Что значит референсные значения в анализах гепатита с

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

Содержание
Что это значит?
Анализ на РНК вируса гепатита С
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
РНК гепатита С: качественный анализ
РНК гепатита С: количественный анализ
Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК — Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Что это значит?

Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

разветвленной ДНК (р-ДНК);
транскрипционной амплификации (ТМА);
полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

РНК вируса гепатита С: метод ПЦР

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

Отбора образца биоматериала.
Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

ПЦР-диагностика бывает

качественной (обнаруживает присутствие вируса),
количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

РНК гепатита С: качественный анализ

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

syringe needle with droplet of blood in front of a finger and on blue bacjground

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

РНК гепатита С: количественный анализ

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
установление стадии патологии;
определение вирусной нагрузки при гепатитах;
выбор комбинации противовирусных препаратов;
мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

Так, показатели (в МЕ/мл):

ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
свыше 8×10*5 — высокой.

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.

Источник: Sofosbuvir-Daclatasvir.ru

Что значит референсные значения в анализах ПЦР и ИФА на гепатит С

Значения гепатита С в анализах всегда разные. Они зависят от вирусной нагрузки, генотипа HCV, наличия антител в крови и состояния иммунной системы. Существуют референсные значения, в которые должны укладываться те или иные результаты. Они подразделяются на взрослые и детские, могут различаться в зависимости от пола, возраста больного. На их основании врачи ставят диагноз и назначают лечение. Расшифровкой показателей занимается только врач.

Что такое референсные значения в анализах

Референтные значения — это границы, в которые должны уложиться результаты полученных анализов, чтобы их посчитали нормальными. Например, при диапазоне от 10 до 20, 10 — это нижняя граница, а 20 — верхняя. Если показатели исследований выше или ниже нормы, это свидетельствует о наличии той или иной проблемы со здоровьем.

Каждая лаборатория располагает собственным оборудованием, которое может отличаться от других. Поэтому референсные значения также могут быть различными. Врачи должны ориентироваться не на общие нормы, а на данные той лаборатории, где было проведено исследование.

На результаты также влияет:

режим и характер питания;
потребление алкоголя;
состояние стресса;
физическое переутомление;
время суток.

Отклонения в показателях допускаются лишь тогда, когда врач проинформирован о факторах, способных исказить общую картину показателей.

Результаты диагностики на гепатит С

Итоговые значения зависят от вида анализа на гепатит. Если есть подозрение на инфицирование, одновременно сдается кровь для анализов ИФА и ПЦР. Чтобы результат был корректным, необходимо соблюдать основные рекомендации:

Биологический материал следует сдавать только натощак в утреннее время.

Кушать можно минимум за 10 часов до процедуры.

За сутки до забора необходимо исключить жирную, сладкую еду, алкогольные напитки.

Итоги обследований на вирус HCV можно увидеть уже спустя сутки.

Что показывает ИФА

Иммуноферментный анализ выявляет наличие антител к гепатиту С в крови (анти-HCV). Они проявляются в срок от двух до шести недель после инфицирования.

Нормальное значение этого исследования — «не обнаружено». Антитела к гепатиту должны полностью отсутствовать.

Положительный результат может косвенно подтверждать диагноз. В такой ситуации назначается повторная сдача крови совместно с ПЦР.

При острой форме гепатита С в заключении указаны иммуноглобулины IgM. При хроническом течении заболевания (более полугода от заражения) в плазме обнаруживаются иммуноглобулины IgG. Также подобное значение может свидетельствовать о столкновении с болезнью в прошлом. Если одновременно выявлены два типа иммуноглобулинов, значит, идет обострение хронического гепатита.

Вот значения гепатита С на разных фазах болезни:

во время острой формы — IgM+, IgG+;
скрытая (латентная) форма — IgM-, IgG+;
хронического течение — IgM+, IgG+;
в процессе выздоровления — IgM-, IgG+, HCV-.

Анализ ИФА при гепатите С иногда бывает недостоверным. Больной может увидеть псевдоотрицательный результат в остром периоде инфекции. Иногда антитела к гепатиту С появляются на протяжении 3-5 месяцев с момента инфицирования, поэтому сразу они не определяются.

Также ложноотрицательные значения появляются у людей, которые проходят лечение сифилиса, онкологии, аутоиммунных заболеваний. В этом случае чувствительность ИФА колеблется в пределах 50-95%. У 8% ВИЧ-положительных больных диагностируется ложноотрицательный результат – их организм не производит антитела.

Значение количественной ПЦР

Полимеразная цепная реакция — это количественное исследование крови, благодаря которому определяется концентрация вируса гепатита. Это наиболее достоверный анализ, позволяющий обнаружить вирусные агенты, а не антитела.

Вирусная нагрузка при гепатите С означает то, сколько единиц вирусной РНК присутствует в 1 мл биологического материала.

Когда человек здоров, референтный результат — отрицательный (в крови нет вирусных частиц). При разной вирусной нагрузке референсные значения различны:

От 0 до 1,8×10 2 МЕ на 1 мл — количество вирусной РНК ниже уровня установленного значения. Это означает, что вирусные агенты присутствуют в крови, но в очень маленькой концентрации (при одновременно проведенном качественном ПЦР).
От 1,8×10 2 до 7,9×10 5 МЕ на 1 мл — вирусная активность не очень высокая.
От 8×10 5 до 2,3×10 7 МЕ на 1 мл — присутствует HCV с высокой вирусной нагрузкой.
От 2,4×10 7 МЕ на 1 мл и более — высокая виремия. Вероятно развитие тяжелых осложнений (цирроза, рака печени).

Количественное ПЦР-обследование назначается больным гепатитом С перед началом противовирусной терапии и в процессе нее на 3 месяце, чтобы оценить ее эффективность.

Исследование ПЦР может быть качественным, когда выявляется вирус в крови. Его необходимо проходить всем людям, у которых имеются антитела к гепатиту С. Стандартная чувствительность — 10-500 МЕ/мл. Когда показатели ниже указанных пределов, анализ недостоверный. Если благодаря качественному анализу вирус не обнаружен, человек признается здоровым.

Что делать с полученными значениями

Результаты анализов следует показать врачу. Значения количественной ПЦР диагностики позволяют определить:

Вероятность передачи вируса от инфицированного здоровому человеку. Чем выше концентрация патологических агентов в крови, тем выше риск заражения гепатитом С.
Какие препараты лучше использовать и какова эффективность противовирусной терапии.
Длительность и прогноз лечения. При высоких показателях вирусной нагрузки терапевтический курс длится дольше.

Прямой связи между количеством вирусных частиц в крови и тяжестью заболевания нет. У инфицированного при высокой вирусной нагрузке может не быть серьезного поражения клеток печени.

В некоторых случаях значения анализов показывают отрицательный ПЦР, но положительный ИФА. Это говорит о том, что в данный момент вирус HCV не обнаружен, но ранее человек перенес острую форму гепатита С.

При ложноположительных результатах больному показаны повторные анализы, а также исследование на определение генотипа, печеночные пробы и УЗИ печени.

При подтверждении гепатита С назначается лечение. Оно может быть основано на приеме интерферонов или препаратов прямого действия, которые имеют меньше побочных эффектов и большую результативность (до 99%). Это Софосбувир, Даклатасвир, Велпатасвир, Ледипасвир. С их помощью вылечить хронический гепатит даже с циррозом печени можно за полгода.

источник

Печень и анализы

Анализ крови на гепатит C: расшифровка, таблица, норма, результат

Источник

Зачастую гепатит диагностируется на стадии цирроза, чему предрасполагает позднее выявление болезни из-за отсутствия клинических признаков. Только путем лабораторного исследования удается обнаружить HCV в инкубационном периоде.

Количественный анализ на гепатит С дает возможность не только установить факт присутствия возбудителя в крови, но и подсчитать его концентрацию.

Лабораторная диагностика гепатита С

К числу первостепенных методов диагностики относится ИФА, или иначе иммуноферментный анализ. Он назначается для обнаружения специфических антител к HCV. Его эффективность достигает 95%. Если расшифровка исследования дает положительный результат, стоит заподозрить присутствие возбудителя в крови.

Заметим, что у половины обследуемых при «+» тесте в ходе дальнейшей диагностики вирусный агент в крови не выявляется. ИФА в данном случае указывает на перенесенный контакт с HCV в прошлом, что подтверждается циркулирующими антителами.

Более точным исследованием является полимеразная цепная реакция, или иначе ПЦР. Она позволяет определить концентрацию РНК возбудителя в крови. Обнаружив генетический набор вируса в биологическом материале, врач подтверждает гепатит С.

ПЦР назначается пациенту для верификации диагноза. Она дает возможность выявить РНК на стадии, когда антитела еще отсутствуют. Существует несколько видов генетических исследований:

количественный анализ ПЦР на гепатит С, который не только устанавливает факт присутствия возбудителя в крови, но и предоставляет информацию о его концентрации;
качественный – подтверждает инфицирование;
генотипирование – позволяет определить генотип патогенного агента и подобрать наиболее эффективные лекарства против него.

Полимеразная цепная реакция

Как уже было сказано, существует несколько видов лабораторного исследования:

качественный анализ – свидетельствует о присутствии патогенного агента в крови. Данный вид диагностики имеет определенный «уровень реагирования», поэтому не всегда оказывается достоверным. Чтобы правильно расшифровать результаты и получить реальные показатели, для исследования рекомендуется использовать тест-систему с чувствительностью — не ниже 50 МЕ/мл. Норма анализа – это «отрицательный ответ» или «вирус не обнаружен». Это указывает на отсутствие генетического набора возбудителя в исследуемом материале. Если результат оказался положительный, требуется дальнейшее обследование пациента;
количественный анализ ПЦР на гепатит С определяет вирусную нагрузку, то есть концентрацию патогенного агента в крови. Результат исследования показывает число единиц РНК в фиксированном объеме биологической жидкости;

Вирусная нагрузка – это подсчет инфекционной РНК в одном миллилитре крови исследуемого. Единицы измерения – МЕ/мл, однако некоторые лаборатории определяют «копии/мл», при этом указывая на бланке нормы анализа для сравнения и оценки результатов.

генотипирование. Из-за способности возбудителя изменяться выбор эффективных противовирусных лекарств для терапии должен осуществляться на основании его генотипа. От него зависит не только результат, но и длительность лечебного курса. Так, гепатит HCV 1 требует назначения медикаментов на год, однако положительная динамика наблюдается лишь в 60% случаев. Что касается второго и третьего генотипов, то они являются менее стойкими к действию противовирусных средств, из-за чего эффективность терапии превышает 85%. При получении такого результата исследования – «вирус не типируется», стоит заподозрить присутствие возбудителя, который не распознается стандартными тест-системами.

Показания для анализа

Расшифровка количественного анализа на гепатит С необходима для:

дальнейшего обследования пациента, когда при ИФА были обнаружены антитела к HCV;
подтверждения диагноза;
установления вирусной нагрузки при микст-инфекции, когда человек заражен несколькими видами возбудителя;
определения тактики лечения (выбора противовирусных медикаментов, их замены или завершения терапии);
оценки динамики прогрессирования заболевания, а также эффективности лекарств;
определения стадии патологии (острая, хроническая).

ПЦР имеет следующие преимущества:

хорошая чувствительность, благодаря чему удается подсчитать даже небольшое количество вируса;
определение самого возбудителя (РНК), а не антигенов;
специфичность методики — установление определенного типа патогенного агента;
быстрота получения результатов, ведь для анализа не требуется выращивание культур на питательной среде. Ответ готов через 5 часов;
универсальность – позволяет выявить генетический набор различных возбудителей, как РНК, так и ДНК-содержащих (гепатит В);
обнаружение скрытой инфекции.

Лабораторное исследование помогает подтвердить диагноз и является неотъемлемой частью комплексного обследования (анализа клинических симптомов, результатов ИФА и биохимии).

Кроме того, ПЦР широко используется в аллергологии, генетике, а также для установления факта отцовства.

Расшифровка количественного анализа на вирус гепатита С

Оценка результатов лабораторной диагностики осуществляется врачом путем сравнения полученных данных с нормой.

Ответ анализа (МЕ/мл)	Что означает
Не обнаружено	Это норма количественного анализа на гепатит С, что свидетельствует о том, что возбудитель не найдет, или его концентрация находится ниже уровня чувствительности методики
До 1,8*10^2	Содержание патогенного агента ниже нормы
До 8*10^5	Низкая вирусная нагрузка, что указывает на благоприятный прогноз и эффективную терапию
Более 8*10^5	Возбудитель обнаружен — большая нагрузка.
Выше 2,4*10^7	Концентрация вируса значительно превышает линейный диапазон

Концентрация патогенного агента определяется амплификатором и сравнивается с диапазоном, границы которого от 1,8*10^2 до 2,4*10^7. Благодаря регулярному обследованию вирусоносителя удается своевременно обнаружить увеличение вирусной нагрузки, что подтверждает активацию возбудителя и обострение болезни.

На результаты ПЦР могут влиять некоторые факторы:

некачественный сбор материала;
введение гепарина накануне исследования. Он относится к лекарственным средствам, которые уменьшают свертываемость крови, тем самым замедляя действие реактивов ПЦР;
несоблюдение правил транспортировки материала;
низкий уровень профессионализма врачей-лаборантов;
несоблюдение техники проведения анализа.

Норма количественного исследования на определение РНК вируса гепатита С может несколько отличаться в разных лабораториях, однако эти погрешности зачастую не влияют на конечный результат обследования. Не последнюю роль играет вид тест-систем, а именно их чувствительность. Это особенно важно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой, которую некоторые лаборатории могут не обнаружить.

Частота проведения анализа

Лабораторная диагностика проводится на этапе обнаружения гепатита С, в процессе лечения, а также после проведенной терапии. Это дает возможность правильно установить субтип возбудителя, подобрать эффективные лекарства и отследить динамику изменений на фоне их приема.

Кроме того, исследование крови позволяет подтвердить выздоровление или хронизацию инфекционно-воспалительного процесса. Обязательным считается анализ перед началом терапии и спустя 3 месяца, что необходимо для оценки динамики и эффективности выбранных противовирусных средств.

Дополнительно врач назначает ПЦР на 4 и 24 неделях терапии. О благоприятном прогнозе можно говорить при снижении вирусной нагрузки к концу третьего месяца. Например, при ее уменьшении с 1 млн МЕ/мл до 100 тысяч. Если концентрация возбудителей остается на прежнем уровне или несколько увеличивается, значит, противовирусные медикаменты неэффективны, и требуется их замена или добавление новых.

В случае медленного снижения уровня патогенных агентов в крови врач может продлить лечение или наоборот, отменить препараты, получив отрицательный ответ ПЦР.

При получении положительного результата лабораторной диагностики следует немедленно обратиться к инфекционисту, поскольку успех в лечении напрямую зависит от стадии, на которой был поставлен диагноз гепатита С и начата терапия. Кроме того, необходимо помнить о риске заражения окружающих, поэтому прием противовирусных препаратов важен не только для инфицированного, но и для его родственников.

Автор: Светлана Галактионова

Источник: rentco.ru