Что означает ифа на гепатит

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

• острых и хронических заболеваниях печени;

• желтухе неясного генеза;

• обследовании перед хирургическими вмешательствами;

• стандартном обследовании доноров крови;

• постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

• прохождении гемодиализа;

• профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

• незащищенном сомнительном половом контакте;

• рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

1. На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
2. На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
3. Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

• По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
  a) конкурентный;
  b) неконкурентный;

• По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
  a) гомогенные;
  b) гетерогенные;

• 3) По принципу определения исследуемого вещества:
  a) прямой;
  b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

1. В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
2. Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
3. Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

1. В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
2. В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
3. В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
4. Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

• выполненной накануне вакцинации;

• при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

• опухолевом процессе;

• инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Для того чтобы с высокой точностью определить вид гепатита после постановки предварительного диагноза, спрогнозировать течение заболевания, установить стадию его развития, используют различные серологические исследования. Наиболее точные данные получают после проведения иммуноферментного анализа. Используя ИФА гепатит С, диагностируют в 95% случаев. Именно данный анализ даёт возможность выявить антитела антивируса гепатита С (антивирус HCV) и оценить не только степень активности патологического процесса, но и уровень результативности противовирусной терапии, назначенной лечащим врачом и проведённой под его контролем.

Когда необходимо исследование и его особенности

Гепатит С является самым опасным видом данного заболевания, так как отличается длительным скрытым (латентным) периодом и опасными последствиями. Избежать появления и развития позволяет правильная и своевременная диагностика, одним из самых информативных методов которой признан иммуноферментный анализ.

Подтвердить наличие в крови пациента HCV инфекции можно с помощью серологических маркеров, а получить наиболее полные и достоверные данные о существовании антител позволяет анализ, который основан на комплексе структурных и неструктурных вирусных пептидов. У здоровых людей антитела к вирусу гепатита С в крови пациента отсутствуют, а их обнаружение свидетельствует о наличии патогена и развитии патологического процесса.

В ходе исследования специалисты выявляют суммарные антитела класса IgM и IgG, имеющие непосредственное отношение к структурным и неструктурным белкам HCV. Проведение данного исследования позволяет на ранней стадии заболевания выявить больных, инфицированных вирусом гепатита C. Присутствие суммарных антител в крови пациента говорит о начале болезни или перенесённой инфекции.

О начале заболевания свидетельствует наличие антител класса IgM, а о перенесённом гепатите типа С можно судить по выявленным антителам класса IgG. Они же становятся подтверждением реконвалесценции (заключительной стадии болезни).Для этого периода характерно анатомическое и функциональное восстановление поражённых недугом органов.

Своевременно проведённый ИФА (иммуноферментный анализ) позволяет на ранней стадии развития выявить патологический процесс, с высокой точностью диагностировать заболевание и увеличить шансы на быстрое выздоровление. Тест ИФА даёт возможность определить не только наличие вируса, но и количество специфических суммарных антивирус антител.

Исследование назначается:

1. Женщинам в состоянии беременности при постановке на учёт в женской консультации.
2. Пациентам, у которых обнаружены симптомы острого или хронического гепатита.
3. Медицинским работникам, постоянно контактирующим с биологическими материалами.
4. Пациентам с диагнозом СПИД.
5. Наркозависимым гражданам.
6. Больным алкоголизмом и тем, кто ведёт асоциальный образ жизни.

Направление на тест ИФА (иммуноферментный анализ) получают и сотрудники правоохранительных органов или работники коммунальных служб. Необходимость в проведении ИФА возникает при подозрении на нарушение функциональности печени или при получении сомнительных данных о состоянии органа после ультразвукового исследования. Врач может дать пациенту направление на иммуноферментный анализ крови, если последнему предстоит сложное хирургическое вмешательство. Если женщина (особенно в возрасте старше 30 лет) планирует беременность, а в анализе крови обнаружены повышенные значения билирубина или трансфераз (АЛТ, АСТ).

Специфические антивирусные антитела IgG обнаруживаются на протяжении нескольких лет. Их концентрация постепенно снижается, что является подтверждением положительной динамики. Что касается хронического гепатита С, то в этом случае количество суммарных анти-HCV антител не меняется. Точная диагностика основана на определении уровня содержания антител класса IgM.

Течение гепатита С зависит от генотипа вируса, ставшего причиной развития заболевания. Современной медицине известны 11 их разновидностей. В самых сложных ситуациях возможно инфицирование сразу несколькими генотипами вируса, и один из них всегда оказывается доминирующим. Только точная диагностика поможет выбрать наиболее эффективные лекарственные препараты для результативной терапии, подобрать их дозировку и установить длительность проведения терапевтических мероприятий.

Оценка результатов исследования

Для постановки диагноза при подозрении на наличие гепатита С и получения ориентировочной информации о количестве и качестве возбудителя проводится иммуноферментный анализ (ИФА), в ходе которого специалисты получают подтверждение присутствия в организме вируса и могут судить о его активности.

С помощью данного исследования можно сделать выводы о:

• вирусной нагрузке;
• степени риска развития хронического процесса;
• активности воспроизведения (репликации) молекулы РНК вируса HCV;
• продолжительности течения патологического процесса;
• степени поражения печени.

Оценивается и уровень риска перехода заболевания в хроническую форму. Выявленные с помощью ИФА антивирус HCV антитела свидетельствуют о вирусной репликации. Конечные результаты требуют подтверждения с помощью более точных исследований.

Качественная оценка итога иммуноферментного анализа выражается как положительный или отрицательный результат. ИФА позволяет выявить гепатит С на ранней стадии развития недуга, а также при течении заболевания в безжелтушной форме.

Анализ имеет определённые преимущества, среди которых:

1. Точность качественных и количественных показателей.
2. Минимальные сроки исследования.
3. Поэтапное проведение теста.

Иммуноферментный анализ принадлежит к числу обследований, отличающихся высокой точностью, но несмотря на все преимущества, в некоторых случаях не позволяет выявить возбудителя, присутствующего в организме человека.

Для исследования лаборант берёт венозную кровь пациента и помещает её в специальные ёмкости. Спустя определённое время антигены (чужеродные микроорганизмы) прикрепляются к стенкам сосуда. Специалист вводит в сосуд иммуноглобулины (антитела) и добивается иммунной реакции.

Полученные результаты сверяют с данными специально составленной таблицы. Результат оценивается как:

Положительный, свидетельствующий о наличии острой формы заболеваний, если в ходе исследования крови определяется наличие антител классов IgA, IgG, IgM.

Отрицательный – все три типа антител не выявлены, отсутствуют.

Ложноположительный – результат ИФА положительный, но не получивший подтверждения после проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Сомнительный – маркеры в крови не определяются при наличии гепатита С. Такое возможно при слишком ранней диагностике. Требуется повторное проведение анализа через 2-3 недели. Для постановки точного диагноза делают анализ ПЦР.

Ложноотрицательный результат анализа возможен у пациентов, принимающих лекарственные препараты, оказывающие подавляющее действие на защитную систему организма.

Как ложноположительный, так и ложноотрицательный результаты проведённого анализа возможны по нескольким причинам. В первую очередь – это минимальная вирусная нагрузка на самой ранней стадии развития заболевания. Не менее важно состояние иммунной системы пациента и индивидуальные особенности его организма. На результатах исследования заметно сказывается приём лекарственных препаратов из числа иммунодепрессантов.

Нельзя быть полностью уверенным в точности результата иммуноферментного анализа, если пациентка – это женщина в состоянии беременности. Ложные результаты возможны и в тех случаях, когда анализ проводят пациентам, страдающим аутоиммунными недугами, онкологическими заболеваниями, имеющим доброкачественные новообразования.

Дополнительное исследование проводится в том случае, если пациент недавно перенёс тяжёлое инфекционное заболевание, у него диагностировано нарушение обмена веществ или сбой в работе эндокринной системы. Если в составе крови повышено содержание гепарина или заметно снижен уровень содержания микроэлементов.

Увеличить точность проведённого анализа можно, соблюдая существующие правила подготовки к его сдаче:

1. Кровь сдают только натощак. Последний приём пищи разрешён не менее чем за 8-10 часов до забора материала.
2. Вечером перед анализом требуется отказаться от употребления в пищу жирных, жареных, острых, копчёных продуктов и блюд.
3. Не может быть речи об употреблении спиртосодержащих напитков.
4. Лучше отказаться от курения за сутки до сдачи крови.

Делать иммуноферментный анализ можно только тем пациентам, которые в данное время не болеют простудными, воспалительными или инфекционными заболеваниями, не жалуются на недомогание.

Нарушение перечисленных правил и требований приводит к тому, что результат анализа оценивается как ложноположительный. Такая ситуация складывается в 15-20% случаев. Однако для полной уверенности врачи направляют пациентов на дополнительное обследование, в ходе которого им нужно сдать кровь на ПЦР.

Полимеразная цепная реакция

Постановка диагноза невозможна только на основании результатов иммуноферментного анализа. Наличие антител не является доказательством присутствия болезнетворного вируса в организме на момент исследования. Ошибочное тестирование может спровоцировать нервный срыв или ещё более острую реакцию пациента. Постановка диагноза на основании результатов ИФА не является точной. Требуется дополнительное исследование, по итогам которого и будет вынесен окончательный вердикт врачей.

Важно помнить, что ложноположительный результат анализа возможен у людей, которые в данный момент болеют другими инфекционными заболеваниями, однако их иммунная система неправильно отреагировала на проникновение в организм болезнетворных микроорганизмов или вирусов.

Диагностировать гепатит С позволяет ряд лабораторных исследований, особое место среди которых занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Качественная оценка показателей определяется как положительный или отрицательный результат. Отсутствие вируса гепатита в крови пациента – норма, но в некоторых случаях после проведённого исследования специалисты заявляют об обнаружении в биологическом материале незначительных концентраций некоторых фрагментов РНК (рибонуклеиновой кислоты). Выявляют их с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Этот анализ крови даёт возможность выявить возбудителя гепатита С на ранней стадии развития заболевания и с высокой точностью поставить диагноз. Основано исследование на том, что вирусы имеют в составе структуры молекулы ДНК (гепатит B) или РНК (гепатит C).

В ходе анализа ПЦР с помощью специальной обработки образцов крови пациента:

• увеличивают концентрацию молекул нуклеиновых кислот;
• определяют их тип;
• устанавливают вид возбудителя.

Если в крови человека есть небольшое количество фрагментов РНК возбудителя, то с помощью ПЦР все они будут выявлены. Это и даёт возможность поставить точный диагноз. Главное отличие данного анализа от всех иных методов исследования – на 100% точная диагностика.

Такой анализ проводится при исследовании крови беременных женщин, обратившихся в женскую консультацию для постановки на учёт, при подозрении на наличие гепатита С с длительным латентным (скрытым) периодом, при затруднении в постановке точного диагноза с помощью ИФА. Проведения ПЦР необходимо в тех случаях, когда после иммуноферментного анализа получен сомнительный результат.

Вирус гепатита С в данной ситуации есть в организме больного, но ещё не спровоцировал стремительное развитие недуга. Это и есть латентное течение заболевания. Анализ делается довольно быстро, так как для получения результата нет необходимости выращивать возбудителя, используя питательную среду. Главное отличие ПЦР от иммуноферментного анализа (ИФА) заключается в том, что в данном исследовании не существует такого понятия, как ложноположительный или сомнительный результат.