Диагностическое значение ферментов при гепатитах

Определение активности ферментов все шире используется в диагностических целях в медицинской и ветеринарной практике. Этому способствует выяснение высокой информативности данного показателя для выявления патологического процесса на ранних стадиях заболевания, а также выпуск отечественных и зарубежных наборов необходимых реактивов, что значительно облегчает выполнение довольно трудоемких исследований по определению активности ферментов. Диагностическая ценность определения активности фермента определяется способностью проявлять себя в чрезвычайно малых концентрациях. Патологический процесс сопровождается повышением проницаемости клеточных мембран или гибелью части клеток. Находящиеся в клетках ферменты выходят в кровь, где соответствующая ферментативная активность резко возрастает, так как содержание ферментов в клетке значительно выше, чем в крови. Таким образом, гиперферментемия всегда является указанием на наличие в организме патологического процесса.

Труднее обстоит дело с установлением локализации патологического процесса. Абсолютная органная специфичность для ферментов наблюдается крайне редко, один и тот же фермент содержится обычно в клетках нескольких органов, что затрудняет интерпретацию полученных данных. Тем не менее, органная специфика ферментативной активности все же имеет место. Она сравнительно мало отличается у различных видов животных. По данным французских авторов (1994 г.), у собак сорбитолдегидрогеназа специфична для печени и в меньшей степени — для почек. Аспартатаминотрансфераза специфична для сердечной и скелетной мускулатуры, креатинкиназа специфична для поперечнополосатых мышц и, в меньшей степени, — для сердца. Аланинаминотрансфераза и орнитинкарбамоил — трансфераза специфичны для печени. Для ферментов, активность которых более или менее равномерно распространена в некоторых органах, прибегают к исследованию изоферментного спектра, о чем будет сказано ниже при рассмотрении фермента лактатдегидрогеназы.

Ниже приведены некоторые примеры содержания ферментов в тканях и описана целесообразность их определения в лабораторной практике.

Лэктатдегидрогеназа — определение её активности используется при диагностике заболеваний печени, крови, опухолей и повреждений скелетной мускулатуры. Высокие величины активности отмечены при лептоспирозе, инфекционном перитоните, при гепатитах с явлениями некроза, а также при отравлениях, особенно фосфоорганическими ядами, при гемолитической желтухе, при лейкозах.

Для более точного выявления локализации патологического процесса в настоящее время используется определение изоферментного спектра лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Имеется 5 форм ЛДГ (ЛДГ1, ЛДГ2, ЛДГ3 , ЛДГ4 и ЛДГ5), отличающихся друг от друга различными физико-химическими свойствами, в частности, чувствительностью к температуре, подвижностью в электрическом поле и др.)- Каждый орган имеет свой изоферментный спектр, то есть разное соотношение изоферментов. Поэтому поражение какого-либо органа приводит не только к повышению общей активности фермента, но и к изменению соотношения его молекулярных форм в сыворотке крови. Увеличение активности ЛДГ, и ЛДГ2 характерно для поражения сердечной мышцы, в то время как увеличение активности ЛДГ5 — для повреждения скелетной мускулатуры и печени.

Аминотрансферазы (аспартатаминотрансфераза и аланинаминотрансфераза). Определение этих ферментов имеет большое значение для своевременной диагностики заболеваний печени и сердца. Активность трансаминаз всегда повышена при остром гепатите, в том числе и при безжелтушных формах. При хронических гепатитах и циррозе активность трансаминаз ниже, чем при острых формах. Высокие активности ферментов отмечены при отравлениях. Следует, однако, заметить, что одно определение активности аспартатаминотрансферазы не может быть решающим показателем, так как этот фермент не является специфичным именно для печени. В отличие от аспартатаминотрансферазы, у кошек и собак аланинаминотрансфераза почти полностью сосредоточена в печени, и, следовательно, диагностическое значение этого показателя именно для этих животных возрастает. Так как при остром гепатите повышается активность обеих аминотрансфераз, но аланинаминотрансфераза содержится в цитоплазме клеток, а аспартатаминотрансфераза -и в цитоплазме, и в митохондриях, повышение активности последней свидетельствует о более тяжелом поражении клеток печени.

Щелочная фосфатаза — используется для диагностики рахита, опухолей костей и застоя желчи. При рахите наблюдается повышение активности фермента при одновременном снижении уровня кальция в крови. Наиболее высокая активность отмечена при остеосаркомах. Повышается активность фермента и при заболеваниях печени и желчных путей, сопровождающихся застоем желчи. У собак высокая активность щелочной фосфатазы при незначительном увеличении активности трансаминаз наблюдается при лейкозах с вовлечением в патологический процесс печени. У кошек одно определение активности щелочной фосфатазы для обнаружения застойных явлений в печени недостаточно информативно, так как фермент выделяется почками.

Холинэстераза — определение её активности используется для выявления отравлений фосфорорганическими соединениями и для оценки функции печени. Следует отметить, что в отличие от других ферментов, где указанием на наличие патологического процесса является повышение активности, активность холинэстеразы, которая синтезируется клетками печени, при гепатите снижается. Это снижение имеет место лишь при выраженных, тяжелых формах гепатита, и тем самым одно определение активности холинэстеразы малоинформативно и используется в комплексе с определением активности других ферментов. Имеются данные, что такой комплекс в составе аминотрансфераз, сорбитдегидрогеназы и холинэстеразы позволяет выявить повреждения печени различной этиологии в 95% случаев. Постепенное нарастание снижения активности холинэстеразы при гепатите является неблагоприятным прогностическим признаком, в то время как нормальные величины активности при хронических воспалительных процессах в печени говорят о благоприятной тенденции течения заболевания. Следует заметить, что небольшое снижение активности наблюдается во вторую половину беременности и не является указанием на наличие патологического процесса.

Креатинкиназа — обеспечивает ресинтез АТФ за счет взаимодействия АДФ с креатинфосфатом. Креатинфосфат относится к богатым энергией фосфатным соединениям, обеспечивающим сокращение мышц, их расслабление, транспорт метаболитов в мышечную ткань. Повышение активности фермента имеет место при повреждении скелетных или сердечной мышц, например при операциях. Встречается повышенная активность и при внутримышечном введении пенициллина, тетрациклина. Повышенная активность отмечена при судорогах и двигательном беспокойстве. У собак повышение активности наблюдается при воспалениях мышц.

Глутаматдегидрогеназа — большая часть ферментативной активности сосредоточена в печени, и исключительно в митохондриях клеток этого органа. Тем самым, повышение активности с большой долей вероятности позволяет говорить о поражении печени, а, учитывая локализацию в митохондриях, судить о степени тяжести патологического процесса.

Источник

В основе многих заболеваний лежат нарушения функционирования ферментов в клетке — энзимопатии. Различают первичные (наследственные) и вторичные (приобретённые) энзимопатии. Приобретённые энзимопатии, как и вообще протеинопатии, по-видимому, наблюдают при всех болезнях.

При первичных энзимопатияхдефектные ферменты наследуются, в основном, по аутосомнорецессивному типу. Гетерозиготы, чаще всего, не имеют фенотипических отклонений. Первичные энзимопатии обычно относят к метаболическим болезням, так как происходит нарушение определённых метаболических путей. При этом развитие заболевания может протекать

по одному из ниже перечисленных «сценариев». Рассмотрим условную схему метаболического пути:

Вещество А в результате последовательных ферментативных реакций превращается в продукт Р. При наследственной недостаточности какого-либо фермента, например фермента Е3, возможны разные нарушения метаболических путей:

Нарушение образования конечных продуктов. Недостаток конечного продукта этого метаболического пути (Р) (при отсутствии альтернативных путей синтеза) может приводить к развитию клинических симптомов, характерных для данного заболевания:

Клинические проявления. В качестве примера можно рассмотреть альбинизм. При альбинизме нарушен синтез в меланоцитах пигментов — меланинов. Меланин находится в коже, волосах, радужке, пигментном эпителии сетчатки глаза и влияет на их окраску. При альбинизме наблюдают слабую пигментацию кожи, светлые волосы, красноватый цвет радужки глаза из-за просвечивающих капилляров. Проявление альбинизма связано с недостаточностью фермента тирозингидроксилазы (тирозиназы) — одного из ферментов, катализирующего метаболический путь образования меланинов

Накопление субстратов-предшественников. При недостаточности фермента Е3 будут накапливаться вещество С, а также во многих случаях и предшествующие соединения. Увеличение субстратов-предшественников дефектного фермента — ведущее звено развития многих заболеваний:

Клинические проявления. Известно заболевание алкапгонурия, при котором нарушено окисление гомогентизиновой кислоты в тканях (гомогентизиновая кислота — промежуточный метаболит катаболизма тирозина). У таких больных наблюдают недостаточность фермента окисления гомогентизиновой кислоты — диоксигеназы гомогентизиновой кислоты, приводящей к развитию заболевания. В результате увеличиваются концентрация гомогентизиновой кислоты и выведение её с мочой. В присутствии кислорода гомогентизиновая кислота превращается в соединение чёрного цвета — алкаптон. Поэтому моча таких больных на воздухе окрашивается в чёрный цвет. Алкаптон также образуется и в биологических жидкостях, оседая в тканях, коже, сухожилиях, суставах. При значительных отложениях алкаптона в суставах нарушается их подвижность.

Нарушение образования конечных продуктов и накопление субстратов предшественников. Отмечают заболевания, когда одновременно недостаток продукта и накопление исходного субстрата вызывают клинические проявления.

Клинические проявления. Например, у людей с болезнью Гирке (гликогеноз I типа) наблюдают снижение концентрации глюкозы в крови (гипогликемия) в перерывах между приёмами пищи. Это связано с нарушением распада гликогена в печени и выходом из неё глюкозы вследствие дефекта фермента глюкозо-6-фосфатфосфатазы. Одновременно у таких людей увеличиваются размеры печени (гепатомегалия) вследствие накопления в ней не используемого гликогена.

Особый интерес для клиники представляет исследование активностииндикаторныхферментоввсыворотке крови, так как по появлению вплазмеилисыворотке кровиряда тканевыхферментовв повышенных количествах можно судить о функциональном состоянии и поражении различных органов (например,печени, сердечной и скелетной мускулатуры). При остром инфаркте миокарда особенно важно исследоватьактивностькреатинкиназы, АсАТ, ЛДГ и оксибутиратдегидрогеназы. При заболеванияхпечени, в частности при вирусном гепатите (болезнь Боткина), всыворотке кровизначительно увеличиваетсяактивностьАлАТ и АсАТ, сорбитолдегидрогеназы,глутаматдегидрогеназыи некоторых другихферментов. озрастаниеактивности ферментовсыворотки кровипри многих патологических процессах объясняется прежде всего двумя причинами: 1) выходом в кровяное руслоферментовиз поврежденных участков органов илитканейна фоне продолжающегося ихбиосинтезав поврежденныхтканях; 2) одновременным повышением каталитическойактивностинекоторыхферментов, переходящих вкровь. Возможно, что повышениеактивности ферментовпри «поломке» механизмов внутриклеточной регуляцииобмена веществсвязано с прекращением действия соответствующих регуляторов иингибиторов ферментов, изменением под влиянием различных факторов строения и структурымакромолекулферментов.

28.Применение ферментов для лечения болезней. Применение ферментов как аналитических реагентов при лабораторной диагностике (определении глюкозы, этанола, мочевой кислоты и т.д.). Иммобилизованные ферменты

Второе направление медицинской энзимологии – энзимодиагностика– развивается по двум путям. Один путь – использованиеферментовв качестве избирательныхреагентовдля открытия и количественного определения нормальных или аномальных химическихвеществвсыворотке крови,моче, желудочном соке и др. (например, выявление при помощиферментовглюкозы,белкаили другихвеществвмоче, в норме не обнаруживаемых). Другой путь – открытие и количественное определение самихферментовв биологическихжидкостяхпри патологии. Оказалось, что рядферментовпоявляется всыворотке кровипри распадеклеток(отсюда их название «некротическиеферменты»). Для диагностики органических и функциональных поражений органов итканейшироко применяются отдельные ферментныетесты, выгодно отличающиеся от других химических диагностическихтестов, используемых в клинике, высокой чувствительностью испецифичностью. Известно около 20тестов, основанных на количественномопределении активности ферментов(иизоферментов), главным образом вкрови(реже вмоче), а также в биоптатах (кусочкитканей, полученные прибиопсии). Следует отметить, что из огромного числаферментов(более 3500), открытых в природе (частично и ворганизмечеловека), в диагностической энзимологии используется лишь ограниченный наборферментови для весьма небольшого числа болезней (гепатиты, инфаркт миокарда, органические поражения почек, поджелудочной железы,печении др.). Так, уровеньлипазы,амилазы,трипсинаихимотрипсинавкровирезко увеличен присахарном диабете, злокачественных поражениях поджелудочной железы, болезняхпечении др. Резко повышается всыворотке кровиуровень двух аминотрансфераз, креатинкиназы (и ее изоформ) илактатдегидрогеназы(и ее изоформ) при инфаркте миокарда; умеренно повышено их содержание при пораженияхтканеймозга ипечени. Определяют, кроме того,активностькислой фосфатазы(уровень повышен прикарциномепредстательной железы), щелочнойфосфатазы, холинэсте-разы и некоторых других органоспецифическихферментов(например, гистидазы, уроканиназы, глицинамидинотрансферазы) всыворотке кровипри патологиикостной ткани,печени, метастатическихкарциномахи т. д. Доказано, что органы итканичеловека характеризуются специфическим ферментным и изоферментным спектром, подверженным не только индивидуальным, но и суточным колебаниям. Существует большой градиентконцентрацииферментовмежду внутриклеточными и внеклеточными частями тела. Поэтому любые, даже незначительные, поврежденияклеток(иногда функциональные расстройства) приводят к выделениюферментовво внеклеточное пространство, откуда они поступают вкровь. Механизм гиперферментации (повышенное содержаниеферментоввкрови) до конца не расшифрован. Повышение уровня внутриклеточныхферментоввплазме кровипрямо зависит от природы повреждающего воздействия, времени действия и степени повреждения биомембранклетоки субклеточных структур органов. В оценке ферментныхтестовдля диагностических целей особое значение имеет знание периода полужизни (полураспада) вплазме кровикаждого из диагностическихферментов, что делает важным выбор точного времени для ферментного анализакрови. Весьма существенным является также знание особенностей распределения (топографии)ферментовв индивидуальных органах итканях, а также их внутриклеточной локализации.

В последнее время стали применять ферментырестрикции– специфическиеэндонуклеазыкатализирующие разрывы межнуклео-тидных связейДНК, для диагностикифенилкетонурии, α- и β-талассемии и другихнаследственныхболезней человека. Метод основан наполиморфизмерестрикционных фрагментовДНК.

Из представленных данных следует, что диагностическая энзимология может служить основой не только для постановки правильного и своевременного диагноза болезни, но и для проверки эффективности применяемого метода лечения.

Дальнейшее развитие диагностической энзимологии преимущественно идет по двум перспективным направлениям медицинской энзимологии: по пути упрощения и рациональной модификации уже испытанных методов и по пути поиска новых органоспецифических (тканеспецифических) ферментовиизоферментов.

Третье направление медицинской энзимологии – энзимотерапия, т.е. использованиеферментови модуляторов (активаторовиингибиторов) действияферментовв качествелекарственных средств, имеет пока небольшую историю. Досихпор работы в этом направлении почти не выходят за рамки эксперимента. Исключение составляют некоторые про-теиназы:пепсин,трипсин,химотрипсини их смеси (абомин,химопсин), которые применяют для лечения ряда болезней пищеварительного тракта. Помимо протеиназ, ряд другихферментов, в частностиРНКаза, ДНКаза, гиалуронидаза,коллагеназы, эластазы, отдельно или в смеси с протеина-зами используются при ожогах, для обработки ран, воспалительных очагов, устранения отеков, гематом, келоидных рубцов, кавернозных процессов при туберкулезе легких и др.Ферментыприменяются также для лечения сердечно-сосудистых заболеваний,растворениясгустковкрови. В нашей стране разработан первый в мире препарат иммобилизованной стрептокина-зы, рекомендованный для лечения инфаркта миокарда. Калликреины –ферментыкининовой системы используются для снижения кровяногодавления.

Важной и многообещающей областью энзимотерапии является применение ингибиторов ферментов. Так, естественныеингибиторыпротеиназ (α1-трипсин, α1-химотрипсин, α-макроглобулин) нашли применение в терапии острых панкреатитов, артритов, аллергических заболеваний, при которых отмечается активацияпротеолизаифибринолиза, сопровождающаяся образованием вазоактивныхкининов.

В последнее время получило признание применение в онкологической клинике ферментовбактериальной природы в качествелекарственных средств. Широко используется L-аспарагиназа (выпускается в промышленных количествах и L-глутамин(аспарагин)азадля лечения острых и хронических формлейкозовилимфогранулематозов. Более десятка описанных в литературе бактериальныхферментовиспытаны в основном на животных с перевивнымиопухолямиили на раковыхклеткахопухолейчеловека и животных, выращенных вкультуре ткани. Основными постулатамиприменения ферментовв онкологии являются различия вметаболизмеклетокопухолейпо сравнению с обменом в нормальной, здоровой,клетке. В частности, современные стратегия и тактика энзимотерапии опухолевых поражений учитывают разную чувствительность нормальных и опухолевыхклетокк недостатку (дефициту) незаменимых (так называемых эссенциальных) факторов роста. К таким ростстимулирующим факторам относятся не только пищевые факторы (витамины, незаменимыеаминокислоты, макро- имикроэлементы), но и ряд так называемых заменимыхвеществ, включая заменимыеаминокислоты, к недостатку которых опухолеваяклеткаоказывается в силу особенностей ее обмена более чувствительной, чем нормальная. Лечебный эффект, например, L-аспарагиназы и L-глутамин (аспа-рагин)азыприлейкозах, вероятнее всего, объясняется необратимым распадом какглутамина, так иаспарагина. Оказалось, что опухолевыеклеткидля своего роста и размножения нуждаются ваминокислотахизорганизма, поскольку сами лишены способности синтезировать амидыаминокислот, в то время как нормальныеклеткинаделены этой способностью. Был сделан вывод о том, что амидныйазотглутаминаиаспарагинавыполняет вклеткахряд уникальных функций, которые лучше выяснены для глута-мина. В частности, амидныйазотглутаминаоказался абсолютно необходимым и не заменимым другимиаминокислотамиисточникоматомаазотаминимум в 10реакцияхсинтеза, например, пуриновых и пиримидиновыхнуклеотидов, соответственноДНКиРНК,АТФ, ге-ксозаминов,гистидинаи др. Таким образом, не лишенаоснованиягипотеза, что любойферментили агент, катализирующий необратимое расщепление незаменимого для опухолевойклеткипищевого фактора (включаяаминокислоты), может в принципе быть применен в энзимотерапииопухолей, если будут устранены ограничения, связанные с белковойприродой фермента. В оценке эффективностиферментовв экспериментальной и клинической онкологии имеется немало противоречий и очень много пробелов. Положительные результаты, отмеченные в ряде случаев, вселяют надежду, что приготовление стандартных ферментных препаратов (включая создание иммобилизованных форм) в промышленных масштабах и их разумное применение в клинике, организованное на строгой научной основе, несомненно дадут в руки врачей еще одно ценное оружие в борьбе с опухолевыми заболеваниями человека.

Идея применения ферментовв качествелекарственных средств(фармакологииферментов) всегда казалась заманчивой. Однако их нестабильность, короткий период полураспада, нежелательные антигенные свойства, связанные с белковойприродой ферментови опасностью развития аллергическихреакций, трудности доставки к пораженным органам итканям(мишеням) существенно ограничивали возможности использования ферментных препаратов. В разработке методовиммобилизацииферментовнаметились конкретные пути преодоления указанных трудностей: применение водорастворимых, биосовместимыхносителей, например полимолочнойкислоты(легко разлагается ворганизме), использование методов химической модификации имикрокапсулирования, приготовление моно- и поликлональныхантители ферментсодержащих липосом и т.д.

В последнее время интенсивно разрабатываются методы направленного транспорта ферментов, заключенных в своеобразные микроконтейнеры (тениэритроцитов,липосомыи др.), к внешней поверхности которых могут быть прикреплены адресные (векторные) белковыемолекулы(например,иммуноглобулины–антителапротив специфических компонентов органа или ткани-мишени, в частностиопухоли).Иммобилизованные ферментыв качествелекарственных средствначали применять в специальных колонках для экстракорпоральной перфузиикрови(типа искусственной почки). Такое лечение полностью исключает нежелательные воздействия наорганизмчужеродногобелкаи может проводиться длительное время.

Источник: studfile.net

Источник