Как подготовиться к сдаче пцр на гепатит

Гепатит С переходит из острой фазы в хроническую в 80% случаев. Репликация болезнетворных вирусов в функциональных клетках печени ведет к дисфункции органа. Это обусловлено тем, что паренхиматозная ткань заменяется соединительной. В результате анамнез больного дополняется кровотечениями в ЖКТ, интоксикацией организма, проблемами со свертываемостью крови. Поэтому чем раньше будут диагностированы патологические изменения, тем больше у пациента шансов на выздоровление. Анализ ПЦР на гепатит С считается наиболее точным методом исследования.

Этот диагностический метод разрешено проводить спустя несколько дней после заражения. Полимеразная цепная реакция позволяет достоверно определить генотип и концентрацию вируса в крови. Чтобы сделать анализ, у пациента берут биологический материал, в котором может присутствовать РНК возбудителя.

ПЦР на гепатит С осуществляют в три этапа:

Качественный анализ – с его помощью определяют генетический материал возбудителя.
Количественное исследование – таким образом выявляют вирусную нагрузку.
Генотипирование – на этой стадии врач узнает разновидность заболевания.

Методику разработали около 30 лет назад. Ее применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет обнаружить уникальный генетический материал. Для этого используют праймеры. Так называют короткие нити РНК, которые присоединяют к началу гена.

Анализ ПЦР

В результате количество фрагментов болезнетворного вируса многократно увеличивается. Каждая фаза требует особого температурного режима и определенного промежутка времени. Молекула ДНК формируется в течение 3 минут. Амплификация включает в себя около 30 циклов. ПЦР делают в лаборатории посредством специального оборудования.

Показания к назначению

Сдача анализа ПЦР может быть обусловлена наличием клинических симптомов гепатита С. Процедура показана людям, которые:

контактировали с инфицированным человеком;
страдают от острых и хронических заболеваний печени;
проходят лечение от патологических изменений в паренхиматозной ткани;
входят в группу риска;
являются донорами крови и ее компонентов.

ПЦР осуществляют не только при гепатите С. Анализ используют в медицине, биологии, криминалистике. Определение специфических показателей – этап, необходимый для подбора лекарственной схемы.

Преимущества анализа

В схему диагностического обследования включают иммунофлуоресцентный анализ и ПЦР. С помощью первого можно определить концентрацию иммуноглобулинов. Эти вещества вырабатываются защитным механизмом после проникновения болезнетворных вирусов в организм. В отличие от ПЦР ИФА не обладает эффективностью во время инкубационного периода. С помощью полимеразной цепной реакции гепатит С можно выявить в первые 7 дней после инфицирования.

Данное клиническое исследование обладает следующими характеристиками:

Минимальная вероятность ложного результата.
Высокая эффективность.
Специфичность.
Чувствительность.
Универсальность.
Автоматизация процесса.
Безопасность.
Скорость получения показателей.

Единственным минусом ПЦР является ее техническая сложность. Это связано с тем, что врачу необходимо подобрать правильный состав нуклеотидов, в функциях которых синтез ДНК. Из-за повышенной чувствительности метода возможно получение ложноположительного или ложноотрицательного результатов.

Чтобы добиться точности значимых показателей, биологический материал тщательно очищают от медикаментозных препаратов и белковых соединений. Для подтверждения результата требуется сравнение ранее проверенных образцов. К факторам, провоцирующим ошибку, причисляют:

Нарушение техники забора анализа

Нарушение техники забора анализа.
Изменения в последовательности фрагментов РНК.
Совпадение синтезируемых нуклеотидов и генов болезнетворных вирусов.

Вероятность получения ложного результата при гепатите С присутствует из-за невозможности определения генетической основы заболевания. ПЦР-диагностика позволяет напрямую выявить возбудителя. С помощью амплификации ДНК происходит обнаружение болезнетворных микроорганизмов в продуктах питания, воде и почве.

Ограничения, касающиеся данного метода, не уменьшают его эффективности и популярности. Клиническое исследование проводят регулярно. Таким образом врач может оценить эффективность принятых лечебных мер. Необходимость в этом возникает из-за того, что вирус гепатита С способен мутировать. Отсутствие положительного эффекта означает адаптацию вируса к применяемым лекарственным средствам.

Подготовка к сдаче

Для того чтобы провести полимеразную цепную реакцию у больного, страдающего от гепатита С, берут венозную кровь. Обычно для изучения требуется две порции биологического материала. Посредством одной делается непосредственно ПЦР, а другую направляют на иммуноферментный анализ.

Кровь для анализа ПЦР берут из вены

Подготовка имеет большое значение. Пациент сдает кровь на ПЦР утром на голодный желудок. За несколько дней до процедуры придется отказаться от вредных продуктов питания, спиртных напитков, никотина и наркотиков. Больному следует избегать половых контактов, чрезмерной физической и эмоциональной нагрузки. Бассейн и спортзал оказываются под запретом. Подготавливаться придется в любом случае.

Существуют особые указания относительно медикаментозных препаратов. Это касается антибиотиков и антидепрессантов. Женщины, у которых начались менструации, должны отсрочить сдачу анализа на гепатит С. Кольпоскопия также является поводом для отказа от процедуры.

Перечисленные правила довольно просты. Благодаря им, можно добиться максимальной достоверности данного диагностического метода. Расшифровывать результаты должен специалист. Самостоятельно интерпретировать их у пациента вряд ли получится.

Процесс сдачи анализа

ПЦР-диагностику осуществляют следующим образом:

Кровь помещают в термостат

Сначала забирают биологический материал. Кровь помещают в простерилизованные приспособления. Необходимый объем не превышает 1-1,5 мл. Держать кровь и ее компоненты следует не дольше 24 часов. Температура хранения не должна превышать 4 градусов по Цельсию.
После начинают клиническое исследование. Подготовленную кровь помещают в термостат вместе с амплификационной смесью. Обычно требуется не более 25 мл специального состава. Амплификация проводится в автоматическом режиме на протяжении нескольких часов.
Параллельно делают контрольные анализы. Для этого используют биологические материалы, взятые у здорового человека. Это поможет избежать ложных результатов.
Расшифровка и регистрация показателей. Генетический материал обнаруживают с помощью бромистого этидия. Благодаря специфическому воздействию, фрагменты ДНК высвечиваются. Наличие (отсутствие) вируса выявляют ориентируясь на данные таблицы.

Расшифровка результатов

Определить значение полученных показателей может только инфекционист и гепатолог. Анализ ПЦР вводят диагностический комплекс вместе с биохимическим исследованием крови, УЗИ, ИФА и биопсией. Диагноз ставят на основании всех результатов. Порядок расшифровки анализов зависит от этапа диагностического обследования.

Ультразвуковая диагностика

На первой стадии ПЦР положительным результатом теста считается обнаружение фрагментов ДНК болезнетворного вируса. При проведении количественного анализа определяют уровень вирусной нагрузки. Она может быть низкой (менее 8*10^5 МЕ/мл), средней (от 8*10^5 МЕ/мл), высокой (больше 2,4*10^7 МЕ/мл). Нормой (отрицательным результатом) считается отсутствие специфических антител и частиц вирусной РНК. На этапе генотипирования об инфекционном заражении свидетельствует РНК определенного генотипа.

При получении положительного результата больному назначают эффективную терапевтическую схему. При этом обязательно учитывают информацию о наличии вируса в крови, степени его активности и генотипе. Цена процедуры зависит от методики тестирования, вида биологического материала. К общей стоимости могут быть добавлены затраты за забор крови или других жидкостей. Последнее обусловлено тем, что возбудителя часто обнаруживают в урине, каловых массах и сперме.

Источник

Как подготовиться к сдаче пцр на гепатит

Гепатит С – заболевание, которое долгое время протекает без видимых признаков, а на поздней стадии приводит к тяжелым, нередко необратимым последствиям. Чтобы подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в организме, назначают различные виды анализов – ПЦР, ИФА, а также иные исследования. Все их объединяет биологический материал – венозная кровь. Не существует строгих правил подготовки к анализу на гепатит С, но есть общие рекомендации, которых следует придерживаться, чтобы получить предельно достоверный результат.

Правила подготовки за 3-5 дней

К анализу на гепатит С готовятся поэтапно в течение нескольких суток. В этот промежуток желательно исключить факторы, которые могут повлиять на физиологическое состояние, а также биохимические, гормональные и гематологические показатели.

Питание

Сдача крови на гепатит С обычно проводится в период с 8 до 11 утра натощак. Время выбрано для того, чтобы между процедурой и последним приемом пищи прошло не меньше 8 и не больше 14 часов.

Если человек принимает пищу в этот промежуток, результаты исследования будут искажены:

продукты с содержанием сахаров вызывают колебание глюкозы;
жирная пища провоцирует изменение мутности проб крови, повышает холестерин, калий, щелочную фосфатазу и триацилглицериды;
томаты, бананы, орехи повышают показатели серотонина;
кофе и чай вызывают скачок кортизола, изменение показателей эритроцитов и лейкоцитов, глюкозы.

Если период голода продолжается более 14 часов, анализы дадут результат, который невозможно будет сопоставить со значением нормы.

За сутки до исследования нужно отказаться от жирной и чрезмерно сладкой пищи.

Питание должно соответствовать обычному режиму. Для ужина накануне сдачи подойдет нежирный творог, диетическое мясо птицы, каши на воде, яблоки, макароны из твердых сортов пшеницы, яйца, хлеб, нежирная рыба, суп на легком овощном бульоне.

Ограничения не касаются чистой питьевой воды. Ее можно употреблять в привычном режиме.

Ограничение физической активности

Накануне анализа крови на гепатит С рекомендуется отказаться от физических перегрузок (в том числе, от секса), поскольку это вызывает гормональные и биохимические перестройки в организме. Активные нагрузки влияют на следующие показатели:

ферменты (креатинфосфокиназа, альдолаза, аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа);
гормоны (тестостерон, лютеинизирующий гормон, андростендион).

За сутки до исследования на гепатит желательно отказаться от посещения бассейна и тренажерного зала.

Алкоголь

За 3-5 дней до анализа надо исключить алкоголь. Он оказывает следующее влияние на показатели крови:

снижает концентрацию эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов;
повышает вязкость крови и скорость оседания эритроцитов;
угнетает функцию печени и поджелудочной железы, за счет чего уровень сахара в лабораторных показателях снижается;
повышает образование молочной и уксусной кислоты;
повышает содержание азотистых веществ из-за усиленного распада белка;
вызывает сгущение крови и повышает ее свертываемость;
понижает концентрацию антител, создает картину, которая соответствует вирусному гепатиту и прочим инфекциям, аллергии, злокачественным опухолям, может вызвать ложноположительный результат;
снижает выработку гормонов щитовидной железы (Т3 и Т4) и надпочечников (кортизол, альдостерон, андрогенный гормон ДЭА, норадреналин).

Медикаменты

Прием лекарств – самый надежный способ исказить результаты анализа на гепатит и прочих лабораторных показателей. Препараты оказывают физико-химическое и фармакологическое влияние.

Физико-химическое, или прямое, влияние выражается в том, что действующие вещества вмешиваются в сам ход анализа. Например, тетрациклин, хинидин и другие препараты обладают свойствами флюоресценции. Витамины А и В2 повышают оптическую плотность раствора и тем самым искажают показатели билирубина.

Биологическое, или опосредованное, влияние выражается в том, что лекарства связываются с белками, повышают или подавляют их синтез, оказывают побочное действие на разные органы и системы, вызывают токсический эффект при передозировке, а также накапливаются в тканях. Их прием накануне анализа может спровоцировать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Такой эффект заметен при приеме седативных, снотворных, психотропных и других препаратов.

Лаборатории рекомендуют перед анализом прекратить прием лекарств и выждать примерно 4-5 периодов полувыведения препарата. В среднем перерыв составляет около 3 суток. После анализа прием препаратов возобновляется.

Если лекарства жизненно необходимы и их нельзя отменить, предупредите лечащего врача, чтобы тот учел погрешности, вносимые препаратом.

Что еще может повлиять на точность анализа

Биохимические свойства крови изменяются под действием самых разных факторов:

Курение. Изменяет секрецию некоторых биологически активных веществ. Рекомендуется отказ минимум за 60 мин. до анализа.
Инструментальные обследования, например, ректальные, биопсия, МРТ, УЗИ, рентген и т.д. Нужен недельный перерыв между процедурой и анализом.
Тепловые процедуры. Требуется суточный перерыв перед сдачей крови на анализ на гепатит С и приемом бани или сауны.
Менструации у женщин. Вызывают колебания гормональных показателей.
Диета. Скудное питание провоцирует скачок билирубина. Рекомендуется есть в привычном режиме, но исключить жирную пищу.

Эмоциональное состояние оказывает непосредственное влияние на на показатели. При психологическом напряжении повышается уровень гормонов, альбумина, глюкозы, холестерина, фибриногена. Чтобы справиться с невольным волнением, стоит прийти в лабораторию за 10-20 минут до взятия проб и немного отдохнуть. Тогда влияние факторов стресса будет минимальным.

Особенности забора крови

Для анализа на гепатит С подходит только венозная кровь. Взятие материала из пальца не практикуется: если конечности холодные или отекшие либо в них нарушено кровообращение, результат будет недостоверным.

Лаборант проводит пункцию вены стерильной иглой в локтевом сгибе. Если это по каким-либо причинам невозможно, прокол делается в венах кистей рук или берется сосуд выше большого пальца руки. У детей забор может быть выполнен из яремной, лобной или височной вены. При наличии шрама или гематомы в точке забора выбирается другое место.

Анализ на гепатит может проходить как в лаборатории, так и дома. Чтобы сэкономить время или исключить фактор волнения, следует поинтересоваться, выполняет ли лаборатория выездные исследования, и по возможности сдать кровь дома.

Анализ крови на гепатит проводится натощак. Чистить зубы или воспользоваться жевательной резинкой лучше после диагностики, так как это провоцирует скачок сахара. Перед пункцией исключите резкие движения.

Перед непосредственной сдачей необходимо несколько минут посидеть, восстановить глубокое дыхание, успокоиться.

Повторный анализ на гепатит C следует сдать в тех же условиях, что и в предыдущий раз (та же лаборатория, аналогичное время, забор из той же вены). Если анализ сделан в разных лабораториях и с разной подготовкой, это не покажет результат в динамике.

Когда будут готовы результаты

На продолжительность исследования влияет не только методика, но и расположение лаборатории. Например, если образцы отправляются в соседний крупный город, где проводится исследование, то результат задержится. В среднем диагностика гепатита выполняется в следующие сроки:

определение билирубина, АСТ, АЛТ, ГГТ – 1 день;
ПЦР количественный и генотипирование – 1 день;
антитела IgM к белкам вируса гепатита С – 2 дня;
ПЦР в качественном формате, ультрачувствительный тест – 4 дня;
иммуноблот рекомбинантный, антитела к вирусу гепатита С, IgG – 5 дней;
ПЦР с количественным выявлением РНК вируса в режиме реального времени – 5 дней;
выявление РНК гепатита С в плазме крови у пациентов с хронической инфекцией – 10 дней.

Если лаборатория находится не в клинике, где берется анализ, то результат исследования приходит с задержкой.

Источник

Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.

Суть диагностики

Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.

Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:

праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
специальный фермент (РНК-полимераза).

После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА. Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов. На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.

Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.

Виды исследования

Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:

генотипирование;
качественный;
количественный.

Качественный метод

Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.

Количественный метод

Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).

Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.

Генотипирование

Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.

Достоинства анализа ПЦР на гепатит

Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:

Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.

Показания к проведению

Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:

наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
положительные результаты ИФА;
увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.

Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования

Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:

забор крови проводится утром;
анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.

Результаты анализа: нормы и отклонения

Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.

Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:

биохимического анализа крови;
данные ультразвукового исследования;
результаты биопсии.

Расшифровка количественного анализа

При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:

Показатель	Характеристика
Не обнаружено	Норма здорового человека. Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл	Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения.
До 8*10^5 МЕ/мл	Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно.
Больше 8*10^5 МЕ/мл	Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл	В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови.

Расшифровка качественного анализа

В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:

Показатель	Характеристика
Обнаружено	Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека.
Не обнаружено	Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности.

Расшифровка генотипирования

При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:

Показатель	Характеристика
Обнаружена РНК конкретного генотипа	Данный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой.
Обнаружена РНК вируса гепатита С	При подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России.
Не обнаружено	Данный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения.

Ложноположительные и ложноотрицальные результаты

Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:

при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
случаи ненамеренной подмены проб крови;
нарушения в процессе подготовки биологического материала;
воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.

Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:

кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.

Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?

Подобные исследования проводятся:

в частных медицинских центрах;
в КДВ;
в государственных поликлиниках.

Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.

Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.

Стоимость диагностики зависит от:

качества оборудования клиники;
скорость выполнения работы;
типа теста.

Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:

качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.

Фотогалерея

Загрузка …

Видео

Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.

Источник