Дифференциально диагностические среды для кишечных инфекций
Основным методом
лабораторной диагностики кишечных
инфекций является бактериологический,
основанный на выделении чистой культуры
возбудителя и ее идентификации. Для
идентификации бактерий кишечной группы
используют изучение их ферментативной
активности и антигенной структуры.
Этапы бактериологического исследования
1 день.
Посев исследуемых материалов на
дифференциально-диагностические среды
(Эндо, Плоскирева, Левина).
Для выделения
гемокультуры сальмонелл производят
посев крови на 10-20% желчный бульон или
на среду Рапопорт. Соотношение крови и
среды должно составлять 1:10. Инкубация
18-24 часа при температуре 37ºС
2 день.
Просмотр и описание колоний. Микроскопия
материала из колоний и окраска по Граму.
Пересев материала из колоний на скошенный
МПА, среду Ресселя для накопления чистой
культуры. Со среды Рапопорт культуру
пересевают на среду Эндо и Ресселя.
В случае диффузного
помутнения и изменения цвета среды
Рапопорта (она приобретает красный
цвет) за счет ферментации глюкозы с
образованием кислоты делают предварительный
вывод о наличии возбудителей брюшного
тифа; при наличии кроме этих признаков
газообразования в поплавке — возбудителей
паратифов.
Постановка
ориентировочной реакции агглюцинации
на стекле с материалом из отдельных
колоний и смесью эшерихиозных сывороток,
со смесью дизентерийных сывороток, со
смесью сывороток против сальмонелл,
содержащих антитела против наиболее
распространенных сероваров возбудителей
кишечных инфекций. При положительном
результате проводят реакцию агглютинации
с моновалентными агглютинирующими
сыворотками на стекле.
3 день.
Проверка чистоты выделенной культуры.
Учет изменения цвета среды Ресселя.
Постановка с чистыми культурами реакции
агглютинации на стекле с поливалентными
сыворотками, затем с видовыми и типовыми
сыворотками. Постановка развернутой
реакции агглютинации. Пересев культур
на среды для определения ферментативной
активности (среды Гисса).
4 день.
Учет результатов реакции агглютинации.
Учет роста на
средах Гисса.
Окончательный
ответ о виде и сероваре дают на основании
результатов реакции агглютинации и
«пестрого» ряда.
Возбудители
эшерихиозов ферментируют глюкозу и
лактозу с образованием кислоты и газа,
выделяют сероводород.
Шигеллы ферментируют
углеводы с образованием кислоты.
Возбудители сальмонеллезов не ферментируют
лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу
маннит и мальтозу с образованием кислоты
и газа, не образуют индол и за небольшим
исключением выделяют сероводород.
Дифференциально-диагностическая
таблица кишечно-тифозной группы
Название бактерий | Углеводы | Индол | Подвижность | Экзотоксин | ||||
Лактоза | Глюкоза | Мальтоза | Маннит | Сахароза | ||||
Кишечная палочка | кг | кг | кг | кг | кг или – | + | | |
Паратифозная В-палочка | – | кг | кг | кг | – | – | + | – |
Паратифозная А-палочка | – | кг | кг | кг | – | – | + | – |
Брюшнотифозная | – | к | к | к | – | – | + | – |
Дизентерийная Григорьева-Шига | – | к | – | – | – | – | – | + |
Дизентерийная Флекснера | – | к | к или – | к или – | к или – | | – | – |
Дизентерийная Зонне | к (2-10 суток) | к | к или – | к | к | – | – | – |
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
1. Питательные среды для культивирования и изучения биохимических свойств
1.1.
Среды Эндо,
Левина, Плоскирева.
Используют как дифференциально-диагностические
элективные среды для культивирования
бактерий кишечной группы (содержит
лактозу). Микроорганизмы, ферментирующие
находящийся в этих средах молочный
сахар (лактозу), образуют окрашенные
колонии — лактозоположительные (колонии
красного цвета с металлическим блеском
или без блеска). Колонии микробов, не
ферментирующие лактозу, бесцветные —
лактозонегативные – нежно-розовые,
прозрачные, пропускающие свет.
К
100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70°С
стерильно добавляют 5 мл 20% раствора
лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора
основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного
раствора сульфата натрия.
1.2.
Среды с крахмалом используют
для выявления микроорганизмов, образующих
амилазу. Наличие фермента определяется
при добавлении к культуре несколько
капель раствора Люголя
(цвет
среды не изменяется). Нерасщепленный
крахмал дает с этим раствором синее
окрашивание.
1.3.
Молоко. При
росте микроорганизмов, сбраживающих
лактозу, свертывается.
2.
Коммерческие наборы – для изучения
биохимических свойств (идентификации
микроорганизмов по сахаролитической
и протеолитической активности).
2.1.
Среды Гисса с углеводами (глюкоза,
лактоза, сахароза, арабиноза и другие)
в
которых выявляют ферментативную
активности микроорганизмов.Под
действием образующейся при расщеплении
углевода кислоты индикатор изменяет
окраску среды. Соломенно-желтого цвета
среда при положительной реакции меняет
цвет на красный или интенсивно розовый,
поэтому эти среды названы «пестрый
ряд». Микробы, не ферментирующие данный
углевод, растут на среде, не изменяя ее
цвета. Наличие газа устанавливают по
образованию пузырьков в средах с агаром
или по скоплению его в «поплавке» на
жидких средах.
Состав:
пептон — 10 г, хлорид натрия — 5 г, углевод
— 10 г, реактив Андреде (фуксин)- 10 мл, вода
дистиллированная до 1000 мл, рН после
стерилизации 7,2-7,4.
2.2. Среды для изучения протеолитических свойств
Среды
с желатином.
В некоторых бактериях (холерный вибрион,
стафилококк, сибиреязвенная палочка и
т. д.) протеолитические ферменты
выявляются путем разжижения желатины.
Среды
с молоком.
Микроорганизмы, расщепляющие казеин
(молочный белок),
вызывают пептонизацию молока — оно
приобретает вид молочной сыворотки.
Среды
с пептоном.
При расщеплении пептонов могут выделяться
индол, сероводород, аммиак. Их образования
определяют с помощью индикаторных
бумажек. Фильтровальную бумагу заранее
пропитывают определенными растворами,
высушивают, нарезают полосками и, после
посева культуры на МПБ, помещают под
пробку между нею и стенкой пробирки.
После инкубации в термостате учитывают
результат. Аммиак вызывает посинение
лакмусовой бумажки; при выделении
сероводорода на бумажке, пропитанной
раствором, содержащим ацетат свинца,
бикарбонат натрия, происходит образование
сульфата свинца — бумажка чернеет; индол
вызывает покраснение бумажки, пропитанной
горячим насыщенным раствором щавелевой
кислоты.
2.3.
Микротесты — системы (МТС).
Они
представляют собой полистироловые
пластины с лунками, в которых содержатся
стерильные дифференциально-диагностические
среды.
2.4.
Системы индикаторные бумажные (СИБ) —
дифференциально-диагностические
среды на фильтровальной бумаге.
Для
культивирования и дифференциации
анаэробных микроорганизмов: среда
Вильсон-Блера.
Готовят из мясо-пептонного агара, к
которому добавляют глюкозу, Na2S03,
хлорид
железо FeCl2.
На этой среде возбудитель газовой
гангрены образует почернение и разрыв
агара. Рост происходит в глубине агара.
При этом осуществляется восстановление
Na2S03
в Na2S
(сульфит натрия), который соединяясь с
хлоридом железа, образует сульфат
железа черного цвета. Разрыв питательной
среды связан с газообразованием.
к
работе № 2
Микроорганизмам,
как всему живому, присущи три основные
физиологические функции: питание,
дыхание и размножение.
Питание
необходимо для синтеза в клетке всех
органических структур, оно осуществляется
с поглощением энергии. Основным источником
энергии являются окислительно-восстановительные
процессы (дыхание). По типу питания
микробы делятся на аутотрофов
и гетеротрофов.
Аутотрофы усваивают азот и углерод из
неорганических веществ (углекислый газ
и др.), а гетеротрофы — из сложных
органических соединений (аминокислоты,
моносахара и др.), синтезированных ранее
другими живыми организмами. Гетеротрофы
в свою очередь делятся на сапрофитов
и паразитов.
Сапрофиты нуждаются в органических
соединениях мертвого субстрата, а
паразиты получают питательные вещества
в организме-хозяине. Паразиты могут
быть облигатными (внутриклеточными) и
факультативными. Облигатные внутриклеточные
паразиты (хламидии) лишены способности
жить и размножаться вне клеток хозяина,
т.к. зависят от их метаболизма.
Факультативные паразиты (гонококки,
стафилококки и др.) могут питаться как
в организме, так и вне его, поскольку
обеспечены автономными ферментными
системами при образовании веществ и
энергии.
Основные
понятия темы:
Колония
– видимое невооруженным взглядом
скопление микробов на плотной питательной
среде, выросшее из одной клетки.
Колония
— это потомство микробов, выросших из
одной клетки. Т.к. все микробы в колонии
выросли из одной клетки, они относятся
к одному виду, т.е. в каждой изолированной
колонии (отдельно стоящей, не сливающейся
с другими колониями) содержится чистая
культура.
Чистая
культура – популяция
микроорганизмов, состоящая из особей
одного вида.
Индикация
– обнаружение
возбудителя в исследуемом материале
(определение рода)
Идентификация
– определение
вида, типа, биовара, серовара, фаговара
выделенной чистой культуры.
к
работе № 3
Дыхание
микроорганизмов –
биологическое окисление субстрата с
выделением необходимой для
метаболизма энергии.
По типу дыхания микроорганизмы делятся
на 3 основные группы: аэробы
могут жить только в присутствии кислорода
(холерный вибрион); факультативные
анаэробы
могут жить при любом процентном содержании
кислорода и без него (кишечная палочка);
анаэробы
(облигатные)
– только в отсутствие кислорода
(возбудители газовой гангрены). При
культивировании облигатных анаэробов
требуется создание особых условий
анаэробиоза.
При этом используют особые приборы и
среды (анаэростат, эксикатор, среды
тиогликолиевая, Вильсона-Блера).
к
работе № 4
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
Культивирование. Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Они неприхотливы и растут без всяких особенностей на простых питательных средах при температуре 37 С и pH среды 7,2— 7,4. Элективной средой является, например, желчный бульон. При диагностике брюшного тифа, как и других кишечных инфекций, используют дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар и др. [c.202]
Для выявления ферментов, расщепляющих углеводы, используют дифференциально-диагностические среды Гисса. При ферментации бактериями углеводов с образованием кислоты цвет среды меняется за счет находящегося в ней индикатора, что создает впечатление пестроты ( пестрый ряд). В зависимости от изучаемого рода и вида бактерий подбирают среды с соответствующими моно- и дисахарами (глюкоза, лактоза, мальтоза, сахароза и др.), полисахаридами (крахмал, гликоген, инулин и др.), высшими спиртами (глицерин, маннит и др.), в процессе ферментации которых образуются альдегиды, кислоты и газообразные продукты (СОз, Н2, СН4). [c.33]
Посев на дифференциально-диагностическую среду [c.53]
Культивирование. Кишечная палочка — факультативный анаэроб не требовательна к питательным средам, хорошо растет на простых питательных средах при температуре 37 и pH среды 7,2—7,4, вызывая диффузное помутнение жидкой среды и образуя обычные колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов широко используют дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина и др. [c.197]
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические признаки бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах. [c.48]
Для обнаружения патогенных бактерий максимальные объемы воды пропускают через мембранные фильтры, которые затем помешают в жидкие элективные среды или на поверхность плотных дифференциально-диагностических сред. [c.89]
Оставшийся от посева материал, являющийся питательной средой, благоприятной для бактерий, ставят в термостат вместе с посевами. В течение 10 дней из него производят высевы на плотные дифференциально-диагностические среды. [c.213]
Второй день исследования. 1. Просматривают посевы, сделанные на дифференциально-диагностических средах, простым глазом и через лупу (Х5 или Х10), чтобы не пропустить мелкие колонии. Если через 24 ч после произведенного посева на висмут-сульфитной среде роста колоний, характерных для сальмонелл, не видно, чашки оставляют в термостате еще на сутки. [c.214]
Дифференциально-диагностические среды обычно являются плотными, реже полужидкими в своем составе они имеют несколько ферментируемых субстратов и индикаторных систем, что позволяет использовать их не только для накопления чистой культуры в процессе ее выделения (см. ниже), но и одновременно проводить первичную идентификацию культуры по ряду фенотипических признаков. Так, на трехсахарном железосодержащем агаре можно определить способность культуры к продукции сероводорода, ферментацию глюкозы (до кислоты или кислоты и газа), лактозы, сахарозы (см. цв. вклейку, рис. 8), [c.28]
Различные представители бактерий рода сальмонелл на плотных дифференциально-диагностических средах образуют колонии с признаками, описанными в табл. 32. [c.214]
Дифференциально-диагностические среды позволяют различать бактерии по их росту, биохимической активности и другим признакам. В состав этих сред, кроме питательных веществ, обычно включают субстрат, по отношению к которому дифференцируются бактерии, и индикатор. В результате культивирования микробы, ферментирующие субстрат, способствуют накоплению продуктов расщепления, сдвигу pH, редокс-потенциала среды, что сопровождается окрашиванием среды и собственных колоний в цвет индикатора (см. цв. вклейку, рис. 7). [c.28]
Биохимические свойства большого количества культур аэробных и анаэробных бактерий нередко изучают с применением специальных микротестсистем и микробиологических анализаторов. Как правило, для этого используют полистироловые пластины с изолированными лунками, содержащими высушенные дифференциально-диагностические среды. При внесении небольшого количества стандартизованной суспензии испытуемой чистой культуры среда в лунках восстанавливается, а при последующем инкубировании в термостате культура вырастает в лунках, проявляя свои характерные изменения на соответствующих средах (см. цв. вклей- [c.34]
Рассмотрим негативное влияние микроорганизмов на здоровье человека, животных и растений. Необходимо иметь в виду, что развитие болезни — это обоюдный процесс, в котором не последнюю роль Ифает подвергшийся инфицированию макроорганизм. Болезнетворные микроорганизмы имеются среди вирусов, бактерий, грибов и простейших. Определение инфекционного агента проводится, как правило, по стандартной схеме с использованием дифференциально-диагностических сред и биохимических тестов. В настоящее время эта идентификация упрощена, так как разработаны тест-наборы для экспресс-методов, а также выпускаются готовые индикаторные среды. [c.307]
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения дифференциально-диагностических сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности и имеют неодинаковый набор ферментов, расщепляющих субстраты, входящие в состав питательной среды. В состав дифференциально-диагностической среды входят следующие основные компоненты а) основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий б) определенный химический субстрат (например, лактоза), различное отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба в) цветной индикатор (например, индикатор Андреде), изменение цвета которого свидетельствует о биохимической реакции и наличии данной ферментной системы у исследуемого микроорганизма. Дифференциально-диагностические среды широко используются в лабораторных микробиологических диагностических исследованиях для дифференциации и идентификации бактерий. [c.44]
Дифференциально-диагностические среды. Среды Г и с-са. К 1% пептонной воде добавляют 0,5% определенного углевода (глюкоза, лактоза, мальтоза, маннит и дрЛ и индикатор Андреде (кислый фуксин в 1 н. растворе КаОН) разливают по пробиркам, в которые помещают поплавок (трубка длиной около 3 см, один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов, образующихся при разложении углеводов. Стерилизацию проводят текучим паром или паром под давлением 0,5 атм поплавок при этом заполняется питательной средой. Среда при pH 7,2—7,4 бесцветна. При разложении углеводов приобретают красный цвет. [c.46]
Для выделения культуры бактерий Е. oli исследуемый материал засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (например, среду Эндо, на которой кишечная палочка образует красные колонии). Дальнейшая идентификация выделенной чистой культуры с определением серовара описана на с. 178). [c.143]
Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина). Для посева петлю кала вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков петлю тонкой суспензии наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают щпателем по одной, а затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при ЗТС в течение 18—20 ч. Одновременно испражнения засевают на среду обогащения Мюллера или селенитовую среду. На этих средах удается получить рост возбудителя даже в том случае, когда он содержится в исследуемом материале в незначительном количестве. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18—20 ч. [c.185]
Бактериологическое исследование. Описать характер колоний, выросши] на чашках с дифференциально-диагностической средой после посева испраж нений больного и остатков пищи — возможных источников пищевой токсикоин фекции. [c.194]
В состав дифференциально-диагностических сред, предназначенных для выявления сахаролитических и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы нейтральную красную, метиленовый синий, лакмусовую настойку, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту (ВР). Изменяя свою окраску при различных значениях pH, индикатор указывает на наличие или отсутствие расщепления, окисления или восстановления введенного в среду ингредиента. Однако индикатор не является обязательной составной частью сред, предназначенных для выявления ферментов. Так, наличие желатиназы и других протеолитических ферментов в культуре определяют по разжижению желатина, свернутого яичного или сывороточного белка. [c.37]
Первичный посев и выделение сальмонелл из кишечного содержимого. Бактериологическое исследование испражнений ведут по методике, обеспечивающей возможность выделения любого представителя патогенных кишечных бактерий, которые могут содержаться в исследуемом материале патогенные эшерихии, сальмонеллы, шигеллы. Из этих соображений посев материала производят параллельно на несколько сред, каждая из которых способствует преимущественному выделению того или иного возбудителя. Для выделения сальмонелл, в том числе бактерий брюшного тифа, паратифов, исследуемый материал высевают на дифференциально-диагностические среды висмут-сульфитный агар, среду Плоскирева и на среды обогащения—селенитовую среду накопления Лейерсона (рец. 74) или па магниевую среду средами обогащения можно применять также жидкую среду Мюллера (рец. 72) и Кауфмана (рец. 73). При посеве в среды обогащения соотношение между за-севаемы.м материалом и питательной средой должно оставаться постоянным, равным 1 5. [c.213]
Характер роста бактерий тифопаратифозиой группы иа дифференциально-диагностических средах [c.215]
Смотреть страницы где упоминается термин Дифференциально-диагностические среды:
[c.7]
[c.154]
[c.195]
Источник