Днк на гепатит в как сдавать
Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.
ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:
- при возникновении признаков гепатита В у пациента;
- во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
- для уточнения эффективности терапии.
Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.
Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.
Для ПЦР-анализа делается забор венозной крови
Метод ПЦР даёт возможность выявить ДНК возбудителя даже при минимальном его присутствии в отобранной пробе крови. Кроме того, анализ позволяет обнаружить антигены, которые уже выработались на вирус. Каждый из антигенов свидетельствует об определённой стадии болезни:
- HBsAg — вирус присутствует в данный момент.
- Анти-HBcor — возбудитель в настоящее время отсутствует, но имелся в прошлом.
- Анти-HBs — в крови имеются антитела к гепатиту B (как вариант — герпесу, ВИЧ, хламидиозу, микоплазмозу, кандидозу, туберкулёзу, клещевому энцефалиту и многим другим болезням).
Патология и её признаки
Гепатит B или HBV — это вирусная инфекция, поражающая клетки печени. Она опасна не только непосредственным воздействием на паренхиму органа, ослабляющим барьерную функцию и общий иммунитет. Возможны и более тяжёлые последствия, такие как цирроз печени и возникновение злокачественных новообразований.
HBV передаётся через кровь человека, инфицированного гепатитом, его экскременты, через контакты со слизистыми оболочками, особенно при половом акте, повреждениями кожи, через нестерильные шприцы при переливании крови или при полостных операциях. Возможно заражение новорожденного его больной матерью при прикосновении к трещинам на её сосках.
Для гепатита B характерны следующие симптомы:
Непривычная утомляемость
- нарастающая усталость при небольших нагрузках;
- непривычная утомляемость;
- тяжесть в области правого подреберья;
- пониженный аппетит, тошнота;
- желтушность кожных покровов, склер глаз;
- светлый кал;
- тёмная моча;
- болезненные ощущения в суставах.
Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.
Показаниями к ПЦР являются:
- положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
- острый и хронический гепатит;
- микст-гепатиты;
- количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
- разработка тактики эффективной терапии.
Подготовка к анализу
Перед процедурой необходимо 15-20 минут полного покоя
Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.
Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:
- полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
- воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
- 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
- прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
- детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.
Как проходит исследование
В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.
Амплификатор
Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.
Расшифровка результатов
Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.
Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:
- Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
- Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
- Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
- Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.
Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»
Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.
Особенность полимеразной цепной реакции
В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.
Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.
Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.
Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:
- конкретную вирусную нагрузку на печень;
- интенсивность прогрессирования заболевания;
- устойчивость к препаратам противовирусной группы;
- результативность лечения.
Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.
Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.
Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса
Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.
Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:
- количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
- сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
- маркеров вирусной инфекции;
- результатов биопсии печени.
Общие цели ПЦР
Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:
- обнаружить носители вируса;
- прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
- убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
- мониторить активность вируса на всех фазах развития;
- выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
- оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.
Преимущества метода
В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:
Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью
- Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
- Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
- Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
- Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
- Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
- Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.
Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.
Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.
Источник
Гепатит В – серьезная патология, требующая обязательной диагностики и систематического прохождения необходимых лабораторных исследований. Главным является анализ крови на гепатит В. Методика позволяет определить присутствие маркеров вируса и антител к ним. В случае получения положительного результата больному назначается прохождение курса терапевтических мероприятий и корректировка рациона питания.
Виды анализов на гепатит В
В настоящее время гепатит считается одним из наиболее опасных и распространенных заболеваний. Специалисты на протяжении долгого времени изучают патологию, чтобы выявить присутствие болезни в организме и своевременно подобрать наиболее эффективное лечение. В результате исследования было выявлено, что вирус способен сохранять активную форму даже при воздействии высоких или низких температур, он имеет способность находиться в любой биологической жидкости и переходить на здоровый организм.
Пройти процедуру сдачи анализа крови на гепатит В разрешается любому желающему человеку. Однако есть ряд людей, которым проведение лабораторного исследования необходимо в обязательном порядке. К таковым относятся пациенты, которым требуется оперативное лечение, доноры крови, женщины в период вынашивания ребенка и люди с ослабленной иммунной системой.
Существует несколько разновидностей анализов на гепатит В, выявляющих присутствие данного патологического процесса в организме:
- Иммуноферментный анализ крови (ИФА). Исследование дает возможность обнаружить присутствие вируса на любой стадии развития заболевания, методика предоставляет достоверный результат. Процедура изучения материала проводится при помощи специальных реактивов и качественного оборудования. Одновременно с этим технология дает возможность обнаружить типовую разновидность возбудителя болезни. Расшифровка полученных данных включает в себя подробное описание присутствующих антител и антигенов. Процедура требует от пациента тщательной подготовки.
- Иммунохроматографический (ИХА). Анализ имеет более распространенное название — экспресс-тест. Методика начала пользоваться успехом и высоким спросом сравнительно недавно. Процедура подразумевает прокалывание пальца, после чего на специальную кассету попадает кровь. Результаты проявляются в виде полосок, которые возникают по прошествии 15 минут. Способ удобен при отсутствии возможности пройти обследование в пределах медицинского учреждения. При получении положительного заключения человеку незамедлительно рекомендуется обратиться к врачу.
Онкомаркер
- Полимеразная цепная реакция. Материалом для исследования является кровь. Позволяет выявить ДНК-вирус гепатитного заболевания и его присутствующее количество.
Вычисление печеночных ферментов. Процедура проводится посредством биохимического анализа крови. При повреждении внутреннего органа на клеточном уровне происходит повышение количества присутствующих в биологическом материале гепатоцитов. Методика дает возможность установить серьезность воспалительного процесса в результате влияния гепатита. - Анализ на пигменты. Способствует выявлению общего числа билирубина. Одновременно с этим возможно произвести оценку работоспособности печени и установить причину возникновения желтушности кожных покровов.
- Анализ на белки и систему гемостаза. Помогает определить качество синтезирования белка печенью. В большинстве случаев обнаруживается нарушение процесса свертываемости крови.
- Онкомаркер. Выявляет не только присутствие гепатита, но и онкологических заболеваний в организме человека.
Вышеперечисленные анализы позволяют установить подробную картину относительно общего состояния пациента. Методики помогают определить активность присутствующего вируса и характер повреждения печени даже при отсутствии наиболее распространенных симптоматических признаков: желтушности кожных покровов, присутствии болевых ощущений в области суставных соединений, повышении температуры тела и возможной временной потери сознания.
Как подготовиться к сдаче
Большую роль в подготовке к проведению забора материала для последующего исследования играет питание. Это связано с тем, что после приема пищи корректируется концентрация отдельных продуктов расщепления в крови. После завершения усвоения пищи изменяется и гормональный фон человека. Забор крови производится исключительно натощак.
Последний прием пищи должен быть не позднее, чем за 10 часов до проведения мероприятия. Рекомендуется ограничиться легким блюдом в небольшой порции. Запрет распространяется и на употребление жидкости. Применение сахара даже в минимальном количестве способно повлиять на достоверность полученных результатов. Перед сдачей анализа рекомендуется отказаться от чистки зубов, допустимо употребление незначительного объема воды.
Отказ от еды
Пациенты из-за незнания правил подготовки отказываются от еды на несколько суток, однако суждение ошибочно, так как продолжительное голодание способно повлиять на правдивость полученных результатов. При отсутствии пищи в организме на протяжении двух дней в крови повышается уровень билирубина – основополагающего показателя лабораторного исследования. При помощи вещества появляется возможность установить стадию заболевания и характер поражения печени на клеточном уровне. При более длительном воздержании от пищи снижается показатель глюкозы и изменяется количество свободных жирных кислот в биологическом материале. Холестерин в данном случае изменению практически не подвергается. Для получения достоверного результата питание накануне должно быть полноценным. Из рациона рекомендуется исключить слишком острую, жирную и соленую пищу. Все эти компоненты способствуют помутнению биологического материала и снижению их правдоподобности.
Накануне назначенной даты рекомендуется лечь спать в удобное для пациента время. Процедура проводится в период с 7 до 9 часов утра, поэтому проснуться рекомендуется не позднее, чем за час до установленного срока. Людям с вредными привычками стоит отказаться от курения примерно за час до забора крови, а от употребления напитков, содержащих алкоголь — не позднее, чем за несколько суток. Подготовительный период подразумевает отказ от приема медикаментозных препаратов, при отсутствии такой возможности следует сообщить лечащему врачу.
На полученные результаты способны оказывать влияние физические нагрузки. Они должны быть оптимальными и умеренными. Отказываться от двигательной деятельности запрещается. Одновременно с этим, пациенту запрещено проводить:
Массаж
- физиотерапевтические мероприятия;
- массаж;
- рентгенологическое или ультразвуковое исследование.
На результаты способны повлиять хирургическое лечение любой направленности, проведение биопсии, переливание крови и введение инъекций. Не меньшую роль играет эмоциональное состояние пациента. Необходимо избегать посещения парилок и пляжа минимум за двое суток до осуществления мероприятия.
Процесс забора крови
Процедура по взятию крови представляет собой сдачу биологического материала из вены пациента. Заблаговременно больным должны быть соблюдены все правила и требования относительно периода подготовки.
Первым делом медицинский работник осуществляет затягивание жгута на предплечье верхней конечности больного. Позволяет ограничить приток крови. Вены становятся более заметными, что позволяет сделать прокол и произвести процедуру без нарушений (исключить возможность попадания инфекции). Место прокола протирается спиртосодержащей жидкостью, после чего проводится введение иглы. К ней прикрепляется специальная трубка, посредством которой производится сбор биологического материала. После завершения процедуры участок обрабатывается. Не исключается появление синяка на месте прокола эпидермиса. При необходимости пациенту разрешается в течение некоторого времени оставаться в пределах медицинского учреждения.
Забор крови
Расшифровка результатов
Полученные результаты могут свидетельствовать о наличии или отсутствии заболевания в организме пациента. Отрицательные показатели не всегда говорят об отсутствии проблемы. Для подтверждения заключения пациент направляется на повторное исследование. Рекомендуется проводить забор крови на гепатит В в одном и том же медицинском учреждении или поликлинике.
| Антиген | Показатель нормы | Возможные отклонения |
| HBsAg Показатель присутствия в организме вируса гепатита группы В. Подразделяется на качественное и количественное. | 0,5 МЕ/мл. | Меньшее значение свидетельствует о наличии вируса в крови пациента или низкое его содержание (период выздоровления). Повышенный показатель диагностирует присутствие патологии в острой или хронической форме. |
| Anti-HBcor | Антитела могут присутствовать или отсутствовать в клетках крови. | Отсутствие антител свидетельствует о неактивной стадии патологического процесса, однако не исключается и переход заболевания в хроническую форму. |
| Anti-Hbe | Анализ показывает наличие или отсутствие белковых соединений. | Положительные значения говорят о начальном этапе выздоровления пациента. Допустимо диагностирование вируса в «спящей» форме (при отсутствии проявления симптоматических признаков). Отрицательное значение свидетельствует о том, что у больного не выявлялась подобная форма болезни, у пациента допускается выявление присутствия антигена HBs. |
| Anti-HBs | 1. < 10 мЕд/мл; 2. ≈ 10 мЕд/мл;3. > 10 мЕд/мл. | 1. Антитела не обнаружены в крови, в виде исключения возможно присутствие заболевания в острой форме. 2. Показатель свидетельствует о безуспешности проведения прошедшей вакцинации либо вирус находится в неактивном состоянии и сниженной возможностью размножения и распространения. 3. Возникает в результате проведения вакцинации, характеризуется успешной реакцией иммунной системы. При диагностированной острой форме гепатита значение говорит о переходе организма на стадию выздоровления. |
Возникает ситуация, когда результаты становятся ложноположительными. В данном случае рекомендуется проведение повторного лабораторного исследования по прошествии двух недель, сдавать анализ необходимо по установленной схеме.
Ложноположительные результаты
Медицинской практике известно получение ложноположительных или ложноотрицательных результатов лабораторного исследования крови. Вторая разновидность результатов определяется в случае изучения биологического материала ранее, чем через месяц после возникновения заражения организма. Подобное заключение возможно при течении патологии в неактивной форме, а также при отсутствии борьбы иммунной системы пациента.
Факторов, способных повлиять на получение ложноположительного результата насчитывается немалое количество. К основным из них относятся:
Беременность
- выявление у пациента патологических процессов аутоиммунного характера;
- присутствие в организме человека злокачественных и доброкачественных новообразований на любой стадии развития;
- диагностирование заболеваний инфекционной этимологии, в том числе и верхних дыхательных путей;
- нарушение функциональности иммунной системы человека;
- применение препаратов, действие которых направлено на повышение активности иммунной системы;
- период вынашивания ребенка из-за нарушения гормонального фона и изменения состава крови на микроэлементном уровне.
Среди человеческих факторов распространенными считаются нарушения правил забора биологического материала, допущение ошибки со стороны работников лаборатории, воздействие на забранный материал повышенных температур и несоблюдение рекомендаций относительно подготовительного периода.
Таким образом, анализ крови на гепатит В — важная процедура, которую необходимо пройти при подозрении в организме патологического процесса. Важно помнить о том, что на достоверность полученных данных способны повлиять различного рода факторы. Пациенту следует ответственно подойти к процедуре забора биологического материала и придерживаться установленных правил и рекомендаций лечащего доктора. С целью предотвращения возникновения и развития гепатита следует уделить внимание профилактическим мероприятиям.
Источник
