Как читать пцр на гепатит
Причина развития вирусного гепатита C – инфицирование возбудителем, который относится к семейству Flaviviridae. Между заражением и началом выработки антител выявляется длительный временной промежуток, что не позволяет своевременно диагностировать заболевание посредством иммуноферментного исследования крови.
Анализ ПЦР на гепатит C, биохимия, ОАК, печеночные пробы проводятся при подозрении на заражение. Путем полимеразной цепной реакции можно выявить вирус в крови даже на первой неделе инфицирования, что выступает доминирующим преимуществом метода.
Количественный и качественный анализ на гепатит C и особенности исследования, как нужно подготавливаться, бывают ли ошибки, расшифровка – рассмотрим подробно.
Что такое метод полимеразной цепной реакции?
Полимеразная цепная реакция – методика молекулярного исследования для определения генетического материала вирусного агента с первых дней инфицирования. Анализ характеризуется высокой степенью достоверности, специфичностью, точностью. Благодаря нему не только выявляют отсутствие/наличие вируса, но и вирусную нагрузку (количественное значение), генотип.
Для исследования необходима кровь больного, в которой предположительно находится РНК вирусной инфекции. В лабораторных условиях в биологическую жидкость добавляют праймеры – это синтезированные искусственным образом фрагменты искомого гена малой длины. Плюс РНК-полимеразу – специализированный фермент, многократно увеличивающий концентрацию искомого материала.
Далее кровь с добавлением компонентов нагревают и охлаждают несколько раз в специальном приборе. После идет анализ полученных результатов, сопоставление с известными генами вирусного агента. На основе этого делают заключение о заболевании.
Разновидности исследования ПЦР
Анализ на гепатит C ПЦР проводится в лаборатории с добавлением нужных реагентов, имеет три разновидности с отличительными характеристиками:
- Качественный ПЦР анализ на гепатит C является первым этапом исследования. Посредством него обнаруживают генетический материал возбудителя в сыворотке крови.
- Количественное исследование позволяет оценить вирусную нагрузку – это содержание вирусного материала в 1 мл крови больного. Проводится перед началом курса лечения, а потом после 1-4-12 недели терапии. Когда курс продолжительный, то исследование необходимо провести после 24 недели терапии, чтобы оценить результативность.
- Генотипирование. Заразное заболевание развивается стремительно, вирус имеет свойство мутировать. Поэтому необходимо выявить генотип вируса.
Ученые выявили 7 генотипов вируса. В РФ большую распространенность получили 1-2-3 виды.
Каждый из генотипов характеризуется устойчивостью к лечению.
Например, при 1-м типе результативность терапии около 60%, на фоне 2-3 вида показатель достигает 85%.
Чтобы подобрать нужные лекарства, продолжительность лечения, требуется выявить не только сам факт заражения, но и концентрацию вируса, его генотип.
Показания к проведению
Маркеры на гепатиты, ПЦР и ИФА, другие исследования имеют определенные медицинские показания:
- Когда в анамнезе больного ВИЧ-инфекция, СПИД.
- Контакт с зараженным человеком, поскольку вирусный гепатит отличается высокой степенью контагиозности.
- Симптоматика циррозного поражения печени – гепатомегалия, увеличение размеров селезенки, на животе проявился венозный рисунок и пр.
- Клиника функционального нарушения печени – периодическая/постоянная боль в области правого подреберья, пожелтение кожного покрова, тошнота.
- Высокие значения АСТ и АЛТ в биохимии крови.
- При беременности, когда плохие показатели печеночных проб.
- Перед началом противовирусного курса, чтобы определить вирусную нагрузку.
- Для контроля результативности проводимой терапии.
- После терапии, чтобы предупредить рецидив вирусной инфекции.
ПЦР проводится при подтвержденном диагнозе гепатита B, чтобы исключить смешанный вид поражения печени.
Подготовка к проведению исследования и забор материала
Как готовиться к анализу, расскажет доктор. Чтобы получить точный результат, пациенту рекомендуется подготовка. Она состоит в следующих рекомендациях:
- Анализ нужно сдавать утром, натощак. Допускается перед забором крови пить только чистую, негазированную воду. Последний прием пищи – за 8 часов до забора.
- Если не получается сдать анализ в утренние часы, это можно сделать вечером или в обед, главное – через 5-6 часов после приема пищи, не раньше.
- За 48 часов до исследования отказаться от алкогольной продукции, кофеинсодержащих напитков, соков.
- За 2 суток нужно соблюдать диету, исключив все вредные продукты. Однако некоторые врачи полагают, что жирная, жареная еда не сказывается на точности ПЦР исследования.
За 24 часа до медицинской манипуляции не принимать лекарства. Если это невозможно, сообщить лечащему врачу. Анализ не рекомендуется выполнять сразу же после УЗИ, КТ, массажа и др. физиотерапевтических процедур.
Забор крови происходит следующем образом:
- Посредством специального жгута, который затягивается на предплечье пациента, медик останавливает венозный кровоток. Вены становятся более заметными, что облегает процедуру введения иглы, последующего забора крови.
- Участок кожи перед введением стерильной иглы обрабатывают спиртосодержащей жидкостью.
- В вену вводят иглу, после к ней прикрепляют пробирку, в которую поступает кровь.
- После введения иглы жгут снимают. Набирают необходимое количество крови, извлекают иглу.
- К месту укола прикладывают ватку, смоченную в спирте.
Чтобы предупредить формирование синяка в месте введения иглы, необходимо ватный тампон достаточно сильно прижать к травмированной области, согнуть руку и держать в таком положении 3-4 минуты.
Если больной принимает лекарства, способствующие разжижению крови (Аспирин, Варфарин), могут быть определенные проблемы с остановкой кровотечения.
Преимущества ПЦР перед другими анализами
У метода полимеразной цепной реакции имеются определенные преимущества в сравнении с другими диагностическими методиками.
Плюсы исследования представлены в таблице:
| Прямая диагностика возбудителя патологии | Другие исследования позволяют дать ответ – есть ли возбудитель в организме или нет. Но с помощью ПЦР методики можно конкретно установить вид вирусного агента. |
| Специфичность исследования | ПЦР определяет уникальный фрагмент ДНК, который соответствует только одной разновидности вирусного агента. Это позволяет свести к минимуму вероятность ошибки. |
| Высокая степень чувствительности | Можно выявить даже мизерную концентрацию вируса в крови. |
| Определение всех возбудителей | Во время исследования можно обнаружить всех патогенных агентов. |
| Скрыто протекающие инфекции | Кроме вирусного возбудителя можно выявить инфекции, которые имеют латентное течение, отличаются высокой антигенной активностью. |
Когда пациент получает положительный результат, это будет означать, что в биологической жидкости был обнаружен генетический материал возбудителя гепатита. Отрицательный итог – следы вируса отсутствуют.
Расшифровка результатов
Расшифровывать результаты должен доктор на основании заключения, которое пациент получает в лаборатории. Анализировать данные необходимо в совокупности с показателями биохимии, ОАК, УЗИ.
Качественный
Качественное исследование будет показывать наличие либо отсутствие возбудителя вирусного заболевания в крови человека. Вариантов может быть два – отрицательный (норма) либо положительный результат.
В бланке иногда написано: обнаружено или не обнаружено.
Положительный результат – лаборант выявил в крови больного генетический материал вирусного агента, заражение подтверждено. Отрицательное заключение – заражения нет, фрагменты РНК вируса находятся ниже пределов чувствительности.
Количественный
Количественный анализ подразумевает несколько вариантов результатов. Для удобства ознакомления представим их в виде таблицы.
| Результат | Расшифровка |
| Отрицательно | Это норма для здорового человека. Значит, в исследуемом биологическом материале нет РНК вирусного гепатита, либо содержание меньше порогов восприимчивости. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Говорит о том, что содержание РНК меньше диапазона количественного определения. Интерпретировать такой результат надо осторожно, потому что он считается спорным. Дополнительно проводятся другие исследования для последующего сопоставления. Также проводят повторно ПЦР-тест. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Низкая вирусная нагрузка. Как правило, такой результат значит, что проводимое лечение эффективно. |
| От 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка. Незамедлительно требуется терапия (если не проводится), либо необходима коррекция медикаментозных назначений. |
| 2,4*10^7 МЕ/мл | РНК больше верхнего максимума количественного определения. На фоне такого результата о вирусной нагрузке не судят. Требуется повторное исследование с разведением образца биологической жидкости. |
Генотипирование
Результат – обнаружена рибонуклеиновая кислота конкретного генотипа. Дополнительно указывают генотип и подтип, лаборант кодирует заключение латинскими буквами и цифрами. Например, генотип 1a. Всего выделяют 7 генотипов, 67 подтипов.
Результат – обнаружена РНК вирусного гепатита C – это ДНК редкого генотипа, который нельзя отнести к распространенным вирусным агентам, поэтому требуется провести дополнительную диагностику.
Когда ПЦР отрицательно, а ИФА положительно
Расшифровывает заключение лаборанта гепатолог либо инфекционист. Всегда есть риск получения ложноотрицательного или ложноположительного результата. Иногда бывает, что ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.
Это означает, что в данный момент вируса в крови больного нет, однако заболевание в острой форме им перенесено. Принято считать, что ИФА показывает антитела, которые продуцируются иммунной системой после вторжения в организм возбудителя.
ИФА в сравнении с ПЦР отличается малой надежностью и достоверностью, поэтому используется в качестве первичного скрининга. При диагностике вирусного гепатита без полимеразной цепной реакции не обойтись.
Стоимость исследования на гепатит С
Сдать анализы можно в больнице, где больной наблюдается, если там имеется своя лаборатория, либо обратиться в частный центр на платной основе.
В короткие сроки получить результат можно в лабораторных центрах как Гемотест, Инвитро, Хеликс.
Стоимость исследования в зависимости от лаборатории:
| Название лабораторной службы | Ценовая политика |
| Хеликс | · Стоимость забора биологического материала – 170 рублей. · Качественное + количественное исследование методом ПЦР – 3990 рублей. · Выявление антител вирусной болезни – 1500 рублей (срок 2-3 дня). · Проверка активности вируса перед началом курса терапии – 4090 рублей. |
| Инвитро | · Количественное выявление РНК вируса гепатита C посредством ПЦР – 3140 рублей. · Забор биологического материала (венозной крови) – 199 рублей. · Оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени – 18 000 рублей. · Качественный ультрачувствительный тест – от 3000 рублей. · Проведение генотипирования – от 1250 рублей. |
| Гемотест | · Цена количественного исследования 2200 рублей. · Качественная диагностика от 700 рублей. · Определение РНК возбудителя – от 4000 рублей. · Забор крови из вены около 150 рублей. |
Срок проведения исследования в среднем 2-3 дня. В некоторых лабораториях имеется услуга как срочный анализ, его стоимость в 1,5-2 раза выше. Также есть возможность вызвать медицинского специалиста домой, чтобы сдать кровь, а результаты получить по электронной почте либо лично при обращении в лабораторию.
Источник
ПЦР (Полимеразная цепная реакция) – это способ диагностики ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Впервые был введен американцем Кэри Муллисом порядка 50 лет назад.
ПЦР анализ отличается высокой чувствительностью, поскольку предоставляет возможность обнаружить возбудителя гепатита всего по одной молекуле, выявленной в биологической жидкости или коже.
Что такое ПЦР диагностика при гепатите
Сущность диагностики состоит в том, что частицу вируса принуждают размножаться in vitro (в пробирке) путем создания определенных условий и с применением специальных ферментативных веществ. ПЦР позволяет провести генотипирование возбудителя гепатита С. Это обеспечивает эффективность терапии, поскольку различные штаммы вируса неодинаково реагируют на противовирусные лекарственные средства.
Существует 2 вида ПЦР анализов на гепатит:
- качественный;
- количественный.
Проводимое лечение противовирусными препаратами следует систематически контролировать, так как иногда возникает необходимость корректировки терапии. С этой целью выполняют ПЦР диагностику.
Качественное и количественное исследование
- В первом случае выявляют в крови больного возбудителя и устанавливают его генотип. Генотипирование нужно для правильной диагностики, прогноза болезни и выбора тактики лечения.
- Если вирус гепатита С методом ПЦР в крови обнаружен, проводится количественное исследование. Последнее помогает высчитать количество молекул РНК возбудителя, находящихся в биологической жидкости пациента.
Подготовка к ПЦР диагностике гепатита
Для осуществления процедуры берут кровь из вены. Это лучше выполнять утром натощак.
Больному необходимо правильно подготовиться к ПЦР анализу на гепатит С:
- За 10 часов до манипуляции исключить прием пищи, допускается употреблять чистую воду.
- За день до процедуры исключить прием алкогольных напитков, за 4 часа до анализа не курить.
- Перед исследованием не подвергаться физическим нагрузкам и эмоциональным потрясениям.
- За 2 дня до взятия крови для проведения ПЦР на гепатит С перестать принимать лекарственные препараты. Если данное условие не выполняется, следует поставить в известность лаборанта, поскольку употребление некоторых лекарств приводит к ошибочно положительному результату исследования.
ПЦР на гепатит С
Положительный ПЦР анализ на гепатит С свидетельствует о неустанном размножении возбудителя и повреждении гепатоцитов.
Последующую количественную ПЦР диагностику гепатита С измеряют в МЕ/мл, или в копиях/мл. Это значит, какое количество копий РНК возбудителя гепатита С определенного генотипа выявлено в 1 мл крови.
Уровнем вирусной нагрузки определяется содержание РНК возбудителя в биологической жидкости пациента. У здорового человека результат ПЦР на гепатит С – отрицательный. Это говорит о том, что в крови исследуемого возбудитель выявлен не был.
Ниже в таблице представлена расшифровка количественного исследования на гепатит С методом ПЦР:
| Вирусная нагрузка (содержание вируса в копиях/мл) | Оценка нагрузки | Характер репликации возбудителя |
| 103 и меньше | Крайне низкая | Неактивная |
| 104 — 105 | Низкая | Как правило, неактивная |
| 106 | Средняя | Активная |
| 107 | Высокая | Очень активная |
- Низкая вирусная нагрузка свидетельствует о том, что лечение выбрано правильно, и исход болезни – благоприятный.
- Большая концентрация возбудителя говорит об остром заболевании. Пациент заразен для окружающих.
- Средние показатели вирусной нагрузки — свидетельство хронического гепатита. Они могут изменяться в сторону и увеличения, и уменьшения.
Количественное исследование методом ПЦР больному с гепатитом С выполняют на протяжении всего противовирусного лечения: через 1 месяц, 3 и 6 месяцев.
По окончании терапии назначают контрольную ПЦР диагностику.
ПЦР на гепатит B
ПЦР на гепатит B выполняют с целью выявления ДНК возбудителя.
Содержание ДНК определяют в копиях/мл или МЕ/мл. Результат исследования оценивают следующим образом:
- < 2х10, говорит о том, что острая стадия не перейдет в хроническую;
- от 2х104 до 2х106 – в 30% случаев имеет место хронизация процесса;
- >2х106 – в 95% случаев процесс будет хроническим.
Количественная ПЦР диагностика – основной способ определения обострения заболевания, обнаружения латентного носительства инфекции.
Расшифровка ПЦР диагностики
Качественное исследование может быть:
- положительным;
- отрицательным.
Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии вируса гепатита в крови.
Положительный анализ говорит о выявлении РНК возбудителя определенного штамма.
Достоверность ПЦР анализа на гепатит составляет 95%. 5% —ошибка из-за халатности персонала. Такое случается вследствие повышенных требований к выполнению анализа:
- соблюдение определенных условий хранения реактивов;
- высокая квалификация медицинских работников;
- чистота взятого материала.
Сам анализ характеризуется 100% диагностической точностью.
Количественное ПЦР исследование на гепатит дает возможность оценить вирусную нагрузку на организм. Анализ позволяет:
- уточнить стадию болезни;
- узнать эффективность противовирусной терапии;
- определить необходимость проведения биопсии печени.
Иногда пациент не ощущает себя заболевшим, а ПЦР анализ выявляет инфицирование. Это говорит о ранней стадии болезни или хронической форме. Для точной диагностики следует провести дополнительные исследования и начать адекватную противовирусную терапию.
Государственные учреждения выполняют анализ на бесплатной основе. Достаточно направления от врача-инфекциониста или гепатолога.
Платно исследование делают во всех больших городах нашей страны. Цену определяют тип исследования, имеющееся оборудование, время, затраченное на анализ.
- Качественная ПЦР диагностика в Москве и Санкт-Петербурге будет стоить 600-900 руб. В области –300-800 руб.
- Количественный ПЦР анализ на гепатит С обойдется в 17000-22000 руб., на гепатит В — 1200-10000 руб.
Преимущества и недостатки исследования
Основными достоинствами ПЦР диагностики становятся:
- Широкий диапазон использования. Применяя стандартное оборудование, можно выявить любой вирус.
- Точность обнаружения вируса. Используя разные сочетания ферментов и технику выполнения анализа, получают 100% спецификацию анализа для нужного возбудителя.
- Высокая чувствительность. Данным методом обнаруживается в крови даже одна молекула возбудителя.
- Быстрота. На качественный анализ уходит несколько часов, количественный готов через пару суток.
- Определение возбудителя в инкубационном периоде. ПЦР выявляет вирус гепатита С не по наличию иммуноглобулинов, когда уже сформировался иммунный ответ, а до развития патологической реакции, что облегчает терапию.
Недостатки ПЦР диагностики становятся следствием ее преимуществ:
- необходима высокая степень чистоты, в том числе, лабораторного воздуха, чтобы другие РНК не проникли в образец;
- повышенные требования к медицинскому персоналу.
Результаты оценивает специалист, способный отличить подлинный анализ от ошибочно положительного (когда терапия завершена, а в крови остался нежизнеспособный возбудитель). Встречаются ложноотрицательные анализы (при клинической картине возбудителя не находят).
Автор статьи врач-инфекционист, гепатолог
© 2019. Все права защищены.
Источник
