Гепатит с рнк качественный инвитро
Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».
Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)
Определение РНК вируса гепатита С (оценка вирусной нагрузки) в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Исследование выполняется на оборудовании компании Hoffmann-La Roche (Швейцария) по стандартизованной технологии с автоматизированной пробоподготовкой.
Аналитические показатели
Определяемый фрагмент – специфический участок РНК вируса гепатита С. Клиническая специфичность теста: 100%, при доверительном интервале 99,6-100%. Линейный диапазон теста 15 – 100000000 МЕ/мл. Анализируются генотипы 1- 6 (1, 2, 3, 4, 5, 6). Чувствительность теста составляет 15 МЕ/мл.
Количественная характеристика содержания РНК гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х10^5 МЕ/мл, то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х10^5 МЕ/мл наряду с определением генотипа вируса является независимым и наиболее информативным параметром прогнозирования эффективности лечения. Снижение концентрации РНК гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.
Специальной подготовки к исследованию не требуется.
С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.
- Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в крови.
- Определение тактики лечения пациентов.
- Точная оценка эффективности лечения.
Внимание: тест не предназначен для скрининга на гепатит С крови и ее продуктов или для подтверждающей диагностики HCV-инфекции.
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Единицы измерения: количество выявленной РНК вируса гепатита C, выраженное в МЕ/мл.
Альтернативные варианты: для представления числа МЕ/мл могут быть использованы разные математические символы, например:
69 000 000 = 6,9*107 = 6,9*10^7=6,9E7=7,8lg
690 000 000 = 6.9*108 =6.9*10^8 = 6.9E8=8.8lg.
Интерпретация результата:
- «не обнаружено»: РНК вируса гепатита С не выявлена или значение ниже предела чувствительности метода (15 МЕ/мл). Результат интерпретируют как «РНК вируса гепатита С не выявлена;
- от 15 до 100000000 МЕ/мл: «РНК вируса гепатита С выявлена», полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен;
- > 100000000 МЕ/мл: результат интерпретируется как: результат интерпретируется как: «РНК вируса гепатита С выявлена в указанной концентрации, выходящей за пределы линейного диапазона, тест ставился в разведении 1:Х».
Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.
Источник
Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».
Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)
Определение РНК вируса гепатита С (оценка вирусной нагрузки) в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Исследование выполняется на оборудовании компании Hoffmann-La Roche (Швейцария) по стандартизованной технологии с автоматизированной пробоподготовкой.
Аналитические показатели
Определяемый фрагмент – специфический участок РНК вируса гепатита С. Клиническая специфичность теста: 100%, при доверительном интервале 99,6-100%. Линейный диапазон теста 15 – 100000000 МЕ/мл. Анализируются генотипы 1- 6 (1, 2, 3, 4, 5, 6). Чувствительность теста — 15 МЕ/мл.
Количественная характеристика содержания РНК гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х10^5 МЕ/мл, то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х10^5 МЕ/мл наряду с определением генотипа вируса является независимым и наиболее информативным параметром прогнозирования эффективности лечения. Снижение концентрации РНК гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.
Специальной подготовки к исследованию не требуется.
С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.
- Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в крови.
- Определение тактики лечения пациентов.
- Точная оценка эффективности лечения.
Внимание: тест не предназначен для скрининга на гепатит С крови и ее продуктов или для подтверждающей диагностики HCV-инфекции.
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Единицы измерения: количество выявленной РНК вируса гепатита C, выраженное в МЕ/мл.
Альтернативные варианты: для представления числа МЕ/мл могут быть использованы разные математические символы, например:
69 000 000 = 6,9*107 = 6,9*10^7=6,9E7=7,8lg
690 000 000 = 6.9*108 =6.9*10^8 = 6.9E8=8.8lg
Интерпретация результата:
- «не обнаружено»: РНК вируса гепатита С не выявлена или значение ниже предела чувствительности метода (15 МЕ/мл). Результат интерпретируют как «РНК вируса гепатита С не выявлена»;
- от 15 до 100000000 МЕ/мл: «РНК вируса гепатита С выявлена», полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен;
- > 100000000 МЕ/мл: результат интерпретируется как: «РНК вируса гепатита С выявлена в указанной концентрации, выходящей за пределы линейного диапазона, тест ставился в разведении 1:Х».
Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.
Источник
Содержание
- Виды ПЦР
- Показания для анализа
- Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
- Расшифровка результатов ПЦР-исследования
- Преимущества ПЦР-анализа
- Недостатки ПЦР
- Цена ПЦР-анализа на гепатит С
ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.
Виды ПЦР
ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.
Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.
При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.
Рекомендуемые товары
Показания для анализа
Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:
- У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
- Проводятся скрининговые профилактические исследования.
- Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
- Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
- Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
- У пациента диагностирован цирроз.
- Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.
Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.
Пациент должен следовать следующим правилам:
- Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
- Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
- Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
- Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).
Расшифровка результатов ПЦР-исследования
Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.
Качественный анализ. Расшифровка
| Обнаружено | Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса. |
| Не обнаружено | Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности. |
Количественный анализ. Расшифровка
| Не обнаружено | Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении. |
| Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. |
| Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови. |
Генотипирование. Расшифровка
| Обнаружена РНК определенного генотипа | В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3. |
| Обнаружена РНК вируса гепатита С | В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования. |
| Не обнаружено | Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса. |
Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.
В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:
- Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
- Загрязнение образца крови.
- Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
- Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).
Преимущества ПЦР-анализа
Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.
Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).
Недостатки ПЦР
Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:
- В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
- Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
- Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.
Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.
Цена ПЦР-анализа на гепатит С
В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.
Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.
В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.
Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.
Источник
