом» диагностики вирусного гепатита С. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять генетический материал вирусов (РНК) даже если их в исследуемом материале единицы. ПЦР способна выявлять РНК вирусов задолго до появления антител в сыворотке крови, но не ранее чем с 5-го дня от момента инфицирования. При заболевании с помощью ПЦР РНК вирусов обнаруживаются не только в сыворотке крови, но и в биоптатах печени.

Полимеразная цепная реакция позволяет определить наличие или отсутствие в крови вирусов гепатита С и решить вопрос о начале лечения. Известно, что до 30% больных самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются.
С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.
ПЦР применяется с целью контроля за эффективностью лечения.
ПЦР применяется при отсутствии антител в крови, но при наличии весомых подозрений на заболевание (повышение уровня щелочной фосфатазы, общего билирубина, превышение в 2 раза печеночных ферментов АСТ и АЛТ).
Анализ ПЦР на гепатит С используется с целью контроля над внутриутробной передачей вирусов гепатита.

к содержанию ↑

Вирусная нагрузка при гепатите С

С помощью анализа ПЦР возможно определить не только наличие РНК вирусов в крови — качественный анализ (обнаружено/не обнаружено), но и их количество — вирусную нагрузку (количество единиц вирусной РНК в 1 мл крови). Количественный показатель ПЦР применяется с целью контроля эффективности лечения.

Методы, применяющиеся для проведения ПЦР, обладают разной чувствительностью. В РФ согласно методическим рекомендациям 2014 года рекомендовано применять методики, обладающие чувствительностью 25 МЕ/мл и менее. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации по изучению печени 2015 года предлагается применять методики определения вирусной РНК, обладающих чувствительностью 15 МЕ/мл и менее.

В зависимости от чувствительности тест-системы больной получает тот или иной результат исследования:

Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR составляет 600 МЕ/мл (анализатор старого поколения).
Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR ВГС-TEST составляет 50 МЕ/мл, что составляет 100 копий в 1 мл.
Минимальная чувствительность анализатора РеалБест РНК ВГС составляет 15 МЕ/мл, что составляет 38 копий в 1 мл (входит в группу современных тест-систем). Специфичность данных анализаторов составляет 100%. С их помощью выявляются РНК вирусов гепатита С субтипов 1а и 1b, 2а, 2b, 2c и 2i, 3, 4, 5а и 6.

При наличии копий РНК ниже порога чувствительности данного анализатора пациент получает ответ «не обнаружено».

Рис. 4. Пример анализа ПЦР (количественный тест). Определение вирусной нагрузки.

Интерпретация результатов анализа ПЦР на гепатит С

Отсутствие РНК вируса указывает на отсутствие инфицирования.
Отсутствие РНК в анализе на фоне наличия антител в крови указывает на исчезновение болезни под влиянием лечения или при самоизлечении.
В ряде случаев вирус присутствует в крови, но в подпороговых уровнях, когда его концентрация не улавливается анализаторами. Такие больные остаются опасными в плане заражения.
Выявление РНК вируса в течение 6 месяцев подряд у больных с острым гепатитом С говорит о том, что заболевание приняло хроническое течение.
Снижение вирусной РНК в анализах на фоне лечения говорит об эффективности проводимой терапии и наоборот.

Рис. 5. Макропрепарат. Жировой гепатоз — одно из последствий заболевания.

к содержанию ↑

Основные биохимические анализы крови при гепатите С

Биохимические анализы крови помогают установить функциональное состояние многих органов и систем человека.

Анализ крови на печеночные ферменты АЛТ и АСТ

Печеночные ферменты синтезируются внутриклеточно. Они принимают участие в синтезе аминокислот. Их большое количество находится в клетках печени, сердца, почек и скелетной мускулатуры. При поражении органов (нарушение целостности клеточных мембран) ферменты поступают в кровь, где их уровень повышается. Повышенный уровень ферментов регистрируется при поражении (лизисе, разрушении) печеночных клеток, инфаркте миокарда и других заболеваниях. Чем выше уровень трансаминаз в сыворотке крови, тем больше клеток подверглось разрушению. АЛТ преобладают в клетках печени, АСТ — в клетках миокарда. При разрушении клеток печени уровень АЛТ повышается в 1,5 — 2 раза. При разрушении клеток миокарда уровень АСТ повышается в 8 — 10 раз.

При диагностике хронического вирусного гепатита необходимо обращать внимание на соотношение АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса). Превышение уровня АСТ над АЛТ говорит о поражении печеночных клеток.

Норма АСТ для мужчин составляет до 41 ед./л, женщин — до 35 ед./л, детей старше 12 лет — до 45 ед./л.
Норма АЛТ для мужчин составляет до 45 ед./л, женщин — до 34 ед./л, дети 12 лет и старше — до 39 ед./л.
В норме (у здоровых людей) коэффициент АСТ/АЛТ имеет значение от 0,91 — 1,75.

Анализ крови на билирубин

Билирубин является продуктом распада гемоглобина. Билирубин в крови содержится в виде непрямого (до 96%) и прямого (4%). Процесс распада этого вещества происходит, в основном, в клетках печени, откуда с желчью выводится из организма. При разрушении клеток печени уровень билирубина в сыворотке крови возрастает. В норме содержание общего билирубина составляет менее 3,4 — 21,0 мкмоль/л. При уровне 30 — 35 мкмоль/л и выше билирубин проникает в ткани, из-за чего кожа и склеры приобретают желтушную окраску.

Рис. 6. Желтуха — один из признаков поражения печени.

Все о гепатите С

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕСтатьи раздела «Гепатит С»Самое популярное

ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?

Подпишитесь на нашу рассылку!

Источник: microbak.ru

Особенности метода

Анализ на выявление в крови человека антител к вирусу гепатита типа C проводится путем присоединения к молекуле иммуноглобулина чужеродного микроорганизма (антигена). Присоединенный энзимный фермент играет роль своеобразной метки. Она позволяет проследить за иммунохимической реакцией, а также одним из ее компонентов.

В качестве компонентов иммуноферментного анализа могут выступать:

антитела;
антитела, помеченные специальным ферментом;
антигены;
субстраты ферментов;
индикаторные красители.

При попадании в организм человека вредоносных чужеродных микроорганизмов защитные силы начинают вырабатывать иммуноглобулины (антитела). Впоследствии они воздействуют на антигены и нейтрализуют их. Такое взаимодействие приводит к образованию антитела-антигена, имеющего свои показатели количества и качества. Именно они свидетельствуют о наличии либо отсутствии в организме HCV-инфекции. В случае если результат иммуноферментного анализа положительный, имеет место вирус гепатита типа С.

Современные технологии в медицине позволяют значительно сократить сроки выявления вируса гепатита, протекающего в острой форме. Благодаря диагностическим системам третьего поколения также представляется возможным повысить специфичность и чувствительность иммунохимической реакции.

Основным исследуемым материалом при проведении ИФА выступает венозная кровь (в том числе донорская). По показаниям могут производить забор спинномозговой жидкости или околоплодных вод.

Положительный результат метода ИФА на гепатит типа С не всегда свидетельствует о наличии вирусной инфекции в организме. В более чем 35 % случаев в крови вирусных антигенов не обнаруживается, что приводит к ложноположительному результату.

Метод позволяет следить за количественными и качественными изменениями, разграничением острой и хронической формы гепатита С. Однако для определения активности патологического процесса он малоэффективен. Для более точного подтверждения наличия HCV-инфекции следует применять также другие методы диагностики патологии.

Показания к проведению ИФА

Метод выявления видовой и количественной концентрации чужеродных микроорганизмов (антигенов) при помощи иммуноглобулинов и ферментов проводится в несколько этапов. На основании изменения цвета и количественного показателя фермента врач может диагностировать у человека гепатит типа C.

В большей степени заболеванию подвержены следующие категории людей:

Пациенты, перенесшие хирургические вмешательства, а также заболевания внутренних органов и систем.
ВИЧ-инфицированные (инфицированные вирусом иммунодефицита человека). Большой процент людей, входящих в эту группу, составляют наркозависимые люди.
Медицинские работники.
Сотрудники правоохранительных органов.
Беременные женщины.

Гепатиты вирусного происхождения нередко приводят к развитию онкологического заболевания (например, рака печени). Именно поэтому сдавать кровь на иммуноферментный анализ следует в первую очередь людям, входящим в основную группу риска, а также больным с острой либо хронической формой гепатита.

По показаниям врач может назначить проведение метода ИФА пациентам, у которых диагностируется:

ИППП (инфекции, передающиесяполовым путём);
заболевания вирусной природы происхождения (папилломавирус, герпетическая инфекция, гепатит и т. д.);
аллергический характер патологии;
иммунодефицитное состояние;
онкология.

Метод ИФА позволяет лечащему врачу оценить эффективность назначенной медикаментозной терапии, определить гормональный уровень пациента. Перед хирургическим вмешательством одним из необходимых исследований также выступает лабораторное изучение крови.

Преимущества и недостатки

ИФА гепатит С позволяет выявлять на ранней стадии, а также в бессимптомной и безжелтушной формах. Как и у любого метода диагностики, он имеет ряд преимуществ и недостатков.

Среди положительных особенностей ИФА специалисты выделяют:

Точность качественных и количественных показателей. Чувствительность метода превышает другие исследования на выявление гепатита в десятки раз.
Значительное сокращение сроков выявления вирусной инфекции благодаря современным диагностическим системам.
Невысокая цена по сравнению с другими исследованиями на выявление гепатита у человека.
Возможность диагностирования заболевания печени на ранней стадии при отсутствии выраженных симптомов.
Поэтапное проведение исследования с использованием автоматизированных процессов.

Несмотря на высокую точность ИФА, более чем в 35 % случаев при положительном результате вирус гепатита у пациента не выявляется. Нередко тест не подтверждает патологию, что свидетельствует о сомнительном или отрицательном результате.

На достоверность исследования в той или иной степени влияет:

Прием лекарственных препаратов.
Нарушения обменных процессов в организме.
Наличие некоторых патологий хронического характера, способствующих активной выработке иммуноглобулинов.

Учитывая недостатки результатов опыта инвитро методом ИФА, пациенту назначаются дополнительные исследования. Для достоверного обнаружения антител к вирусной инфекции гепатита С применяется метод ПЦР (полимеразной цепной реакции) либо RIBA (рекомбинантный иммуноблоттинг).

Если делать ПЦР-анализ, можно практически со 100 % точностью обнаружить количественные и типовые показатели любого возбудителя хронического заболевания с вялотекущим течением.

Что выявляет и как проводится исследование

Анализ методом ИФА способен выявить широкий ряд заболеваний у человека.

Помимо обнаружения антител гепатита всех видов, положительный результат теста может свидетельствовать о наличии в организме следующих патологий:

вируса иммунодефицита человека;
герпетической инфекции;
сифилиса;
ИППП (уреаплазмоза, хламидиоза и др.);
папилломавируса;
цитомегаловируса.

Исследование также является своеобразным маркером по обнаружению злокачественных новообразований, генетических патологий, гормональных нарушений, а также сбоев в функционировании эндокринной системы.

Подготовка к сдаче биологического материала на выявление вируса гепатита С подразумевает отказ от приема пищи и медикаментов за 12 часов до проведения исследования. Также необходимым условием является воздержание от употребления алкоголя, жирных, жареных и соленых блюд.

В медицинской практике применяются методы прямого и непрямого иммуноферментного анализа. Каждый из них проводится поэтапно.

Прямой метод ИФА

Основные этапы при проведении прямого теста заключаются в следующем:

Вначале лаборант производит забор крови из вены (либо другого биологического материала), а затем помещает ее в специальные емкости.
Чужеродные микроорганизмы (антигены) в течение 20 минут начинают прикрепляться к ним.
Специалист добавляет иммуноглобулины (антитела) к найденным антигенам для образования иммунной реакции. При этом компоненты оставляются на несколько часов.
Неприкрепленные антигены удаляются путем выливания содержимого из емкостей.
Материал ополаскивается раствором, а затем обрабатывается ферментами и оставляется на один час.
Цвет и концентрация содержимого анализируются благодаря использованию колориметрии.

Если количественный показатель содержимого превышает допустимые нормы, то это свидетельствует о наличии вируса гепатита С в организме человека.

Непрямой метод ИФА

Подразумевает взаимодействие непомеченных иммуноглобулинов с антигенами, к которым впоследствии присоединяют помеченные антитела.

В начале у пациента берется кровь из вены. Затем биологический материал помещается в специальные емкости примерно на полчаса. При этом непомеченные антитела присоединяются к стенкам емкостей. Затем к ним добавляются помеченные антитела. В результате их взаимодействия образуется иммунный комплекс «антитело-антиген».

По истечении 4 часов содержимое емкостей выливается, а неприкрепленные микроэлементы удаляются. Лаборант присоединяет помеченные антитела к уже образовавшемуся комплексу, при этом происходит иммунная реакция «антитело-антитело-антиген».

После повторного удаления незакрепленных микроэлементов в емкость добавляется специальный фермент, меняющий цвет и количественные показатели содержимого. На основании полученного результата специалист сверяет данные и делает заключение.

Непрямой метод считается более достоверным способом выявления вируса гепатита С в организме. Полученная иммунная реакция позволяет также определить наличие иных заболеваний и патологических изменений в органах и системах человека.

Расшифровка результатов

При проведении ИФА внимание уделяется наличию либо отсутствию антител классов IgA, IgG и IgM. Количественные показатели этих антител сверяются с данными специальной таблицы.

Согласно ей, расшифровка результатов сводится к следующему:

Если все три типа показателей не определяются, у человека наблюдается полное выздоровление.
При одновременном положительном результате по всем трем показателям, наблюдается острая форма вирусной инфекции.
Если определяются антитела класса IgG, при этом остальные классы не выявлены, то у человека развился постинфекционный иммунитет.
На хронический характер заболевания указывают положительные показатели антител классов IgG и IgA. При этом они остаются неизменными даже после медикаментозного лечения.
При положительном выявлении всех трех типов антител может наблюдаться рецидив хронического характера гепатита.

Согласно статистическим данным, уровень IgM начинает повышаться через несколько дней после попадания инфекции в организм, что свидетельствует о ранней стадии патологии. IgG антитела обычно проявляются через 2 недели после начала заболевания и находятся в крови на протяжении длительного периода времени (даже после выздоровления). Антитела IgA обнаруживаются через 2 недели, при этом после медикаментозной терапии их концентрация в организме снижается.

Время ожидания результатов теста составляет от 1-10 дней. При этом следует учитывать характер заболевания и возможности медицинской лаборатории.

Помните, что гепатит С ИФА положительный не всегда свидетельствует о наличии инфекции. Нередко тест считается ложноположительным, что требует повторной сдачи крови. В некоторых случаях пациенту назначают дополнительные исследования для более точного определения показателей крови.

Основным критерием при проведении теста является точное выявление количественных и типовых показателей. Они позволяют определить не только наличие вируса, но и форму заболевания. Диагностика гепатита С при помощи современных методов позволит начать своевременную медикаментозную терапию и минимизировать негативные последствия.

Источник: pechen1.ru