Качественная пцр реакция к гепатиту б
Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови. Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя.
Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.
Вы знаете как расшифровывается ПЦР?
ДаНет
Что такое ПЦР на гепатит В?
Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма.
По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.
ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.
Показания к исследованию
Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.
Исследования проходят:
- реципиенты донорской крови;
- больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
- инфицированные ВИЧ;
- беременные женщины;
- медицинские работники инфекционных отделений;
- лаборанты, исследующие кровь;
- больные с печеночными патологиями;
- все потенциально зараженные;
- люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.
Количественный ПЦР проводится:
- если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
- после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
- при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.
Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.
Виды ПЦР
Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру.
В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.
Количественный ПЦР на гепатит В
Показатель ПЦР количественный при гепатите B характеризует:
- интенсивность деления вируса в клетках печени;
- способность организма противостоять инфекции;
- правильность выбора противовирусных средств.
В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.
По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.
Качественный ПЦР
Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз.
В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты.
Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.
Расшифровка результатов ПЦР на гепатит В
Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.
Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.
Что делать если при ПЦР подтвердили гепатит В?
Важно обезопасить близких:
- отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
- пользоваться индивидуальным полотенцем;
- изолировать раны.
Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Источник
Вирусный гепатит В является серьезным и опасным заболеванием. Опасность этой болезни заключается в осложнениях, которые следуют за ее основными проявлениями. Поэтому очень важно не запустить болезнь, и своевременная диагностика поможет этого добиться.
Так как гепатит В в основном передается через зараженную кровь, основным методом диагностики этого заболевания является анализ этой биологической жидкости. В частности, это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Но как применяется метод ПЦР при гепатите В? Что собой представляет этот анализ? Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу на гепатит? Ответы вы найдете в статье.
Что это за анализ?
Полимеразная цепная реакция — это анализ крови, благодаря которому можно определить количество и концентрацию ДНК и РНК возбудителя. ПЦР позволяет своевременно диагностировать заболевание, нивелируя риск проявления серьезных последствий недуга. Для диагностики вирусного гепатита В берется небольшой образец венозной крови пациента.
Основными задачами ПЦР на гепатит В являются:
- Диагностика вирусного поражения печени на самом раннем этапе ее развития;
- Уточнение диагноза при спорных результатах других анализов;
- Выявление вирусоносительтва;
- Определение генотипа и квазитипа патогена.
Преимуществами данного вида диагностики являются высокий уровень достоверности и быстрое получение результатов. Различают количественный и качественный анализы ПЦР. Рассмотрим каждый из них подробнее.
Количественный ПЦР при гепатите В
Количественный ПЦР при гепатите С проводится для определения количества патогенного ДНК в плазме крови пациента. Определяемым фрагментом в данном случае становится уникальная ДНК-последовательность структурного вирусного белка.
Количественный ПЦР применяется не только для постановки диагноза. При лечении гепатита В при помощи данного анализа можно установить действенность терапии по вирусной нагрузке. Если она снижается, лечение можно считать успешным.
Расшифровка качественной полимеразной цепной реакции проводится в лабораторных условиях профильными медработниками. Ключевые показатели анализа представлены ниже:
- От 75 МЕ/мл до 108 МЕ/мл — положительный результат;
- Менее 75 МЕ/мл — отрицательный результат, возбудитель вирусного поражения печени не обнаружен.
Если результат анализа положительный, можно говорить об обнаружении патогена в организме носителя, а также о сопутствующей вирусной нагрузке. В этом случае пациенту может быть назначено определенное лечение. Наиболее эффективной является терапия с применением инновационных противовирусных средств. Однако в настоящее время ВГВ признан излечимым только частично.
Отрицательный ПЦР свидетельствует об отсутствии заражения возбудителем вируса гепатита В. Однако это не означает, что человек полностью здоров. Рекомендуется сдать анализы также и на другие типы гепатита. Особенно коварен гепатовирус типа С, который чаще всего провоцирует хроническую форму болезни без выраженной симптоматики. Поэтому заболевание важно своевременно диагностировать.
Качественный анализ ПЦР
Качественный анализ ПЦР при гепатите В нацелен на обнаружение патогена. Это — один из наиболее точных методов диагностики гепатовируса. Полимеразная цепная реакция на основе образцов венозной крови пациента проводится в режиме реального времени.
Показатель свыше 75,0 МЕ на мл свидетельствует о наличии возбудителя заболевания в организме больного. Это может быть как вирусоносительтво, так и активная фаза опасного заболевания.
В каких случаях показан ПЦР?
Метод ПЦР при гепатите В — наиболее рекомендуемый гепатологами способ проверить наличие вируса в крови. Пройти анализ на полимеразную цепную реакцию рекомендуется в следующих случаях:
- При наличии явных симптомов гепатита — тошноты, рвоты, желтушности склер и кожи, болей в области печени, обесцвечивания кала и потемнения мочи;
- При внутривенной (инъекционной) наркомании;
- При высоких показаниях АлТ и АсТ в результатах биохимического анализа крови;
- При холестазе (застое в желчевыводящих путях);
- Беременность или хирургическое вмешательство, предварительная подготовка к родам или операции;
- При регулярных процедурах диализа или переливания крови;
- Если состоялся половой акт с потенциально зараженным партнером.
Количественный или качественный анализ ПЦР также может назначаться лицам, которые в прошлом уже переболели одной из форм гепатита. Таким образом мониторится состояние пациента, так как возможен рецидив.
Как подготовиться?
Любая диагностика вирусного заболевания требует подготовки, в противном случае результаты будут неточными. Перед сдачей крови на ПЦР количественный при гепатите В, пациенту следует:
- Отказаться от тяжелой и насыщенной жирами пищи за сутки до явки на сдачу образца крови;
- Не есть в течение последних 8 часов перед сдачей анализа;
- Отказаться от употребления алкоголя и табачной продукции не менее чем за 1 сутки;
- Избегать стресса и физической перегрузки, хорошо выспаться.
Сбор образцов биологической жидкости для исследования проводится в утренние часы. Чаще всего анализ ПЦР на гепатит В сдается в 8 утра.
Оцените статью:
| Всего голосов: 0 Средняя оценка: 0
Источник
Вирусный гепатит В успешно лечится, если его вовремя обнаружить и правильно определить количество антител и антигенов в крови больного. С помощью иммуноферментного анализа на гепатит можно обнаружить присутствие маркеров вируса, но не могут установить точно стадию процесса.
Для количественной оценки применяют ПЦР диагностику. С помощью теста возможно посчитать количество маркеров, спрогнозировать течение болезни и вероятность излечения при помощи противовирусных препаратов.
Главное преимущество исследования — возможность обнаружить даже минимальные концентрации вируса, идентифицировать возбудителя на видовой стадии.
Диагностика гепатита В
Вирус гепатита В отличается большой контагиозностью и устойчивостью к внешним воздействиям. Он сохраняет активность в следах крови больного до нескольких недель. Поэтому каждый человек подвержен риску заражения даже при условии соблюдения профилактики.
Для диагностики заболевания назначают следующие исследования:
| Иммуноферментный анализ крови на наличие антител к ВГВ | Это быстрый и информативный тест. Его недостатком является то, что исследование только дает информацию о присутствии антител, но не уточняет их количество. |
| Биохимический анализ крови | При начавшихся изменениях в печени в крови больного будет повышен уровень билирубина, щелочной фосфатазы и снижен уровень печеночных ферментов. Но на начальной стадии показатели будут находиться в пределах нормы. |
| ПЦР (полимеразная цепная реакция) | С ее помощью восстанавливают ДНК вируса, подсчитывают количественные показатели антител, уточняют стадию заболевания. То есть разное количество антител может свидетельствовать об остром этапе или о постпрививочном иммунитете. |
Суть ПЦР метода
Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии).
Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов.
Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты:
- Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию.
- Праймеры, схожие по строению участку ДНК.
- Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур.
- Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции.
Реакция проводится в несколько этапов:
| Денатурация (прогревание) | Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся. |
| Стадия отжига | Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей. |
| Этап элонгации | Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато. |
Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную.
Количественный ПЦР
Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.
Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.
Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:
- С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
- Насколько эффективно проводимое лечение.
- Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.
Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.
При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.
Качественный ПЦР
Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным.
Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение.
Подготовка к обследованию
Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.
Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:
- За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
- Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
- Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
- За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.
Интерпретация данных
Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ.
При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл.
Расшифровываются данные следующим образом:
- Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни.
- При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса.
- Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни.
- При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита.
Ошибочные результаты
Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем:
- Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу.
- Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала.
- Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток.
- Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений.
У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы.
В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д.
Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях:
- пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты;
- человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа);
- заражение произошло недавно.
Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование.
Заключение
Метод полимеразной цепной реакции является основным и самым информативным для диагностики ВГВ. Он позволяет не просто установить носительство инфекции, но и уточнить этап заболевания, оценить результаты лечения.
Для более точного диагноза применяют качественное и количественное измерение. К недостаткам способа можно отнести вероятность загрязнения, снижение чувствительности и довольно высокую цену.
Для того, чтобы результаты были наиболее достоверными, следует правильно подготовиться к исследованию и проводить его в клинике с соответствующей лицензией и хорошей репутацией.
Смотрите видео о ПЦР:
Гепатолог, Гастроэнтеролог, Диетолог
Светлана Владимировна принимает пациентов с заболеваниями печени и ЖКТ различной степени тяжести. Благодаря ее знаниями в диетологии, на основании диагностики проводит полный комплекс терапии внутрибрюшных органов.Другие авторы
Комментарии для сайта Cackle
Источник
