Гепатит с количество качество что это такое

ПЦР анализ

Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

ПЦР гепатита С

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.

Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста. количественный ПЦР

Источник

Активность гепатита С – это степень интенсивности воспаления печени, вызванного вирусом. Если она незначительная, болезнь прогрессирует медленно, а если высокая – быстро. Интенсивность инфекционного процесса влияет на успешность медикаментозного лечения, выбор антивирусных препаратов. Чем выше вероятность осложнений, тем чаще прибегают к многокомпонентной терапии безинтерфероновыми лекарствами.

Классификация по степени активности

С помощью лабораторных анализов и аппаратных обследований определяют активность воспаления печени. Чем она выше, тем больше риск фибротических и цирротических изменений в печеночной ткани (паренхиме). В зависимости от стадии гепатит С осложняется фиброзом, жировым гепатозом, циррозом, гепатоцеллюлярной карциномой. От состояния органов гепатобилиарной системы – печени, желчных путей и желчного – зависит прогноз противовирусной терапии (ПВТ).

Минимальная

Хронический гепатит с минимальной активностью воспаления имеет наиболее благоприятный прогноз. Вирус HCV проникает в клетки печени (гепатоциты), вызывая минимальные изменения в их структуре. В связи с сохранением работоспособности гепатобилиарной системы протекает в бессимптомной форме. В редких случаях возникают жалобы на:

снижение аппетита;

эмоциональную нестабильность;

быструю утомляемость.

Минимальная степень активности объясняется генетической недостаточностью иммунной системы. Из-за угнетения клеток-защитников (Т-киллеров, Т-лимфоцитов) организм не подавляет размножение HCV. Поэтому не возникают естественные реакции, при которых выделяются медиаторы воспаления.

Низкая

Если в крови обнаруживается малый процент РНК вируса, это свидетельствует о низкой активности вирусного гепатита. Из-за слабой инфекционной нагрузки симптоматика почти отсутствует, изменения в печени происходят медленно. Заболевание проявляется диспепсическим синдромом, для которого характерны:

тяжесть в области желудка;

чувство переполнения;

раннее насыщение;

ухудшение аппетита;

тяжесть после еды.

Если гепатит сочетается с другими заболеваниями ЖКТ, больные жалуются на расстройства стула, горечь во рту, налет на языке.

Умеренная

При активной репликации вируса гепатита С отмечается умеренное воспаление гепатоцитов. Эта форма гепатита диагностируется у половины заболевших. Вследствие нарушения печеночных функций клиническая картина быстро пополняется новыми симптомами:

желтушность кожи;

головные боли;

боли в суставах;

обесцвечивание кала;

потемнение мочи.

В результате нарушения работы гепатобилиарной системы и застоя желчи возникают колющие боли в боку справа. В анализах крови гепатит умеренной активности проявляется увеличением концентрации печеночного фермента АЛТ.

Высокая

Гепатит с высокой степенью активности имеет наименее благоприятный прогноз. Такие пациенты нуждаются в срочном проведении ПВТ. Миллионные копии HCV внедряются в клетки печени, вызывая воспаление. Чем меньше в органе остается функциональной ткани, тем ярче клиническая картина:

боль в эпигастрии;

непереносимость жирной пищи;

снижение массы тела;

отек конечностей;

неустойчивый стул;

телеангиоэктазии (сосудистые звездочки на коже).

Вирусное заболевание с высокой активностью воспаления нередко осложняется циррозом, который носит необратимый характер.

Чем интенсивнее происходит репликация HCV, тем выше вирусная нагрузка. При быстром прогрессировании гепатита гепатоциты замещаются рубцовой тканью, что приводит к фиброзу.

Хронический вирусный гепатит С с холестазом

При гепатите с высокой активностью инфекционного процесса страдает не только печень, но и желчные протоки, пузырь. Из-за изменений в структуре органов нарушается отток желчи, что становится причиной холестатического синдрома. Он наблюдается у многих пациентов с длительно протекающим заболеванием – более 8-12 месяцев.

Холестаз – замедление оттока желчи, связанное с повреждением гепатоцитов или непроходимостью желчных путей. Если проблема вызвана разрушением функциональной ткани печени, болезнь протекает в безжелтушной, а если сужением желчных протоков – в желтушной форме.

Признаки хронического гепатита с холестазом:

увеличение печени;

обесцвечивание кала;

расстройство пищеварения;

боль в подложечной области;

темная пенистая моча;

раздражительность;

нарушение сна.

При высокой активности гепатита чаще встречается внепеченочная форма холестаза. Застой желчи ведет к всасыванию в кровь желчных пигментов, из-за чего слизистые оболочки, глазные яблоки и кожа окрашиваются в желтый цвет. Вследствие интоксикации возникают аллергические реакции – высыпания, зуд.

Из-за ухудшения желчеотведения увеличивается нагрузка на гепатоциты, что только ускоряет их массовую гибель. Несвоевременное устранение холестаза опасно фиброзом и циррозом печени.

Как выявляют активность

Чтобы уточнить стадию воспаления печени, определяют индекс гистологической активности (ИГА) по Knodell. Он представляет собой сумму нескольких компонентов:

портальное воспаление и отмирание печеночных долей – 0-4 балла;
выраженность мостовидного/перипортального некроза долей печени – 0 до 10 баллов;
степень фибротических изменений в печени – 0-4 балла.

Если ИГА составляет 0 баллов, воспаление отсутствует. При 1-3 баллах активность гепатита минимальная, при 4-8 – низкая, при 9-12 – умеренная, а при 13-18 – высокая.

Для определения активности инфекционного воспаления делают серологический и молекулярный анализ. Это индикация в плазме крови специфических иммуноглобулинов (антител) к вирусу и определение самого возбудителя.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В ходе лабораторного анализа определяют антитела к HCV (anti-HCV) двух классов – IgM, IgG. Их наличие свидетельствует о контакте организма с возбудителем гепатита, но не доказывает наличие вируса в данный момент.
Качественный и количественный ПЦР-анализ. При молекулярно-биологическом исследовании определяют генотип возбудителя, количество его копий. По концентрации вируса уточняют степень вирусной нагрузки, активность гепатита.

Из неинвазивных методов дополнительно назначаются печеночные пробы. При высокой активности воспаления из поврежденных гепатоцитов высвобождаются ферменты – АлАт, АсАт. Чем выше их концентрация в крови, тем интенсивнее воспаление паренхимы.

Результаты биохимии крови при гепатите разной степени активности

Активность инфекционного процесса	Во сколько раз увеличена концентрация АлАт и АсАт
минимальная	1.5-2
низкая	2-5
умеренная	5-10
высокая	свыше 10

Прижизненная биопсия (забор кусочка ткани и рассматривание его под микроскопом) – самый достоверный метод оценки активности вирусной болезни. Он отличается высокой информативностью и точностью, так как по изменениям в печеночной паренхиме удается определить степень ее рубцевания.

Лечение

Для уничтожения вируса гепатита С (ВГС) прибегают к противовирусной терапии. В настоящее время все чаще используются безинтерфероновые схемы. Их основу составляют препараты прямого антивирусного действия (ПППД), которые блокируют (ингибируют) синтез белков возбудителя трех типов:

NS5A (асвиры) – Омбитасвир, Элбасвир, Ледипасвир, Велпатасвир, Даклатасвир;
NS5B (виры) – Беклабувир, Софосбувир, Дасабувир;
NS3/NS4 (превиры) – Боцепревир, Нарлапревир, Симепревир, Телапревир, Паритапревир.

Вне зависимости от активности вирусного заболевания терапия только одним препаратом ППД не проводится. Для достижения устойчивого вирусологического ответа используют комбинации лекарств разных групп.

В зависимости от схемы ПВТ лечение занимает от 8 до 24 недель. Для определения эффективности лекарств периодически выполняют ПЦР-диагностику. На уменьшение вирусной нагрузки указывает сокращение числа вирионов в крови.

Для купирования и профилактики холестаза используются препараты, поддерживающие печень

ферменты (Креон, Панкреатин) – стимулируют пищеварение, предотвращая запоры и интоксикацию;
желчегонные средства (Одестон, Урбихол) – улучшают желчеотведение, стимулируют функции гепатоцитов;
гепатопротекторы (Гепафор, Эссенциале) – ускоряют регенерацию печеночной ткани, уменьшают восприимчивость гепатоцитов к токсинам.

Сочетание вирусной болезни с другими гепатитами (А, Б, Е) или ВИЧ-инфекцией ухудшает прогноз лечения. У таких пациентов чаще обнаруживается высокая активность инфекционного процесса. Но в случае своевременного прохождения ПВТ многим из них удается достичь выздоровления.

Источник: natco24.com

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Виды анализа ПЦР

Рекомендуемые товары

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
Проводятся скрининговые профилактические исследования.
Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
У пациента диагностирован цирроз.
Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Расшифровка ПЦР

Качественный анализ. Расшифровка

*Обнаружено*	Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
*Не обнаружено*	Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

*Не обнаружено*	Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
**До 1,810^2 МЕ/мл***	Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
**До 810^5 МЕ/мл***	Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
**Больше 810^5 МЕ/мл***	Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
**Больше 2,410^7 МЕ/мл***	Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Генотипирование. Расшифровка

*Обнаружена РНК определенного генотипа*	В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
*Обнаружена РНК вируса гепатита С*	В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
*Не обнаружено*	Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

Отрицательный анализ ПЦР и антитела

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
Загрязнение образца крови.
Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Преимущества анализа ПЦР

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Источник