Иммуноферментный анализ на гепатит с расшифровка анализов

Сотни поставщиков везут лекарства от гепатита С из Индии в Россию, но только M-PHARMA поможет вам купить софосбувир и даклатасвир и при этом профессиональные консультанты будут отвечать на любые ваши вопросы на протяжении всей терапии.

ИФА гепатит С определяет эффективно, это один из методов диагностики заболевания, основанный на взаимодействии антигенов и антител. Иммунохимическая реакция путем ИФА (иммуноферментного анализа) позволяет выявить в организме анти-HCV антитела. Метод дает возможность дифференциальным путем диагностировать у человека гепатит С, определить стадию развития заболевания, спрогнозировать его течение. Выявление специфических серологических маркеров позволяет также подобрать эффективное противовирусное лечение патологии.

Особенности метода

Анализ на выявление в крови человека антител к вирусу гепатита типа C проводится путем присоединения к молекуле иммуноглобулина чужеродного микроорганизма (антигена). Присоединенный энзимный фермент играет роль своеобразной метки. Она позволяет проследить за иммунохимической реакцией, а также одним из ее компонентов.

В качестве компонентов иммуноферментного анализа могут выступать:

антитела;
антитела, помеченные специальным ферментом;
антигены;
субстраты ферментов;
индикаторные красители.

При попадании в организм человека вредоносных чужеродных микроорганизмов защитные силы начинают вырабатывать иммуноглобулины (антитела). Впоследствии они воздействуют на антигены и нейтрализуют их. Такое взаимодействие приводит к образованию антитела-антигена, имеющего свои показатели количества и качества. Именно они свидетельствуют о наличии либо отсутствии в организме HCV-инфекции. В случае если результат иммуноферментного анализа положительный, имеет место вирус гепатита типа С.

Современные технологии в медицине позволяют значительно сократить сроки выявления вируса гепатита, протекающего в острой форме. Благодаря диагностическим системам третьего поколения также представляется возможным повысить специфичность и чувствительность иммунохимической реакции.

Основным исследуемым материалом при проведении ИФА выступает венозная кровь (в том числе донорская). По показаниям могут производить забор спинномозговой жидкости или околоплодных вод.

Положительный результат метода ИФА на гепатит типа С не всегда свидетельствует о наличии вирусной инфекции в организме. В более чем 35 % случаев в крови вирусных антигенов не обнаруживается, что приводит к ложноположительному результату.

Метод позволяет следить за количественными и качественными изменениями, разграничением острой и хронической формы гепатита С. Однако для определения активности патологического процесса он малоэффективен. Для более точного подтверждения наличия HCV-инфекции следует применять также другие методы диагностики патологии.

Показания к проведению ИФА

Метод выявления видовой и количественной концентрации чужеродных микроорганизмов (антигенов) при помощи иммуноглобулинов и ферментов проводится в несколько этапов. На основании изменения цвета и количественного показателя фермента врач может диагностировать у человека гепатит типа C.

В большей степени заболеванию подвержены следующие категории людей:

Пациенты, перенесшие хирургические вмешательства, а также заболевания внутренних органов и систем.
ВИЧ-инфицированные (инфицированные вирусом иммунодефицита человека). Большой процент людей, входящих в эту группу, составляют наркозависимые люди.
Медицинские работники.
Сотрудники правоохранительных органов.
Беременные женщины.

Гепатиты вирусного происхождения нередко приводят к развитию онкологического заболевания (например, рака печени). Именно поэтому сдавать кровь на иммуноферментный анализ следует в первую очередь людям, входящим в основную группу риска, а также больным с острой либо хронической формой гепатита.

По показаниям врач может назначить проведение метода ИФА пациентам, у которых диагностируется:

ИППП (инфекции, передающиесяполовым путём);
заболевания вирусной природы происхождения (папилломавирус, герпетическая инфекция, гепатит и т. д.);
аллергический характер патологии;
иммунодефицитное состояние;
онкология.

Метод ИФА позволяет лечащему врачу оценить эффективность назначенной медикаментозной терапии, определить гормональный уровень пациента. Перед хирургическим вмешательством одним из необходимых исследований также выступает лабораторное изучение крови.

Преимущества и недостатки

ИФА гепатит С позволяет выявлять на ранней стадии, а также в бессимптомной и безжелтушной формах. Как и у любого метода диагностики, он имеет ряд преимуществ и недостатков.

Среди положительных особенностей ИФА специалисты выделяют:

Точность качественных и количественных показателей. Чувствительность метода превышает другие исследования на выявление гепатита в десятки раз.
Значительное сокращение сроков выявления вирусной инфекции благодаря современным диагностическим системам.
Невысокая цена по сравнению с другими исследованиями на выявление гепатита у человека.
Возможность диагностирования заболевания печени на ранней стадии при отсутствии выраженных симптомов.
Поэтапное проведение исследования с использованием автоматизированных процессов.

Несмотря на высокую точность ИФА, более чем в 35 % случаев при положительном результате вирус гепатита у пациента не выявляется. Нередко тест не подтверждает патологию, что свидетельствует о сомнительном или отрицательном результате.

На достоверность исследования в той или иной степени влияет:

Прием лекарственных препаратов.
Нарушения обменных процессов в организме.
Наличие некоторых патологий хронического характера, способствующих активной выработке иммуноглобулинов.

Учитывая недостатки результатов опыта инвитро методом ИФА, пациенту назначаются дополнительные исследования. Для достоверного обнаружения антител к вирусной инфекции гепатита С применяется метод ПЦР (полимеразной цепной реакции) либо RIBA (рекомбинантный иммуноблоттинг).

Если делать ПЦР-анализ, можно практически со 100 % точностью обнаружить количественные и типовые показатели любого возбудителя хронического заболевания с вялотекущим течением.

Что выявляет и как проводится исследование

Анализ методом ИФА способен выявить широкий ряд заболеваний у человека.

Помимо обнаружения антител гепатита всех видов, положительный результат теста может свидетельствовать о наличии в организме следующих патологий:

вируса иммунодефицита человека;
герпетической инфекции;
сифилиса;
ИППП (уреаплазмоза, хламидиоза и др.);
папилломавируса;
цитомегаловируса.

Исследование также является своеобразным маркером по обнаружению злокачественных новообразований, генетических патологий, гормональных нарушений, а также сбоев в функционировании эндокринной системы.

Подготовка к сдаче биологического материала на выявление вируса гепатита С подразумевает отказ от приема пищи и медикаментов за 12 часов до проведения исследования. Также необходимым условием является воздержание от употребления алкоголя, жирных, жареных и соленых блюд.

В медицинской практике применяются методы прямого и непрямого иммуноферментного анализа. Каждый из них проводится поэтапно.

Прямой метод ИФА

Основные этапы при проведении прямого теста заключаются в следующем:

Вначале лаборант производит забор крови из вены (либо другого биологического материала), а затем помещает ее в специальные емкости.
Чужеродные микроорганизмы (антигены) в течение 20 минут начинают прикрепляться к ним.
Специалист добавляет иммуноглобулины (антитела) к найденным антигенам для образования иммунной реакции. При этом компоненты оставляются на несколько часов.
Неприкрепленные антигены удаляются путем выливания содержимого из емкостей.
Материал ополаскивается раствором, а затем обрабатывается ферментами и оставляется на один час.
Цвет и концентрация содержимого анализируются благодаря использованию колориметрии.

Если количественный показатель содержимого превышает допустимые нормы, то это свидетельствует о наличии вируса гепатита С в организме человека.

Непрямой метод ИФА

Подразумевает взаимодействие непомеченных иммуноглобулинов с антигенами, к которым впоследствии присоединяют помеченные антитела.

В начале у пациента берется кровь из вены. Затем биологический материал помещается в специальные емкости примерно на полчаса. При этом непомеченные антитела присоединяются к стенкам емкостей. Затем к ним добавляются помеченные антитела. В результате их взаимодействия образуется иммунный комплекс «антитело-антиген».

По истечении 4 часов содержимое емкостей выливается, а неприкрепленные микроэлементы удаляются. Лаборант присоединяет помеченные антитела к уже образовавшемуся комплексу, при этом происходит иммунная реакция «антитело-антитело-антиген».

После повторного удаления незакрепленных микроэлементов в емкость добавляется специальный фермент, меняющий цвет и количественные показатели содержимого. На основании полученного результата специалист сверяет данные и делает заключение.

Непрямой метод считается более достоверным способом выявления вируса гепатита С в организме. Полученная иммунная реакция позволяет также определить наличие иных заболеваний и патологических изменений в органах и системах человека.

Расшифровка результатов

При проведении ИФА внимание уделяется наличию либо отсутствию антител классов IgA, IgG и IgM. Количественные показатели этих антител сверяются с данными специальной таблицы.

Согласно ей, расшифровка результатов сводится к следующему:

Если все три типа показателей не определяются, у человека наблюдается полное выздоровление.
При одновременном положительном результате по всем трем показателям, наблюдается острая форма вирусной инфекции.
Если определяются антитела класса IgG, при этом остальные классы не выявлены, то у человека развился постинфекционный иммунитет.
На хронический характер заболевания указывают положительные показатели антител классов IgG и IgA. При этом они остаются неизменными даже после медикаментозного лечения.
При положительном выявлении всех трех типов антител может наблюдаться рецидив хронического характера гепатита.

Согласно статистическим данным, уровень IgM начинает повышаться через несколько дней после попадания инфекции в организм, что свидетельствует о ранней стадии патологии. IgG антитела обычно проявляются через 2 недели после начала заболевания и находятся в крови на протяжении длительного периода времени (даже после выздоровления). Антитела IgA обнаруживаются через 2 недели, при этом после медикаментозной терапии их концентрация в организме снижается.

Время ожидания результатов теста составляет от 1-10 дней. При этом следует учитывать характер заболевания и возможности медицинской лаборатории.

Помните, что гепатит С ИФА положительный не всегда свидетельствует о наличии инфекции. Нередко тест считается ложноположительным, что требует повторной сдачи крови. В некоторых случаях пациенту назначают дополнительные исследования для более точного определения показателей крови.

Основным критерием при проведении теста является точное выявление количественных и типовых показателей. Они позволяют определить не только наличие вируса, но и форму заболевания. Диагностика гепатита С при помощи современных методов позволит начать своевременную медикаментозную терапию и минимизировать негативные последствия.

Рекомендуем прочитать:

Source: pechen1.ru

Источник

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник