Иммуноферментный анализ крови расшифровка при гепатите с
Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.
Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.
Что такое ИФА?
Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.
Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.
Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.
ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.
В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.
Показания к ИФА на гепатит С
Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:
- острых и хронических заболеваниях печени;
- желтухе неясного генеза;
- обследовании перед хирургическими вмешательствами;
- стандартном обследовании доноров крови;
- постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;
- прохождении гемодиализа;
- профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;
- незащищенном сомнительном половом контакте;
- рождении детей от инфицированных матерей.
В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.
Как проводится анализ?
За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.
Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).
Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:
- На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
- На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
- Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.
Виды ИФА
Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:
- По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;
- По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;
- 3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.
Прямой метод ИФА
При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.
- В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
- Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
- Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.
Непрямой метод
При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.
- В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
- В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
- В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
- Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.
Расшифровка результатов
Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.
При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Положительный
При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.
Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.
Отрицательный
Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.
Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.
Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.
Ложноположительный
ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:
- выполненной накануне вакцинации;
- при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;
- опухолевом процессе;
- инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).
Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.
ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?
Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».
Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.
Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.
Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.
Источник
РНК-содержащий вирус при инфицировании повреждает ткани печени и вызывает заболевание – гепатит С. Недуг протекает в острой и хронической форме. Для него характерно воспаление органа без явно выраженных признаков. Бессимптомное течение объясняется способностью патогена к образованию видов, которые приспосабливаются к организму хозяина. Они мутируют и, благодаря различным видам, ускользают от надзора иммунной системы.
Много лет вирус находится внутри организма. Ранняя диагностика не дает желаемого результата. Антитела появляются через четыре – восемь недель от начала инфицирования и титры антител низкие. Внедряясь в клетки печени, со временем разрушают их. Анализ на гепатит С нужен, чтобы выявить инфекцию сразу после инфицирования и начать лечение печени.
Кому нужно сдавать анализ на гепатит С?
Для сдачи анализа крови на гепатит С нужны предпосылки:
- половая связь с инфицированным лицом;
- цирроз органа;
- диагностика эффективности лечения другого инфекционного заболевания;
- плановое обследование работников медучреждений, садов, школ;
- обследование перед операцией;
- проведение вакцинации против вируса гепатита В.
Если у пациента ярко выражены признаки воспаления органа:
- желтизна кожи и белков;
- боль в боку с правой стороны;
- утомляемость;
- увеличение размеров органа;
- тошнота.
Чтобы диагностировать гепатит С, проводят анализы на прямое выявление вируса и на второстепенные признаки его присутствия: наличие антител к вирусу HCV.
Виды анализов на гепатит С
При попадании в человеческий организм патогена иммунная система начинает вырабатывать антитела. Это компоненты иммунной системы, направленные на уничтожение чужеродного белкового соединения. Их называют маркеры. Маркеры гепатита С – это суммарные антитела к вирусу HCV. Обозначают IgM и IgG. Каждый вид антител появляется в определенный период.
Вначале обнаруживаются антитела IgM (через 1-1,5 месяца). Это характеризует острую фазу поражения. По мере развития инфекции, количество антител возрастает. Больше всего появляется на 3-6 месяц развития болезни, а затем количество снижается.
Антитела IgG появляются через 1,5-2 месяца с момента поражения. Через полгода концентрация достигает максимального уровня. Это характеризует хроническое протекание болезни. Они остаются в кровотоке многие годы.
Определение суммарных антител при анализе позволяет определить природу заболевания на третьей неделе инфицирования и понять, в какой форме оно протекает. Исследование по отдельности не является информативным. Для правильной диагностики важно знать суммарное значение.
ИФА
Антитела к HCV определяются методом иммуноферментного анализа. Берется венозная кровь пациента, и определяются значения иммуноглобулинов IgM и IgG. Это ультрачувствительный тест. Он определяет даже один патоген в клетке крови.
ПЦР
Метод полимеразной цепной реакции применяется для выявления РНК патогена. Это основной способ установления диагноза гепатита С. С его помощью проводится качественное и колтчественное определение РНК вируса.
Уровень антител HCVcor IgG NS3-NS5 необходимо определить, чтобы подтвердить или опровергнуть поставленный диагноз при отрицательном значении на ПРЦ. Этот метод – самый точный. Он укажет присутствие инфекции на пятый день после заражения. Если ИФА не в состоянии это сделать, ПЦР поможет определить генотип вируса и начать лечение. Она определяет скорость развития заболевания.
Как в анализах пишется гепатит С?
Принято обозначать его HCV. Качественный и количественный анализ на гепатит С в расшифровке пишется как вирус гепатита «С»-HCV-РНК. Антитела к гепатиту С обозначают Anti-HCV.
Через сколько будет готова расшифровка анализа?
Анализ крови при гепатите С и расшифровка делается от одного до пяти дней. Срок исполнения зависит от загруженности лаборатории. При получении положительного результата, проводят дополнительное исследование. Его называют иммуноблоттинг.
Для подтверждения HCV применяют ПЦР, чтобы выявить РНК вируса. Присутствие в крови антител свидетельствует о хроническом протекании заболевания.
Ложноположительные анализы бывают у беременных женщин и у людей, болеющих инфекционными болезнями.
Результат обследования готов на следующий день, но пациент может получить его с расшифровкой по ряду причин через 5-7 дней. Сколько стоит анализ на гепатит С? Качественный – от 700 рублей. Количественный стоит дороже – от 1300 рублей.
Другие анализы при гепатите С
Кроме общего анализа крови, ПЦР и ИФА делают биохимический анализ, исследуется функциональные возможности печени, делаются тесты на присутствие других видов гепатита. Врач назначает исследование на вирус иммунодефицита, на аутоиммунные болезни. Оценивается стадия и активность процесса. Берется биопсия печеночных тканей. Исследуют щитовидную железу. Какие делать анализы, определяет врач. Возможна диагностика внутренних органов и печени с помощью УЗИ.
Клинический анализ крови
Общий развернутый клинический анализ позволяет оценить содержание гемоглобина в крови и количество:
- эритроцитов;
- лейкоцитов;
- тромбоцитов;
- лимфоцитов;
- СОЭ.
ОАК выявит отклонения нормативных показателей. При развитии болезни у больного понижается свертываемость крови и повышается кровоточивость. Показатель СОЭ будет повыше.
Биохимический анализ крови
Позволяет оценить работу не только печени, но и общего состояния других органов. Биохимический анализ крови определяет, как происходит метаболизм и выясняет потребность в микроэлементах. Биохимия определяет АЛТ, АСТ, ГГТП, билирубин, щелочную фосфатазу, общий белок, амилазу крови.
Все анализы сдаются на голодный желудок. Перед приемом продуктов питания должно пройти 7-8 часов. В последние двое суток из рациона исключают жареную и жирную пищу, не употребляют алкогольные напитки и не курят. Нельзя выполнять тяжелую физическую работу, заниматься спортом. Эти предосторожности исключают получение ложноположительного или ложноотрицательного результата исследования.
Что делать, если анализ на гепатит С оказался положительным?
Не отчаивайтесь, если данные обследования на вирус оказались положительными. В 20% случаев происходит самоизлечение. Антитела не означают, что вы болеете гепатитом С. Случается ошибка в лабораторных исследованиях. Вакцинация влияет на получение верного результата.
При беременности возможен ложноположительный результат. Опухоли, инфекционные заболевания смазывают картину результатов лабораторного исследования. Чтобы убедиться в правильности поставленного диагноза, назначается ПЦР для определения РНК вируса гепатита С. Результат будет точным и покажет, болеете вы или нет.
Даже, если результат после окончательного обследования положительный, ранняя диагностика поможет назначить правильное лечение. Современные препараты вылечивают хроническую форму болезни через 3-6 месяцев.
Какие анализы нужно сдавать после лечения?
Заболевание опасно тем, что оно возникает повторно. Раз в 6 месяцев проверяют антитела в кровотоке. Как только антитела перестанут определяться в 2-ух последних лабораторных исследований на ПЦР, болезнь побеждена.
Биохимический анализ крови покажет результат лечения и состояние внутренних органов. Из-за изменчивости патогена нет вакцины, предупреждающей заболевание вирусом гепатита С.
Помните, что болезнь заразна. С окружающими и близкими людьми будьте осторожны. Недуг передается через кровь. Поэтому нужно предупреждать врачей, стоматологов о своем заболевании. Попросите лечащего врача назначить прогрессивные препараты для подавления вируса гепатита С. Интерфероновые препараты менее эффективны. Они подавляют размножение инфекции, но не уничтожают. Возможно возвращение болезни через какой-то срок.
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Источник
Для диагностики вирусного гепатита в рамках медицинского протокола используется несколько лабораторных и инструментальных методик. Одной из самых достоверных является иммуноферментный анализ (ИФА). Метод помогает определить наличие антигена к тому или иному виду вируса. Для этого выполняется стандартная процедура забора крови из вены пациента. Результаты становятся известны уже через неделю после взятия анализа.
Что такое ИФА?
Термин расшифровывается как «иммуноферментный анализ». Он подразумевает определение в крови комплексов антиген-антитело для уточнения этиологии возбудителя. Если это вирус, определяются его виды и подвиды. Антигены — это частички на поверхности клеток возбудителей, связывающиеся с определенными участками антител. Последние являются иммунными молекулами, вырабатываемыми организмом для собственной защиты. Антигены и антитела неповторимы, поэтому определение их структуры с помощью иммуноферментного анализа свидетельствует о наличии конкретной патологии в организме больного. В качестве меток используются ферменты, которые и дали название методике.
Вернуться к оглавлению
Плюсы исследования
ИФА — это высокоточная методика, ее чувствительность достигает 90%. Она помогает проводить скрининг парентеральных гепатитов. Эти заболевания передаются путем инъекции, или через переливание крови. ИФА помогает выявить пациентов, у которых отсутствуют симптомы. Таковыми является большинство хронических больных. Они имеют риск развития цирроза. Его обнаружение на поздних стадиях — это плохой прогноз. Поэтому иммуноферментная методика позволяет своевременно определить заболевание и сэкономить деньги на лечение. ИФА верифицирует этиологию возбудителя и определяет прогноз недуга. Диагностические наборы для нее стоят недорого и длительно хранятся. За быстроту, удобство и точность данных ИФА называют экспресс-методом.
Вернуться к оглавлению
Когда нужен анализ?
Для определения вида вируса необходимо сдать ИФА.
ИФА необходим, когда требуется уточнить этиологию вирусного возбудителя для определения схемы лечения. У пациента идентифицируют наличие хронического гепатита B и C, или перенесенного заболевания вирусом подтипа A. Методику нужно применять у членов семьи больного, которые могут заразиться. В инфекционном стационаре анализ выполняется всем пациентам, у которых присутствуют такие симптомы:
- Желтуха. Желтушность кожных покровов не сопровождается болями в правом подреберье и изменением цвета стула и мочи.
- Повышение температуры тела. Она вырастает до субфебрильных цифр, иногда наступает лихорадка.
- Диспепсия. Присутствуют тошнота и рвота, которая не приносит облегчение.
- Немотивированная слабость.
- Мелкоточечные высыпания на теле. Это мелкие кровоизлияния вследствие печеночной недостаточности.
- Тяжесть в правом подреберье. Симптом возникает вследствие растяжения увеличенной печенью собственной капсулы, содержащей множество нервных окончаний.
Основным показанием к выполнению анализа является наличие определенных анамнестических данных. Если пациент ранее страдал инъекционной наркоманией, ему переливали кровь или пересаживали органы — это повод выполнить ИФА.
Вернуться к оглавлению
Подготовка к проведению
Чтобы результаты ИФА были достоверными, требуется предварительно подготовиться. За день до сдачи крови пациенту рекомендуется перестать употреблять жирную и жареную пищу, продукты с высокой концентрацией красителей, стабилизаторов, консервантов, усилителей вкуса и аромата. Нежелательно непосредственно перед выполнением метода заниматься тяжелым физическим трудом и спортивными упражнениями. В день сдачи крови необходимо воздержаться от завтрака. Забор материала натощак позволит получить точный результат. Необходимо исключить из употребления некоторые лекарственные средства. Но самостоятельно это делать не рекомендуется, поскольку есть вероятность вреда для здоровья. Нужна предварительная консультация лечащего доктора.
Вернуться к оглавлению
Методология проведения
Метод ИФА.
Метод ИФА состоит из двух этапов. На первом выполняется забор материала, на втором последний исследуется в лаборатории. Начальный этап проходит стандартно. Ему предшествует подготовка пациента к сдаче крови. В стерильном помещении проводится забор биоматериала, отправляемый в герметических контейнерах на лабораторное исследование. Дальнейшее определение комплексов антиген-антитело происходит с помощью ферментов и тест-систем на специализированном оборудовании. Результат становится известен в течение недели и отправляется пациенту на электронную почту.
Вернуться к оглавлению
Расшифровка показателей
Интерпретация данных подразделяется на качественную и количественную. При качественном определении результаты анализа считаются позитивными, если обнаружены суммарные антитела к определенному подтипу вируса. Выявление anti-НАV IgМ свидетельствует про острый, а anti-НАV IgG — хронический гепатит А. Позитивный маркер НВsAg — признак инфицирования вирусом подтипа В. Он наблюдается в острой и хронической фазах заболевания. Если же выявлен HBCAg, у человека присутствует хронический гепатит С. А anti-НDV сигнализирует про инфицирование подвидом D. Пациенты, у которых определен положительный маркер к вирусу, нуждаются в дальнейшем обследовании для более точной верификации диагноза.
Источник
