Что такое иммуноблот на гепатит с
Метод определения
Иммуноблот (технология: рекомбинантный Line Blot).
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.
Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см.
тест № 79
). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы.
Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты
№ 321
и
№ 323
).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест
№ 324
) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
- иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.
Источник
Иммуноблот на гепатит С – высокоспецифичный развернутый тест, который позволяет подтвердить или опровергнуть результаты предварительных иммуноферментных анализов. ИФА определяет наличие антител к возбудителю патологии, а иммуноблот (вестерн-блот) делает то же, но с более высокой точностью. Диагностический метод также позволяет установить идентичность антител, направленных против определенных компонентов вируса гепатита.
Особенности анализа
Гепатит С провоцирует РНК-содержащий вирус, способный передаваться через биологические жидкости организма. В составе возбудителя имеются белки, к которым наш иммунитет вырабатывает антитела. Их и обнаруживают в сыворотке крови зараженного гепатитом.
Первыми (через несколько недель) образуются белковые соединения класса IgM. Примерно через полтора месяца активизируется производство иммуноглобулинов класса IgG, максимальная концентрация которых наблюдается спустя полгода. Поэтому анализы целесообразно делать через 3-6 недель после вероятного заражения.
Для обнаружения антител используют недорогой иммуноферментный тест (ИФА). Это первичное исследование не всегда позволяет поставить точный диагноз. Поэтому дальше применяется специфическая технология – метод иммуноблота. Поводом для назначения дополнительного тестирования являются положительные или сомнительные результаты иммуноферментного анализа.
Иммуноблоттинг гепатита рекомендуется проводить, когда в крови появляются антитела. Тест дает возможность обнаружить широкий спектр специфических белков, продуцируемых защитной системой в ответ на проникновение патогена. Срок исполнения – до 5 рабочих дней.
Кому и когда назначают
Основные показания к назначению иммуноблота:
- подозрение на инфицирование вирусом;
- положительный результат иммуноферментного теста, что может говорить о протекании острой фазы болезни;
- сомнительные данные, которые получены в процессе предварительного обследования на гепатит.
Как и ИФА, исследование информативно после появления в крови специфических антител, то есть через 3-4 недели от момента проникновения возбудителя. Именно в этот период белковые соединения можно обнаружить с помощью иммуноблота.
Когда анализ вестерн-блот может быть неточным:
- «диагностическое окно» – промежуток времени между проникновением патогена в организм и появлением белковых соединений, в этот период вирусная нагрузка недостаточна, иммунный ответ задерживается;
- у людей с подавленным иммунитетом;
- перинатальное инфицирование новорождённых (нетипичную картину могут давать антитела женщины).
Подтверждением наличия возбудителя в таких случаях являются положительные данные, полученные при повторных исследованиях крови на наличие вирусной РНК. Анализ проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Как подготовиться
Специальная подготовка к сдаче анализа на гепатит не нужна. Достаточно придерживаться стандартных условий – сдавать кровь натощак или не раньше, чем через четыре часа после еды (необильной и нежирной).
Перед проведением исследования на гепатит не рекомендуется употреблять чай, кофе, соки и другие сладкие напитки. Разрешается питье простой воды.
Расшифровка результатов
Анализы трактуются в зависимости от комбинации антигенов, к которым выявлены антитела.
Если обнаружены антитела:
- против двух и более антигенов заболевания – иммуноблот положительный, инфекция присутствует;
- против одного антигена – результат анализов недостоверный (нужно повторить диагностику).
При положительном ИФА и отрицательном иммуноблоте считают, что результат иммуноферментного теста был ложноположительным, а в дальнейшем обследовании нет необходимости – человек здоров, гепатит отсутствует.
Сомнительный или положительный иммуноблот – повод сдать кровь на определение РНК вируса методом полимеразной цепной реакции. На основании этого анализа выдается общее заключение. Если результат ПЦР отрицательный при положительном иммуноблоте, исследование рекомендуется повторить через несколько месяцев.
Иногда получают значения, попадающие в промежуток с названием «серая зона». Это значит, что гепатит под сомнением, и требует повторения теста через две недели. При получении тех же показателей результат анализа считается отрицательным.
Источник
Подтверждающий тест на антитела к вирусу гепатита С (иммуноблот) — подтверждение положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Гепатит С — наиболее тяжёлая форма вирусного заболевания, которое поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).
Основные пути передачи вируса гепатита С:
- кровь и/или другие жидкости организма инфицированного человека;
- трансплацентарный путь;
- реже — половой и парентеральный пути (от матери к ребенку).
Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови; заключённые.
Клиническая картина при гепатите С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствие аппетита, потеря веса; при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьёзное пожизненное заболевание. Особо тяжёлый исход хронического гепатита С — цирроз печени и гепато-целлюлярная карцинома.
В норме антитела к вирусу гепатита С в крови отсутствуют.
Подтверждающий тест позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.
Подтвердить результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3–4 недели инфекции — период появления в крови специфических антител.
Показания
Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.
Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.
Интерпретация результатов
Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликазы, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.
Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов — ложноположительный).
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка еще очень мала;
- иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина, связанная с антителами матери).
В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с помощью повторных ПЦР-исследований.
Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С.
Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.
Источник
Содержание
- Оценка результатов
- Описание
- Подготовка
- Показания к применению
Названия
Английское название:recomBlot HCV IgG.
Русское название: Иммуноблот рекомбинантный, антитела к вирусу гепатита С, IgG.
Оценка результатов
Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликаза, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов. Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов – ложноположительный).
Исключения:
• «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка еще очень мала;
• иммуносупрессированные пациенты;
• новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).
В этих случаях подтверждение инфекции вирусом гепатита С возможно только с помощью повторных ПЦР-исследований.
Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С. Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.
Описание
Метод определения Метод иммуноблота (технология рекомбинантный Line Blot).
Исследуемый материал Сыворотка крови.
Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С. Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) ( см тест № 79). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы. Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови ( см тесты № 321 и № 323).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса ( см тест № 324) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.
• «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.
Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Показания к применению
• Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.
Источник: Invitro.
Источник
Метод определения
Иммуноблот (технология: рекомбинантный Line Blot).
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Высокоспецифичное исследование, использующееся для верификации положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.
Метод позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.
Первый шаг в лабораторной диагностике гепатита С – скрининговое исследование на наличие специфических антител к вирусу методом иммуноферментного анализа (ИФА) (см.
тест № 79
). Положительный результат теста на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы.
Этот тест, как и другие ИФА-тесты, может иногда давать ложноположительный результат вследствие перекрёстных реакций и неспецифического связывания, определяющихся индивидуальными особенностями сыворотки пациента. Технологии скрининговых и подтверждающих тестов в разных лабораториях часто различаются, в некоторых случаях результаты, полученные в разных лабораториях, расходятся. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию. Для этого служат ПЦР-тесты, выявляющие РНК вируса в крови (см. тесты
№ 321
и
№ 323
).
Положительный результат ПЦР-тестирования означает присутствие вируса гепатита С в крови, дополнительное определение генотипа вируса (см. тест
№ 324
) помогает определить тактику лечения пациента. Отрицательный результат ПЦР-теста говорит об отсутствии вируса в крови в момент взятия пробы, что может быть как в случае, если инфицирования данным вирусом не было, так и в случае избавления от вируса после инфекции в прошлом (спонтанно или в результате лечения) или временного подавления репликации вируса.
Поэтому в случаях, когда результат теста на антитела положителен, а результат ПЦР-теста на РНК вируса отрицателен, человек рассматривается как потенциально инфицированный, и в этих ситуациях особенно важно, в том числе и психологически, убедиться в достоверности результатов определения антител.
Верифицировать результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.
Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3 — 4 недели инфекции – период появления в крови специфических антител.
Исключения:
- «диагностическое окно» в течение инкубационного периода и очень ранней острой фазы, когда иммунный ответ задерживается, поскольку вирусная нагрузка очень мала;
- иммуносупрессированные пациенты;
- новорождённые с перинатальной инфекцией (нетипичная картина связанная с антителами матери).
Подтверждение инфекции вирусом гепатита С в этих ситуациях возможно лишь положительным результатом при повторных исследованиях вирусной РНК методом ПЦР.
Источник
