Исследование сыворотки крови методом ифа на гепатит с
Для того чтобы с высокой точностью определить вид гепатита после постановки предварительного диагноза, спрогнозировать течение заболевания, установить стадию его развития, используют различные серологические исследования. Наиболее точные данные получают после проведения иммуноферментного анализа. Используя ИФА гепатит С, диагностируют в 95% случаев. Именно данный анализ даёт возможность выявить антитела антивируса гепатита С (антивирус HCV) и оценить не только степень активности патологического процесса, но и уровень результативности противовирусной терапии, назначенной лечащим врачом и проведённой под его контролем.
Когда необходимо исследование и его особенности
Гепатит С является самым опасным видом данного заболевания, так как отличается длительным скрытым (латентным) периодом и опасными последствиями. Избежать появления и развития позволяет правильная и своевременная диагностика, одним из самых информативных методов которой признан иммуноферментный анализ.
Подтвердить наличие в крови пациента HCV инфекции можно с помощью серологических маркеров, а получить наиболее полные и достоверные данные о существовании антител позволяет анализ, который основан на комплексе структурных и неструктурных вирусных пептидов. У здоровых людей антитела к вирусу гепатита С в крови пациента отсутствуют, а их обнаружение свидетельствует о наличии патогена и развитии патологического процесса.
В ходе исследования специалисты выявляют суммарные антитела класса IgM и IgG, имеющие непосредственное отношение к структурным и неструктурным белкам HCV. Проведение данного исследования позволяет на ранней стадии заболевания выявить больных, инфицированных вирусом гепатита C. Присутствие суммарных антител в крови пациента говорит о начале болезни или перенесённой инфекции.
О начале заболевания свидетельствует наличие антител класса IgM, а о перенесённом гепатите типа С можно судить по выявленным антителам класса IgG. Они же становятся подтверждением реконвалесценции (заключительной стадии болезни).Для этого периода характерно анатомическое и функциональное восстановление поражённых недугом органов.
Своевременно проведённый ИФА (иммуноферментный анализ) позволяет на ранней стадии развития выявить патологический процесс, с высокой точностью диагностировать заболевание и увеличить шансы на быстрое выздоровление. Тест ИФА даёт возможность определить не только наличие вируса, но и количество специфических суммарных антивирус антител.
Исследование назначается:
- Женщинам в состоянии беременности при постановке на учёт в женской консультации.
- Пациентам, у которых обнаружены симптомы острого или хронического гепатита.
- Медицинским работникам, постоянно контактирующим с биологическими материалами.
- Пациентам с диагнозом СПИД.
- Наркозависимым гражданам.
- Больным алкоголизмом и тем, кто ведёт асоциальный образ жизни.
Направление на тест ИФА (иммуноферментный анализ) получают и сотрудники правоохранительных органов или работники коммунальных служб. Необходимость в проведении ИФА возникает при подозрении на нарушение функциональности печени или при получении сомнительных данных о состоянии органа после ультразвукового исследования. Врач может дать пациенту направление на иммуноферментный анализ крови, если последнему предстоит сложное хирургическое вмешательство. Если женщина (особенно в возрасте старше 30 лет) планирует беременность, а в анализе крови обнаружены повышенные значения билирубина или трансфераз (АЛТ, АСТ).
Специфические антивирусные антитела IgG обнаруживаются на протяжении нескольких лет. Их концентрация постепенно снижается, что является подтверждением положительной динамики. Что касается хронического гепатита С, то в этом случае количество суммарных анти-HCV антител не меняется. Точная диагностика основана на определении уровня содержания антител класса IgM.
Течение гепатита С зависит от генотипа вируса, ставшего причиной развития заболевания. Современной медицине известны 11 их разновидностей. В самых сложных ситуациях возможно инфицирование сразу несколькими генотипами вируса, и один из них всегда оказывается доминирующим. Только точная диагностика поможет выбрать наиболее эффективные лекарственные препараты для результативной терапии, подобрать их дозировку и установить длительность проведения терапевтических мероприятий.
Оценка результатов исследования
Для постановки диагноза при подозрении на наличие гепатита С и получения ориентировочной информации о количестве и качестве возбудителя проводится иммуноферментный анализ (ИФА), в ходе которого специалисты получают подтверждение присутствия в организме вируса и могут судить о его активности.
С помощью данного исследования можно сделать выводы о:
- вирусной нагрузке;
- степени риска развития хронического процесса;
- активности воспроизведения (репликации) молекулы РНК вируса HCV;
- продолжительности течения патологического процесса;
- степени поражения печени.
Оценивается и уровень риска перехода заболевания в хроническую форму. Выявленные с помощью ИФА антивирус HCV антитела свидетельствуют о вирусной репликации. Конечные результаты требуют подтверждения с помощью более точных исследований.
Качественная оценка итога иммуноферментного анализа выражается как положительный или отрицательный результат. ИФА позволяет выявить гепатит С на ранней стадии развития недуга, а также при течении заболевания в безжелтушной форме.
Анализ имеет определённые преимущества, среди которых:
- Точность качественных и количественных показателей.
- Минимальные сроки исследования.
- Поэтапное проведение теста.
Иммуноферментный анализ принадлежит к числу обследований, отличающихся высокой точностью, но несмотря на все преимущества, в некоторых случаях не позволяет выявить возбудителя, присутствующего в организме человека.
Для исследования лаборант берёт венозную кровь пациента и помещает её в специальные ёмкости. Спустя определённое время антигены (чужеродные микроорганизмы) прикрепляются к стенкам сосуда. Специалист вводит в сосуд иммуноглобулины (антитела) и добивается иммунной реакции.
Полученные результаты сверяют с данными специально составленной таблицы. Результат оценивается как:
Положительный, свидетельствующий о наличии острой формы заболеваний, если в ходе исследования крови определяется наличие антител классов IgA, IgG, IgM.
Отрицательный – все три типа антител не выявлены, отсутствуют.
Ложноположительный – результат ИФА положительный, но не получивший подтверждения после проведения ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Сомнительный – маркеры в крови не определяются при наличии гепатита С. Такое возможно при слишком ранней диагностике. Требуется повторное проведение анализа через 2-3 недели. Для постановки точного диагноза делают анализ ПЦР.
Ложноотрицательный результат анализа возможен у пациентов, принимающих лекарственные препараты, оказывающие подавляющее действие на защитную систему организма.
Как ложноположительный, так и ложноотрицательный результаты проведённого анализа возможны по нескольким причинам. В первую очередь – это минимальная вирусная нагрузка на самой ранней стадии развития заболевания. Не менее важно состояние иммунной системы пациента и индивидуальные особенности его организма. На результатах исследования заметно сказывается приём лекарственных препаратов из числа иммунодепрессантов.
Нельзя быть полностью уверенным в точности результата иммуноферментного анализа, если пациентка – это женщина в состоянии беременности. Ложные результаты возможны и в тех случаях, когда анализ проводят пациентам, страдающим аутоиммунными недугами, онкологическими заболеваниями, имеющим доброкачественные новообразования.
Дополнительное исследование проводится в том случае, если пациент недавно перенёс тяжёлое инфекционное заболевание, у него диагностировано нарушение обмена веществ или сбой в работе эндокринной системы. Если в составе крови повышено содержание гепарина или заметно снижен уровень содержания микроэлементов.
Увеличить точность проведённого анализа можно, соблюдая существующие правила подготовки к его сдаче:
- Кровь сдают только натощак. Последний приём пищи разрешён не менее чем за 8-10 часов до забора материала.
- Вечером перед анализом требуется отказаться от употребления в пищу жирных, жареных, острых, копчёных продуктов и блюд.
- Не может быть речи об употреблении спиртосодержащих напитков.
- Лучше отказаться от курения за сутки до сдачи крови.
Делать иммуноферментный анализ можно только тем пациентам, которые в данное время не болеют простудными, воспалительными или инфекционными заболеваниями, не жалуются на недомогание.
Нарушение перечисленных правил и требований приводит к тому, что результат анализа оценивается как ложноположительный. Такая ситуация складывается в 15-20% случаев. Однако для полной уверенности врачи направляют пациентов на дополнительное обследование, в ходе которого им нужно сдать кровь на ПЦР.
Полимеразная цепная реакция
Постановка диагноза невозможна только на основании результатов иммуноферментного анализа. Наличие антител не является доказательством присутствия болезнетворного вируса в организме на момент исследования. Ошибочное тестирование может спровоцировать нервный срыв или ещё более острую реакцию пациента. Постановка диагноза на основании результатов ИФА не является точной. Требуется дополнительное исследование, по итогам которого и будет вынесен окончательный вердикт врачей.
Важно помнить, что ложноположительный результат анализа возможен у людей, которые в данный момент болеют другими инфекционными заболеваниями, однако их иммунная система неправильно отреагировала на проникновение в организм болезнетворных микроорганизмов или вирусов.
Диагностировать гепатит С позволяет ряд лабораторных исследований, особое место среди которых занимает иммуноферментный анализ (ИФА). Качественная оценка показателей определяется как положительный или отрицательный результат. Отсутствие вируса гепатита в крови пациента – норма, но в некоторых случаях после проведённого исследования специалисты заявляют об обнаружении в биологическом материале незначительных концентраций некоторых фрагментов РНК (рибонуклеиновой кислоты). Выявляют их с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Этот анализ крови даёт возможность выявить возбудителя гепатита С на ранней стадии развития заболевания и с высокой точностью поставить диагноз. Основано исследование на том, что вирусы имеют в составе структуры молекулы ДНК (гепатит B) или РНК (гепатит C).
В ходе анализа ПЦР с помощью специальной обработки образцов крови пациента:
- увеличивают концентрацию молекул нуклеиновых кислот;
- определяют их тип;
- устанавливают вид возбудителя.
Если в крови человека есть небольшое количество фрагментов РНК возбудителя, то с помощью ПЦР все они будут выявлены. Это и даёт возможность поставить точный диагноз. Главное отличие данного анализа от всех иных методов исследования – на 100% точная диагностика.
Такой анализ проводится при исследовании крови беременных женщин, обратившихся в женскую консультацию для постановки на учёт, при подозрении на наличие гепатита С с длительным латентным (скрытым) периодом, при затруднении в постановке точного диагноза с помощью ИФА. Проведения ПЦР необходимо в тех случаях, когда после иммуноферментного анализа получен сомнительный результат.
Вирус гепатита С в данной ситуации есть в организме больного, но ещё не спровоцировал стремительное развитие недуга. Это и есть латентное течение заболевания. Анализ делается довольно быстро, так как для получения результата нет необходимости выращивать возбудителя, используя питательную среду. Главное отличие ПЦР от иммуноферментного анализа (ИФА) заключается в том, что в данном исследовании не существует такого понятия, как ложноположительный или сомнительный результат.
Источник
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания, либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Источник
