Что значит пцр вирус гепатита в не обнаружено
Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.
ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:
- при возникновении признаков гепатита В у пациента;
- во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
- для уточнения эффективности терапии.
Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.
Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.
Для ПЦР-анализа делается забор венозной крови
Метод ПЦР даёт возможность выявить ДНК возбудителя даже при минимальном его присутствии в отобранной пробе крови. Кроме того, анализ позволяет обнаружить антигены, которые уже выработались на вирус. Каждый из антигенов свидетельствует об определённой стадии болезни:
- HBsAg — вирус присутствует в данный момент.
- Анти-HBcor — возбудитель в настоящее время отсутствует, но имелся в прошлом.
- Анти-HBs — в крови имеются антитела к гепатиту B (как вариант — герпесу, ВИЧ, хламидиозу, микоплазмозу, кандидозу, туберкулёзу, клещевому энцефалиту и многим другим болезням).
Патология и её признаки
Гепатит B или HBV — это вирусная инфекция, поражающая клетки печени. Она опасна не только непосредственным воздействием на паренхиму органа, ослабляющим барьерную функцию и общий иммунитет. Возможны и более тяжёлые последствия, такие как цирроз печени и возникновение злокачественных новообразований.
HBV передаётся через кровь человека, инфицированного гепатитом, его экскременты, через контакты со слизистыми оболочками, особенно при половом акте, повреждениями кожи, через нестерильные шприцы при переливании крови или при полостных операциях. Возможно заражение новорожденного его больной матерью при прикосновении к трещинам на её сосках.
Для гепатита B характерны следующие симптомы:
Непривычная утомляемость
- нарастающая усталость при небольших нагрузках;
- непривычная утомляемость;
- тяжесть в области правого подреберья;
- пониженный аппетит, тошнота;
- желтушность кожных покровов, склер глаз;
- светлый кал;
- тёмная моча;
- болезненные ощущения в суставах.
Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.
Показаниями к ПЦР являются:
- положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
- острый и хронический гепатит;
- микст-гепатиты;
- количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
- разработка тактики эффективной терапии.
Подготовка к анализу
Перед процедурой необходимо 15-20 минут полного покоя
Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.
Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:
- полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
- воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
- 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
- прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
- детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.
Как проходит исследование
В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.
Амплификатор
Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.
Расшифровка результатов
Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.
Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:
- Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
- Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
- Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
- Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.
Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»
Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.
Особенность полимеразной цепной реакции
В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.
Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.
Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.
Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:
- конкретную вирусную нагрузку на печень;
- интенсивность прогрессирования заболевания;
- устойчивость к препаратам противовирусной группы;
- результативность лечения.
Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.
Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.
Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса
Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.
Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:
- количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
- сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
- маркеров вирусной инфекции;
- результатов биопсии печени.
Общие цели ПЦР
Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:
- обнаружить носители вируса;
- прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
- убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
- мониторить активность вируса на всех фазах развития;
- выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
- оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.
Преимущества метода
В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:
Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью
- Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
- Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
- Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
- Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
- Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
- Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.
Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.
Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.
Источник
Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.
При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.
Виды ПЦР на вирусный гепатит В
Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.
Качественный ПЦР и его трактовка
Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:
- отрицательный результат — вируса нет;
- положительный результат — вирус обнаружен.
Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.
В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.
Количественный ПЦР
Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:
- Перед назначением лечения.
- Для оценки эффективности терапии.
- Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
- Для определения стадии, на которой находится заболевание.
Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:
1 МЕ/мл = 5 копий/мл
Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.
Трактовка количественного ПЦР
При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:
- < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
- от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
- 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
- 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.
Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:
- Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
- Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
- Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
- Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
- Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.
Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:
- ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
- ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
- ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.
Подготовка к обследованию
Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:
- Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
- Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
- Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.
Подводя итоги
На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.
Источник
Вирусный гепатит С является заболеванием, передающимся через кровь. Это означает, что основными методами диагностики данного заболевания являются аналитические исследования данной биологической жидкости.
Но что означает «РНК гепатита С не обнаружено»? Каковы особенности качественного анализа на РНК HCV? Как проводится это тестирование? Ответы на эти вопросы вы сможете найти в нашей статье.
РНК вируса гепатита С не обнаружено
Для первичной диагностики гепатита С используются данные, полученные в процессе качественного анализа. Этот диагностический метод относится к наиболее точным и в настоящее время считается одним из лучших способов определения наличия в крови пациента возбудителя вирусного воспаления печени. Результаты анализа могут быть следующими:
- РНК гепатита С не обнаружено. Что это значит? Это означает, что фрагментов патогенной рибонуклеиновой кислоты в исследуемом образце крови нет. Такой результат может говорить о том, что обследуемый здоров.
- РНК гепатовируса обнаружено. Такой результат может говорить о наличии патогена в организме человека. Но болезнь не обязательно находится в активной форме (возможно, что вы являетесь носителем вируса или на данный момент инкубационный период).
Важно заметить, что на документальном носителе результатов подобных анализов нередко можно найти сокращение «кач.». Его наличие говорит о том, что врачами было произведено именно качественное обследование. Отсутствие обозначения говорит о том, что диагноз выявлялся количественным или каким-либо иным способом.
Таким образом, если РНК не обнаружено, гепатита С в организме обследуемого, скорее всего, нет. Однако рекомендуется пройти дополнительную диагностику, так как возможны и ложные результаты.
Статья опубликована при поддержке исследовательского института индийского фармацевтического производителя Zydus Heptiza. Официальный сайт в России Zydus.ru
Особенности анализа
Вирусный гепатит С относится к типу заболеваний с осложненной диагностикой. Проблема в том, что в большинстве случаев заболевание проявляется бессистемно, ярких симптомов не наблюдается, и пациент может попросту не подозревать о своем недуге. Таким образом, помочь определить заболевание на ранних стадиях и выявить РНК вируса гепатита С можно только на основании качественного анализа крови.
Обследование основывается на полимеразной цепной реакции (ПЦР). Суть его заключается в эксплуатации специфических ферментов, имитирующих РНК ВГС. В процессе исследования изучается реакция образцов крови пациента на эти ферменты. Это позволяет выявить наличие и концентрацию патогена.
Преимуществами анализа на выявление элементов вирусного РНК являются:
- Точность метода. Погрешность в результатах, в случае соблюдения лабораторными работниками самим обследуемым всех необходимых мер, сведена к минимуму.
- Оперативное получение результатов диагностики. Результат анализа предоставляется в течение 6-7 часов после явки пациента в лабораторию. Даже с учетом очередей на сдачу крови, обследуемый очень быстро узнает, найдены ли в его крови фрагменты вирусной РНК.
- Высокая чувствительность. Это означает, что даже при небольшой концентрации искомого материала в крови больного РНК без труда обнаруживается.
- Невысокая стоимость. Данный анализ по цене не отличается от других, менее информативных методов. В совокупности с надежностью и скоростью реакции, качественный метод ПЦР остается наиболее востребованным вариантом определения гепатовируса.
Однако некоторые нюансы необходимо принимать в расчет. В первую очередь, пациенту рекомендуется обращаться только в те медицинские учреждения, в штате которых трудятся специалисты высокого уровня. Из-за чувствительности реагентов малейшая неточность в работе лаборанта приводит к ложноположительным или ложноотрицательным результатам.
Также необходимо понимать, что у каждого аппаратного оборудования есть нижний предел чувствительности к реагентам. Это означает, что если возбудитель вирусного воспаления печени пребывает в крови больного в чрезвычайно низкой концентрации, даже такой точный метод, как ПЦР, может не выявить его РНК. Если у пациента или лечащего врача сохраняется подозрение на заражение ВГС, рекомендуется через некоторое время пройти повторную диагностику.
Принципы проведения анализа
Для того чтобы наверняка выявить наличие или отсутствие РНК вируса гепатита С в образцах крови пациента, материал должен быть максимально пригодным для обследования. Это невозможно без соблюдения пациентом следующих норм:
- Отказ от жирной и тяжелой пищи накануне сдачи крови
- Отказ от курения и распития алкогольных напитков
- Отказ от любой пищи в течение последних 8 часов и сдача образца биологической жидкости натощак
- Явка в лабораторию в раннее время суток
Следует отметить, что качественный анализ на обнаружение РНК гепатита С назначается не во всех случаях. Врач может порекомендовать его проведение, если:
- Обнаружены иммуноглобулины ВГС в крови больного
- Вирус гепатита С обнаружен, но иммуноглобулины не выявлены
- Проводилась противовирусная терапия, и требуется выявить уровень РНК ВГС для мониторинга ее эффективности
В первых двух случаях анализ на проверку РНК HCV качественный предписывается только после сероконверсии. В случае, если антитела к антигенам ВГС не обнаруживаются, можно понять, что вирус в организме присутствует, но по каким-либо причинам не получает иммунологического отклика.
При наличии иммуноглобулинов анализ позволяет установить, необходимо ли медикаментозное лечение, или организм может справиться сам.
В случае мониторинга противовирусного лечения, ПЦР проводится строго для проверки его эффективности. Результаты позволяют понять, насколько действенна подобранная лекарственная схема. Если эффект незначительный, гепатолог может переосмыслить терапевтический подход и назначить более подходящее лечение. Если же РНК не обнаружено, гепатит С с большой долей вероятности побежден.
Заключение
Итак, чтобы уметь расшифровывать качественный анализ ПЦР до прибытия к лечащему врачу, необходимо запомнить, что может быть 2 варианта результата:
- РНК гепатита С не обнаружено. Что это значит? Патогена в крови исследуемого не обнаружено. Либо он полностью отсутствует, либо его концентрация ничтожно мала. РНК не обнаружено — что это значит? Скорее всего, пациент здоров. В любом случае, лечение не требуется.
- Фрагменты РНК обнаружены. Положительный результат, вирус присутствует в крови исследуемого. Для точного определения патогенной нагрузки рекомендуется пройти количественный ПЦР-тест. Если уровень заражения не снизился в процессе противовирусной терапии, лечащий врач должен переосмыслить схему лечения и внести в нее коррективы.
Важно помнить: если инфицирование подтверждено, следует незамедлительно приступить к терапевтическим мерам.
Промедление в лечении ВГС грозит тяжелыми последствиями. Самолечением заниматься не следует. Определить подходящую терапию может только лечащий врач.
Оцените статью:
| Всего голосов: 1 Средняя оценка: 5
Источник
