Гепатит с структурный белок core
[07-010]
Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С
550 руб.
Определение в крови иммуноглобулинов IgG к белкам вируса гепатита С, которое используется для диагностики этого заболевания.
Синонимы русские
Антитела к белкам гепатита С;
Антитела к ВГС.
Синонимы английские
Antibodies to structural and non-structural proteins of HCV;
Antibodies to HCV.
Метод исследования
Иммуноферментный анализ (ИФА).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования;
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Гепатит С – вирусное заболевание печени, отличительной чертой которого является бессимптомное течение и высокая частота прогрессии в хронический гепатит, цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. Основной путь передачи гепатита С – через кровь и ее компоненты. Группы риска по заражению ВГС:
- Медицинские работники;
- Люди, использующие инъекционные наркотики;
- Пациенты с ВИЧ;
- Люди, которым были сделаны татуировки с помощью нестерильных инструментов;
- Пациенты, получившие переливание крови или ее компонентов до 1992 г.;
- Пациенты, получившие трансфузию факторов свертывания крови до 1987 г.;
- Пациенты, получающие лечение гемодиализом в течение длительного времени;
- Дети, рождённые от матерей с ВГС.
Следует отметить, что по крайней мере в 20 % случаев источник заражения установить не удается. В России наблюдается рост заболеваемости гепатитом С: в период с 1999 по 2011 гг. заболеваемость хроническим ВГС выросла в 3 раза. Как правило, пациенты с ВГС не догадываются о своем заболевании.
Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-вирус, принадлежащий семейству Flaviviridae. При транскрипции его генома образуется единый белок длиной около 3000 аминокислот, который затем разрезается с помощью пептидаз клетки-хозяина и вирусных пептидаз с образованием структурных и неструктурных белков:
- Структурные белки (коровый белок, Е1 и Е2, от англ. envelope glycoproteins – гликопротеины оболочки) необходимы для формирования вирусного капсида;
- Неструктурные белки (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B, от англ. non-structural – неструктурные) выполняют различные регуляторные функции.
В ответ на заражение вирусом гепатита С в организме человека начинают вырабатываться антитела – иммуноглобулины M и G, которые можно исследовать для диагностики гепатита. Следует отметить, что при гепатите С синтез иммуноглобулинов М может наблюдаться на разных стадиях заболевания, как при остром, так и при хроническом гепатите, и поэтому не имеет никакого диагностического значения. Это важное отличие диагностики гепатита С от гепатита В (выявление иммуноглобулинов М при гепатите В наблюдается только в острую стадию). Таким образом, все серологические тесты для диагностики гепатита С основаны на выявлении иммуноглобулинов G к белкам этого вируса.
Структурные и неструктурные белки иммуногенны в разной степени. Показано, что наиболее выраженными иммуногенными свойствами обладают следующие белки (в скобках указан процент пациентов с хроническим гепатитом С, у которых в крови обнаруживаются антитела к указанному белку):
- Коровый белок (97 %);
- NS4B (86 %);
- NS3 (68 %);
- NS5A (53 %).
Менее иммуногенны белки E2 (31 %), NS4A(28 %) и E1 (22 %). NS2 и NS5B имеют очень слабые иммуногенные свойства, и антитела к ним у пациентов с ВГС выявляются редко.
Антитела к ВПС могут быть определены в крови приблизительно через 8 недель после первичного заражения. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться у людей с иммунодефицитом (например, ВИЧ-инфицированных), почечной недостаточностью и эссенциальной смешанной криоглобулинемией. Ложноположительные результаты также встречаются.
Вирусы гепатита С неоднородны по генетическому составу. На этом основании выделяют 6 генотипов ВПГ, геномы которых различаются на 30-35 %, и множество подтипов, различающихся на 20-25 %. В восточной Европе и США чаще встречаются генотипы 1a и 1b, тогда как для других стран характерны другие генотипы (например, Египет – генотип 4, Южная Африка – генотип 5). Показано, что иммунный ответ пациентов, инфицированных разными генотипами ВГС, различается. Это особенно справедливо в отношении антител к белкам E1, E2, NS3, NS4A и NS5A.
Качественный и количественный состав антител к ВГС у пациента остается достаточно постоянным в течение заболевания, в том числе и после проведенного лечения.
Антитела к гепатиту С – чувствительный, но недостаточно специфичный метод диагностики этого заболевания. Поэтому серологические тесты – это скрининговые тесты диагностики гепатита. При получении положительного результата исследования антител на гепатит С обязательно проводят подтверждающее исследование – анализ на РНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР). Кроме того, при подтверждении диагноза «гепатит С» может понадобиться генотипирование ВГС и гистологическое исследование печени или неинвазивные методы определения состояния печени (такие как ФиброМакс).
Для чего используется исследование?
- Для диагностики гепатита С.
Когда назначается исследование?
- При профилактическом обследовании, особенно если пациент принадлежит к группе риска по гепатиту С;
- в некоторых случаях при устройстве на работу.
Что означают результаты?
Референсные значения
Выдается по компонентам:
IgG к антигену core
IgG к антигену NS3
IgG к антигену NS4
IgG к антигену NS5
Результат: орицательный.
Положительный результат:
- гепатит С;
- ложноположительный результат (чаще у пациентов, не относящихся к группам риска, например доноров крови).
Отрицательный результат:
- норма;
- ложноотрицательный результат (сопутствующая ВИЧ-инфекция, почечная недостаточность, эссенциальная смешанная криоглобулинемия).
Что может влиять на результат?
- Время, прошедшее с момента заражения;
- Состояние иммунной системы;
- Сопутствующие заболевания почек;
- Генотип вируса гепатита С.
Важные замечания
- Это скрининговый тест. При получении положительного результата необходим дополнительный, подтверждающий тест (определение РНК вируса с помощью ПЦР);
- результаты анализа следует интерпретировать с учетом дополнительных клинических, лабораторных и инструментальных данных.
Также рекомендуется
[09-012] HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
[09-011] HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
[09-010] HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
[12-016] Гистологическое исследование гепатобиоптата (биоптата печени) с использованием стандартных методик
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, врач общей практики.
Литература
- Kamili S, Drobeniuc J, Araujo AC, Hayden TM. Laboratory diagnostics for hepatitis C virus infection. Clin Infect Dis. 2012 Jul;55 Suppl 1:S43-8.
- Virol J. 2009 Jun 23;6:84. doi: 10.1186/1743-422X-6-84. Sillanpää M, Melén K, Porkka P, Fagerlund R, Nevalainen K, Lappalainen M, Julkunen. Hepatitis C virus core, NS3, NS4B and NS5A are the major immunogenic proteins in humoral immunity in chronic HCV infection.Virol J. 2009 Jun 23;6:84.
- Стела Бивол, Аня Саранг. Гепатит С в России: эпидемия бездействия. Фонд содействия защите здоровья и социальной справедливости им. Андрея Рылькова, 2013.
Источник
Белки и антигены вируса гепатита С. Диагностика ВГССегодня известно минимум 10 структурных и неструктурных белков, кодируемых геномом HCV. К структурным белкам относят core, envelop 1 и envelop 2. Белок core является белком нуклеокапсида, тогда как envelop 1 и envelop 2 — гликопротеины внешней оболочки вируса. В структурной зоне кодируется также белок р7, функция которого не ясна, однако аналогия с другими представителями семейства Flaviviridae позволяет предположить, что его функция связана с высвобождением вириона из инфицированной клетки. Неструктурная область генома HCV кодирует 6 белков — NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. Белок NS2 является вирусной металлозависимой протеиназой. Белок NS4A действует как эффектор или кофактор для NSЗ-протеолитической активности в NS4A/NS4B, NS4B/NS5A, NS5A/NS5B сайтах нарезания полипротеина вируса. В настоящее время фрагменты структурных и неструктурных белков, полученных генноинженерным путем (рекомбинантные белки) или с помощью химического синтеза, используют в качестве антигенов при конструировании иммуноферментных тест-систем. Первое поколение иммуноферментных тест-систем появилось на рынке в 1989 году и было основано на прямом ИФА. В качестве иммуносорбента были использованы фрагменты двух белков, NS3 и NS4, обозначаемых как 5-1-1 и С100-3. Одновременно были разработаны и подтверждающие тесты на основе иммуноблота с рекомбинантными белками (RIBA). Чувствительность этих тест-систем первого поколения составляла только 64% для ИФА и 55% для иммуноблота. Тест-системы второго поколения появились на рынке в 1991 году. В качестве антигенов, сорбированных на твердой фазе, в этих тест-системах использовали капсидные белки (фрагмент с22-3) и антигены неструктурных регионов NS3 (фрагменты с200 и сЗЗс) и NS4, что позволило повысить чувствительность и специфичность исследований. Поскольку гуморальный иммунный ответ на капсидные антигены (структурные белки) нагинается быстрее, гем на неструктурные белки, период от инфицирования до выявляемой сероконверсии удалось уменьшить до двух месяцев.
Подтверждающие тест-системы на основе иммуноблота позволяли идентифицировать участвующие в реакции антигены. Результаты, полученные при помощи этих тест-систем, интерпретировали как положительные лишь при реакции антител, находящихся в исследуемом субстрате, по крайней мере, с двумя антигенами, тогда как при наличии реакции лишь с одним из антигенов результат считали неопределенным. Было установлено, что специфичность второго поколения тест-систем зависела от источника антигенов. В 1993 году на рынке появилось третье поколение тест-систем. В дополнение к вышеупомянутым антигенам в этих тест-системах используются также антигены, аминокислотная последовательность которых соответствует иммунодоминантным участкам NS5 белков. В тест-системах первого, второго и третьего поколений в качестве антигенов использовались или рекомбинантные, или синтетические пептиды. В настоящее время можно выделить также тест-системы четвертого поколения, в которых в качестве иммуносорбента используют сочетания рекомбинантных и синтетических пептидов. Опыт применения тест-систем различных поколений в мире очень большой. Было установлено, что если с помощью тест-систем первого или второго поколения у больных с острым вирусным гепатитом С антитела выявляли на 10-16, а в ряде случаев и 25-30 неделе от начала заболевания, то диагностикумы третьего поколения позволяли сократить этот срок до 2-3 недель. Согласно обобщенным данным чувствительность тест-систем первого, второго и третьего поколений составляет соответственно 70-80%, 92-95% и 97%. В то же время, по данным С. Colin, 2001, чувствительность тест-систем третьего поколения составила 98,9% у пациентов с хроническими заболеваниями печени и 97,2% на специальных контрольных панелях сывороток. Достижение высокой чувствительности иммуноферментных тест-систем 3 и 4 поколения сопряжено с некоторыми проблемами в обеспечении специфичности исследований, что в ряде случаев может приводить к появлению ложноположительных результатов. В литературе имеются данные о возможных погрешностях в специфичности ELISA 3 тест-систем. Они являются общими для всех ELISA тест-систем, включая тест-системы для диагностики СПИДа. Ложнопозитивные результаты могут быть следствием повышенного содержания в образцах гамма-глобулинов (сыворотки пациентов африканской расы, миеломная болезнь, ревматоидные факторы), заболеваний печени (цирроз, рак), аутоиммунных заболеваний (коллагенозы, аутоиммунные гепатиты), других вирусных инфекций (ВИЧ, гепатит В) и длительного хранения сывороток в меняющихся температурных условиях. Проведение какой-либо иммунизации также может сопровождаться повышением частоты ложнопозитивных реакций. Рекомендуемые в настоящее время меры по устранению этой проблемы следующие: а) повторная постановка образца в этой же ИФТС; б) повторная детекция anti-HCV в другой ИФТС; в) использование подтверждающих тестов на основе ИФА и иммуноблота. Однако использование предлагаемых способов подтверждения результатов зачастую приводят к расхождениям в их итоговой трактовке, что показано исследованиями российских и зарубежных исследователей. В настоящее время производители ИФТС для детекции anti-HCV достигают высокой чувствительности или за счет более полного выявления антител к NS3 или антител к антигенам core. Сравнительные исследования, выполненные на различных группах риска и специальных контрольных панелях показали, что тест-системы, лучше выявлявшие антитела к NS3, оказались несколько более чувствительными, чем тест-системы, лучше выявлявшие антитела к антигенам core. Их чувствительность составляла, соответственно 99,9% и 98,6%. — Также рекомендуем «Современная диагностика вирусного гепатита А. Антигены HAV» Оглавление темы «Диагностика вирусных гепатитов»:
|
Источник
В ответ на попадание в организм человека инородных частиц, таких, как вирусы, иммунная система вырабатывает иммуноглобулины — защитные антитела. Эти антитела выявляют специальным анализом методом ИФА, скрининговым исследованием, используемым для установления факта инфицирования человека вирусом гепатита С. Для гепатита С все антитела содержат аббревиатуру anti-HCV, что означает «против вируса гепатита С».
Антитела гепатита С бывают двух классов — G и M, что в анализах пишется, как IgG и IgM (Ig –immunoglobulin (иммуноглобулин) — это латинское название антител). Anti-HCV total (anti-НСV, анти-hcv) — суммарные антитела (классов IgG и IgM) к антигенам вируса гепатита C. Тест на определение этих маркеров проводится всем пациентам, когда хотят проверить, есть ли у них гепатит С. Anti-HCV присутствуют как при остром (они могут обнаруживаться уже с 4 — 6 недели после инфицирования), так и при хроническом гепатите. Anti-HCV total также встречаются у тех, кто переболел гепатитом С и выздоровел самостоятельно. У таких людей данный маркер может обнаруживаться в течение 4 — 8 и более лет после выздоровления.
Поэтому положительный анализ на anti-HCV не является достаточным для того, чтобы установить диагноз. На фоне хронической инфекции суммарные антитела выявляются постоянно, а после успешного лечения сохраняются длительное время (прежде всего за счет anti-HCV core IgG, о них написано ниже), при этом их титры постепенно снижаются.
Спектр anti-НСV (core, NS3, NS4, NS5) — это специфические антитела к отдельным структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С. Их определяют для суждения о вирусной нагрузке, активности инфекции, риске хронизации, разграничении острого и хронического гепатита, степени поражения печени. Обнаружение антител к каждому из антигенов имеет самостоятельное диагностическое значение. Anti-HCV состоят их структурных (core) и неструктурных (NS3, NS4, NS5) белков (протеинов).
Anti-HCV core IgG —антитела класса G к ядерным (core) белкам HCV. Anti-HCV IgG появляются с 11-12 недели после инфицирования, поэтому для диагностики возможных «свежих» случаев инфицирования используют Anti-HCV total, которые появляются раньше. Anti-HCV IgG достигают пика концентрации к 5 — 6 месяцу с момента инфицирования и при хроническом течении болезни выявляются в крови пожизненно. При перенесенном гепатите С титр антител класса IgG постепенно снижается и может достигнуть неопределяемых величин через несколько лет после выздоровления.
Неструктурные (NS3, NS4, NS5) белки.
NS3, NS4, NS5 относятся к неструктурным (NS — nonstructural) белкам. На самом деле, этих белков больше — NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, однако в большинстве клинико-диагностических лабораторий определяют антитела к белкам NS3, NS4 и NS5.
Anti-NS3 выявляются на самых ранних этапах сероконверсии. Высокие титры anti-NS3 характерны при остром гепатите С и могут являться самостоятельным диагностическим маркером острого процесса. При остром процессе высокая концентрация anti-NS3 обычно свидетельствует о значительной вирусной нагрузке, а длительное сохранение их в острой фазе связано с высоким риском хронизации инфекционного процесса.
Anti -NS4 и anti-NS5, как правило, появляются в более поздние сроки. При ХВГС определение anti-NS4 в высоких титрах может свидетельствовать о длительности инфекционного процесса и, по некоторым данным, имеет связь со степенью поражения печени. Выявление anti-NS5 в высоких титрах часто свидетельствует о присутствии вирусной РНК, а в острой стадии является предиктором хронизации инфекционного процесса. Снижение титров NS4 и NS5 в динамике может являться благоприятным признаком, указывающим на формирование клинико-биохимической ремиссии. Титры anti-NS5 могут отражать эффективность ПВТ, причем их повышенные значения характерны для лиц, не отвечающих на терапию. После выздоровления титры anti-NS4 и anti-NS5 снижаются с течением времени. Результаты одного из исследований показали, что почти у половины пациентов через 10 лет после успешного лечения интерферонами, anti-NS4 и anti-NS5 не определялись. В следующей таблице приведены наиболее вероятные варианты трактовки сочетания маркеров гепатита С.
Источник
Гепатит С — заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом. Вирус может передаваться через кровь, через нестерильные медицинские инструменты, при трансплантации органов и тканей, при половом контакте, от матери к ребенку во время беременности и родов. Он размножается в клетках печени и вызывает развитие острого или хронического гепатита. Вирус гепатита С имеет несколько генотипов, вследствие частых мутаций он устойчив к воздействию механизмов иммунной защиты человека.
Вирусный гепатит С чаще всего протекает бессимптомно. Только в 15% случаев острого заболевания наблюдают тошноту, признаки интоксикации, отсутствие аппетита, желтуха бывает редко. Меньшая часть пациентов переносит гепатит С как острое заболевание и полностью выздоравливает, у большей части инфицированных развивается хронический гепатит С. Длительно текущее хроническое заболевание может привести к циррозу или раку печени.
На старте заболевания начинают образовываться антитела к компонентам вируса, сначала иммуноглобулины М, позже иммуноглобулины G. Специфические антитела к вирусу гепатита С могут быть обнаружены в крови через 3–8 недель после попадания вируса в организм, однако в некоторых случаях они могут отсутствовать в течение нескольких месяцев. В этом случае инфицирование можно подтвердить исследованием крови на РНК вируса гепатита С. После перенесенной инфекции у выздоровевших пациентов специфические антитела сохраняются в течение многих лет с постепенно снижающейся концентрацией и могут обнаруживаться в низком количестве на протяжении всей жизни. Антитела к гепатиту С не защищают от повторного заражения при новой встрече с вирусом.
В группу риска по гепатиту С входят врачи и медсестры, люди, пользующиеся медицинскими и косметическими услугами, наркозависимые, пациенты, которым проводилось переливание крови или пересадка органов, дети, рожденные зараженными матерями-носителями вируса гепатита С.
Анализ на антитела к вирусу гепатита С (HCV), суммарные, позволяет выявить специфические иммуноглобулины, наличие которых говорит о возможной инфекции или ранее перенесенном заболевании. Тест является скрининговым, сдают его обязательно при госпитализации, перед плановыми операциями и во время беременности.
В каких случаях обычно назначают исследование
- при обследовании пациентов, готовящихся к плановой госпитализации или операции;
- при профосмотрах и диспансеризациях;
- при подозрении на контакт с инфицированной кровью или нестерильными медицинскими инструментами;
- при появлении симптомов поражения печени;
- при обследовании беременных.
Что именно определяют в процессе анализа
Выявляют наличие специфических суммарных антител к вирусу гепатита С методом ИХЛА — модификации иммуноферментного анализа.
Что означают результаты теста
Результат «Не обнаружено» — значит, что в сыворотке крови пациента нет специфических антител к гепатиту С. Это может быть, если пациент здоров и никогда не встречался с вирусом гепатита С. Отсутствие антител возможно в течение короткого периода в начале заболевания, когда вирус попал в организм, а иммунная система еще не выработала антитела к вирусу гепатита С (так называемый период «серологического окна»).
Результат «Обнаружено» — значит, что антитела к вирусу в крови выявлены. Положительный результат выдают всегда с результатами подтверждающего теста. В подтверждающем тесте определяют антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С.
Результат исследования (пример):
| Антитела к вирусу гепатита С, сумм | ОБНАРУЖЕНО |
| Антитела к гепатиту С, подтверждающий тест | |
| Core (антитела к структурным белкам вируса гепатита С) | 15.26 |
| NS3 (антитела к неструктурному белку NS3 вируса гепатита С) | 0.65 |
| NS4 (антитела к неструктурному белку NS4 вируса гепатита С) | 0.02 |
| NS5 (антитела к неструктурному белку NS5 вируса гепатита С) | 0/02 |
Антитела могут быть выявлены у пациентов в нескольких случаях:
- пациент болен в настоящее время острым или хроническим гепатитом С;
- пациент когда-то перенес гепатит С как острое заболевание и теперь здоров, антитела остались как иммунологическая память о контакте с вирусом;
- у пациента редкий случай неспецифической реакции сыворотки крови с используемой тест-системой.
Выявление антител к вирусу гепатита С не означает наличия заболевания и требует дополнительного обследования пациента. В случае положительного ответа необходима консультация лечащего врача или врача-инфекциониста и назначение дополнительных тестов. Может быть назначено ПЦР-исследование на HCV (выявление РНК вируса гепатита С в крови пациента), биохимические маркеры — АЛТ, АСТ, ГГТ, щелочная фосфатаза, билирубин, общий анализ крови с лейкоцитарной формулой, коагулограмма.
Сроки выполнения теста
Результат исследования «Не обнаружено» можно получить уже на следующий день после сдачи анализа. В случае необходимости выполнения подтверждающего теста результат может быть задержан на 1–2 дня.
Подготовка к анализу
Кровь можно сдавать не ранее чем через 3 часа после приема пищи в течение дня или утром натощак. Чистую воду можно пить в обычном режиме.
Источник
