Днк вируса гепатита b хронический гепатит b

Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.

Венозную кровь.

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
Не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.

Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.

Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.

Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.

Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его «узнавание» иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.

Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:

выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).

У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.

В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.

Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.

Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.

Серологические маркеры фазы интеграции:

наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
отсутствие в крови ДНК-вируса;
сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).

Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.

HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.

HBeAg – ядерный ‘е’-антиген вируса гепатита В

Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.

При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.

anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному ‘core‘ антигену вируса

Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.

Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.

anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core’ антигену вируса гепатита В

Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.

anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В

Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.

anti-HBe – антитела к ‘е’-антигену вируса гепатита В

Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.

HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В

Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.

Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.

Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.

Для чего используется исследование?

Для оценки серологического профиля;
для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
для наблюдения за течением хронического гепатита В;
для оценки эффективности противовирусной терапии.

Когда назначается исследование?

При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).

Что означают результаты?

Референсные значения

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

[07-004] anti-HBc, IgM
[07-005] anti-HBc, антитела
[07-007] anti-HBs, антитела
[07-024] HBeAg
[07-025] HBsAg
[07-111] anti-HBe, антитела
[09-008] HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Острый гепатит В. Выделяют «дикий» штамм (естественный) и «мутантный» штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с «диким».

Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:

ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин «носительство HBsAg»);
НВе-негативный ХВГВ;
НВе-позитивный ХВГВ.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В

Маркеры							ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
HBsAg	HBeAg	anti-HBc		anti-HBs	anti-HBe	HBV, ДНК
		IgM	IgM + IgG
+	+	+	-/+	—	-/+	+	Острый гепатит В (дикий штамм)
+	—	+	+	—	+/-	+	Острый гепатит В (мутантный штамм)
—	—	—	+	+	+/-	—	Иммунитет после перенесенного гепатита
+	—	—	+	—	+/-	+/-	ХВГВ с минимальной активностью
+	—	—	+	—	+	+	HBe-негативный ХВГВ
+	+	—	+	—	—	++	HBe-позитивный ХВГВ

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог.

[09-009] HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

[06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)

[40-120] Билирубин и его фракции (общий, прямой и непрямой)

[06-045] Фосфатаза щелочная общая

[06-004] Альбумин в сыворотке

[03-011] Фибриноген

[40-483] Лабораторное обследование функции печени

Литература

А. М. Сокурова, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов, УДК: 616.36-002:578.891.
Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

Источник

Вирусный гепатит B встречается не очень часто, так как существует вакцина, которая предупреждает инфицирование вирусом-возбудителем недуга. Детей прививают сразу же после рождения, а в дальнейшем вакцинация происходит по достижению совершеннолетия.

Тем не менее, распространенность гепатита B высокая. Распознать данное заболевание достаточно просто. Нужно лишь пройти ПЦР-исследование (полимеразная цепная реакция). При помощи анализа можно выявить ДНК вируса гепатита B. Для постановки более точного диагноза производится количественное исследование.

Лечат ВРВ сугубо консервативно. Пациенту назначаются интерфероны, поливитаминные комплексы, гепатопротекторы, противовирусные ЛС. Рассмотрим подробнее патогенез болезни и выясним, в каких случаях нужно сдавать ПЦР-исследование, и как его правильно расшифровать.

Патогенез и особенности вирусного гепатита Б

Гепатит Б (сокращенно ВРВ) – вирусное заболевание, при котором наблюдается воспалительный процесс в клетках печени. Недуг может привести к увеличению печени и изменению ее структуры. При отсутствии своевременной терапии гепатит перестает в цирроз или жировой гепатоз.

Возбудитель ВРВ – ДНК-содержащий вирус из семейства гепаднавирусов (сокращенно называют вирус ГВ или HBV). Антиген к инфекционном агенту был открыт только в 1964 году. Отличительная особенность вируса состоит в том, что он чрезвычайно стойкий к химическим и физическим факторам.

Так, инфекционный агент не погибает при резких перепадах температур, под воздействием заморозки, а также при длительном воздействии кислой среды. Более того, врачи утверждают, что HBV может сохраняться при комнатной температуре до нескольких недель. К примеру, инфекционный агент может сохраняться на бритве зараженного человека, в пятнах крови, на различных медицинских инструментах. По различным оценкам, ВРВ страдают порядка 300 тысяч людей.

Выделяют 4 пути передачи инфекционного агента:

Половой. При незащищенном половом контакте происходит травматизации слизистых оболочек половых органов, вследствие чего вирусу в разы легче попасть в кровоток, а оттуда в воротную вену и печень. HBV при защищенном половом акте не передается. Кстати, инфицирование при поцелуях и объятьях считается невозможным.
Вертикальный путь. Инфекционный агент может поникнуть через плаценту. Также возможно инфицирование при прохождении ребенка через родовые пути. А вот через грудное молоко заразиться практически нереально.
Бытовой. Заразиться можно, если здоровый человек использует одни и те же средства личной гигиены с носителем вируса.
Парентеральный, то есть через кровь. Так, HBV можно заразиться при посещении стоматологических клиник, студий тату, косметологических салонов, маникюрных, педикюрных, кабинетов пирсинга. Возможно инфицирование при переливании крови, при трансплантации органов, во время гемодиализа, при оперативных вмешательствах.

Гепатит Б не передается воздушно-капельным путем. А при контакте с биологическими жидкостями человека (спермой, слюной, секретом внутренних органов, менструальными и влагалищными выделениями) вероятность инфицирования сохраняется.

ПЦР-исследование на ДНК вируса

Подготовка к анализу

Выше уже отмечалось, что для постановки диагноза нужно сдать ПЦР гепатита B. Чтобы исследование было точным, пациенту нужно соблюсти ряд несложных правил. Первое и самое главное – сдавать анализ натощак. Только так можно получить точный результат. Пить воду в день исследования можно.

Также накануне исследования крайне не рекомендуется принимать алкогольные напитки. В идеале – воздерживаться от приема спиртного хотя бы за 3-5 дней до проведения забора крови. Известны случаи, когда вследствие употребления алкоголя человек получал ложноположительный или ложноотрицательный результат. Хотя на сегодняшний день это считается практически невозможным, так как ПЦР – высокоточный анализ.

Не помешает:

В день исследования не курить.
Накануне сдачи соблюдать диету.
По рекомендации врача прервать прием препаратов, которые в той или иной степени способны оказывать влияние на полученный результат.
Избегать физических нагрузок.

Если человек уже проходит противовирусную терапию, то прерывать прием ЛС накануне ПЦР не нужно. Цена комплексного ПЦР-исследования в частных лабораториях (Синево, Гемотест и пр.) стартует от 2000 рублей.

Качественный анализ

Обнаруживать ДНК ВРВ помогает качественный ПЦР-анализ. Он назначается не только при подозрении на гепатит Б. Проходить качественное исследование рекомендуется тем людям, которые проходят или закончили прохождение противовирусной терапии. ПЦР может назначаться людям, которые проживают с инфицированным человеком.

Цель качественного ПЦР – обнаружить ДНК вирусного агента. Расшифровка проводится очень просто. Качественный анализ дает либо положительный, либо отрицательный результат. В первом случае вирус обнаружен, во втором – нет.

Но есть один нюанс. Несмотря на то, что ПЦР достаточно точный анализ, получить ложноположительный или ложноотрицательный результат можно. По словам гепатологов, лучше сдать исследование два раза в разных лабораториях.

Количественный анализ

Количественный анализ на гепатит B проводится тоже в обязательном порядке при подозрении на наличие ВРВ в организме. Что такое количественное исследование и зачем оно нужно? Как понятно из названия, анализ помогает определить количество инфекционного агента в организме. При помощи исследования врач может оценить степень тяжести патологии.

Также количественный анализ нужно сдавать тем людям, которые уже проходят лечение. При помощи него можно определить эффективность терапевтических мероприятий, и по необходимости внести коррективы.

Единица измерения вируса – МЕ/мл. Иногда используется ДНК/мл (количество копий). Усредненное значение – 1 МЕ/мл = 5 копий/мл. Если результат анализа меньше 75 МЕ/мл, то ВРВ у пациента отсутствует.

Расшифровка количественного исследования следующая:

До 2 * 105 копий/мл. Означает, что вирус ведет себя не очень активно. В таких случаях вылечить ВРВ относительно нетяжело.
От 2 * 105 до 2 * 106 копий/мл. Означает, что активность вируса средняя. Инфекционный агент достаточно активен, и вероятность хронизации воспалительного процесса достаточно высокая.
От 2 * 106 до 2 * 107. Виремия большая. Активность вируса очень высокая, воспалительный процесс протекает реактивно.

Дополнительные исследования при подозрении на гепатит Б

Помимо ПЦР, в обязательном порядке пациенту нужно сдать ИФА (иммуноферментный анализ). С его помощью можно обнаружить антитела к ВРВ. Если антитела есть, значит, с высокой долей вероятности вирусное заболевание у пациента присутствует. Рассмотрим основные антитела, единица их измерения – индекс.

Один из самых главных – HbsAb. Под этой аббревиатурой скрываются антитела к поверхностному белку вируса. При контакте иммунной системы с протеином ВРВ происходит выработка специфических антител, которые прикрепляются к вирусу и мешают ему проникнуть в клетки печени.

Еще есть анти-HBc (total) (HBcAb). Они представляют собой антитела к ядерному белку вируса гепатита Б. Но тут не все так просто. Наличие данных антител может свидетельствовать о том, что гепатит был в прошлом. То есть наличие этого маркера не говорит о том, что воспалительный процесс имеется именно сейчас.

Также могут обнаруживаться IgM анти-HBc (HBcAb IgM). Они формируются на начальных этапах развития недуга.

Если иммуноферментный анализ выявил, что у человека имеются IgM анти-НВс (НВсАb IgM) и анти-НВе (HBeAb), то это говорит о том, что воспалительный процесс протекает остро и заразность крови больного очень высокая. В норме данные антитела должны отсутствовать.

Чтобы оценить общую клиническую картину, помимо ПЦР и ИФА, пациенту могут быть назначены:

Общий анализ крови.
Биохимический анализ крови. Исследуется уровень печеночных ферментов (АСТ, АЛТ, щелочная фосфатаза, прямой и непрямой билирубин, ГГТ). При гепатите Б уровень ПФ повышается.
УЗИ печени. Воспалительный процесс приводит к тому, что орган становится отечным, несколько изменяется его структура, возможно наличие участков фиброза.
Биопсия печени. Предусматривает забор печеночных клеток и их дальнейшее гистологическое исследование. Обязательно используется в составе дифференциальной диагностики.

По необходимости может быть рекомендована сдача ПЦР-исследование на РНК вируса гепатита C, так как случаи одновременного инфицирования гепатитом Б и гепатитом Ц весьма нередки. Причем оба заболевания передаются парентерально.

Что делать при наличии вируса в организме?

Если качественный тест был положительным, и пациенту был поставлен диагноз «вирусный гепатит B», ему нужно пройти комплексное лечение. При составлении схемы терапевтических мероприятий учитываются результаты теста на антитела и результаты количественного ПЦР-исследования.

Уничтожить вирус и купировать воспалительный процесс помогают специализированные противовирусные медикаменты. Препаратами выбора являются . Чтобы укрепить сопротивляемость организма инфекционным агентам, назначаются интерфероны, в числе которых Интераль-П, Интрон А, Пегасис, Пегинтрон.

Кроме того:

Назначаются гепатопротекторы. Они помогают стабилизировать липидный и белковый обмен, снизить активность печеночных трансаминаз, купировать воспалительный процесс в паренхиме печени. Также под воздействием гепатопротекторов происходит нормализация детоксикационной функции печени, увеличивается синтез желчи и стабилизируется ее пассаж. При гепатите Б препаратами выбора являются Урдокса, Урсофальк, Лив 52, Карсил Форте, Эссенциале Форте Н, Резалют Про.
Корректируется рацион. Больному нужно отказаться от продуктов, перегружающих печень. Таковыми являются сладости, жирные блюда, полуфабрикаты, острые овощи, кислые фрукты, свежая выпечка.
Показан отказ от алкогольных напитков, так как они усугубляют течение воспалительного процесса и плохо сочетаются с противовирусными препаратами.

ВРВ вылечить полностью возможно. Хронизация воспалительного процесса происходит лишь у 10-20% пациентов.

Прогноз и профилактика заболевания

Лучшая профилактика гепатита Б – своевременное вакцинирование. Оно делается сразу после рождения, а затем по достижению совершеннолетнего возраста. Сколько длится послепрививочный иммунитет, сказать сложно.

Первоначально считалось, что человек остается устойчивым к воздействию ВРВ в течение 5-7 лет после прививки. Но исследования, проведенные еще в 80-х годах XX века, опровергли это. Медики выяснили, что иммунитет может сохраняться и до 25 лет. Но медработникам и людям, чья работа предусматривает контакт с кровью и другими биологическими жидкостями, все равно рекомендуется вакцинироваться каждые 5 лет.

Прогноз при вирусном гепатите Б благоприятный. Хронизация воспалительного процесса происходит достаточно редко, особенно если человек обратился за помощью своевременно. Если же воспалительный процесс запущенный, то вероятность перехода патологии в хроническую форму достаточно высокая.

Несвоевременное лечение может привести к различным последствиям. Так, хронический ВРВ часто приводит к развитию фиброза, который со временем перестает в цирроз.

Также на фоне воспалительного процесса могут развиться рак печени, дискинезия желчевыводящих путей, жировой гепатоз, острый холецистит, холангит. Есть еще одна особенность. При ВРВ пациент может заразиться гепатитом D. Репликация последнего возможна только при наличии HBV.

Источник