Количественное определение рнк вируса гепатита с hcv методом пцр

ПЦР анализ

Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

ПЦР гепатита С

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.

Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста. количественный ПЦР

Источник

[09-012]
HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]

3990 руб.

Исследование для выявления возбудителя гепатита C (HCV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (РНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

РНК HCV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций РНК HCV, определяемых тест-системой: 150-1*10^8 МЕ/мл.

Синонимы русские

Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.

Синонимы английские

Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (HCV) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает печень. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто.

Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро – с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса (редко сопровождается желтухой). У 60-85 % инфицированных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Выявление РНК HCV свидетельствует о размножении вируса в организме и является методом диагностики заболевания. Генетический материал вируса можно обнаружить с помощью ПЦР через 10-12 дней после инфицирования – в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений.

Посредством ПЦР выявляют РНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита С и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки с учетом генотипа HCV позволяет контролировать проводимую терапию и прогнозировать течение болезни.

Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.

Для чего используется исследование?

Для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С».
Для прогнозирования течения вирусного гепатита С.
Для мониторинга противовирусной терапии и решения вопроса о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

При качественном обнаружении РНК вируса гепатита С.
При остром и хроническом вирусном гепатите С.
При микст-гепатитах.
При планировании, во время и после окончания противовирусной терапии.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (50 МЕ/мл).
От 150 до 3*10^4 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, низкая виремия.
От 3*10^4 до 8*10^5 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, средняя виремия.
Свыше 8*10^5 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена, высокая виремия.
> 1*10^8 МЕ/мл – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций РНК вируса гепатита С, определяемых тест-системой, составляет 150-1*10^8 МЕ/мл.

Важные замечания

Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.

Также рекомендуется

Anti-HCV, антитела, ИФА
Аnti-HCV, антитела
Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита
HCV, РНК [реал-тайм ПЦР]
HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
Фосфатаза щелочная общая
Альбумин в сыворотке
Билирубин общий
Холестерол общий
Тромбиновое время
Фибриноген
Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
Лейкоцитарная формула
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
Кишкун А.А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.:ООО МИА, 2006. – 471-476 с.
Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

Источник

Гепатит С часто протекает скрыто, без очевидных клинических проявлений. Чтобы определить наличие вируса в организме и поражение им печени требуется пройти соответствующее исследование — ПЦР количественный на гепатит С.

Что такое количественный ПЦР?

Количественный ПЦР — исследование крови или другой физиологической жидкости, которое позволяет определить количественную вирусную нагрузку на организм.

Заболевания, в зависимости от тяжести протекания, отражаются присутствием в крови определённого количества (мл на 1 см3) возбудителя инфекции. Каждый живой организм имеет в своём составе белки, рибонуклеиновую (РНК) и дезоксирибонуклеиновую (ДНК) кислоты.

Каждый вирус имеет характерные только для него РНК, ДНК, белки. Суть метода полимеразной цепной реакции в том, что он указывает количество РНК конкретного организма (например, вируса определённого генотипа) в 1 мл жидкости. Таким образом, выясняется степень и тяжесть заболевания.

При гепатите С, количественный ПЦР показывает сколько в исследуемом материале РНК вируса. Предварительно проводят качественный анализ, выясняя его наличие.

Из всех существующих способов определения возбудителя, а также его количества, полимеразная цепная реакция — наиболее точный метод. Он призван обнаружить сам вредоносный организм, а не последствия его пребывания (антитела).

Когда и кому необходимо сдавать количественный ПЦР на гепатит С?

Терапия любого заболевания допустима только после установления точного диагноза. Врач сбирает анамнез, оценивает клинические проявления недомогания, а также назначает дополнительные лабораторные обследования.

Прежде чем доктор поставит диагноз, подберёт лечение, необходимо количественное определение РНК вируса гепатита С. Этот анализ назначается не всем пациентам, а при конкретных показаниях:

контакт с больным гепатитом С;
симптомы заболевания печени;
клинические проявления цирроза;
в биохимическом анализе крови показатели активности АЛТ, АСТ выше нормы;
подозрение на инфицирование гепатитом С;
выявлены антитела к HCV при иммуноферментном исследовании крови;
уточнение диагноза;
определение вирусной нагрузки, чтобы доктор мог выбрать тактику, правильно составить схему лечения;
контроль эффективности проводимой терапии в динамике (1, 4, 12, 24 недели после начала лечения);
динамика протекания заболевания;
при подозрении на смешанные поражения железы;
по окончании лечения гепатита для периодической проверки, чтобы исключить рецидив.

Как проходит обследование?

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

Расшифровка результатов (таблица)

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

норма количественного ПЦР при гепатит С;
полученный результат;
другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель	Интерпретация
Отрицательный	РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл	Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл	Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл	Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более	Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Возможны ли ошибки при количественном ПЦР на гепатит С?

Любое лабораторное исследование может иметь погрешность, если не будут соблюдены условия его проведения на всех этапах (от подготовки к процедуре до интерпретации результатов). Количественная полимеразная цепная реакция – один из наиболее достоверных методов определения вирусной нагрузки. Но при нарушении методики она может давать ошибочные результаты, так как присутствует человеческий фактор.

Чтобы максимально избежать ложноположительных или неверных данных, требуется выполнять все необходимые требования диагностики:

Прежде чем проводить количественный ПЦР рекомендуется провести иммунологическое исследование крови на выявление антител к гепатиту С. Кроме этого, требуется определить генотип вируса.
Пациенту важно подготовиться к сдаче анализов в соответствии с рекомендациями. Чтобы уменьшить вероятность ошибки в тесте, надо сообщить лаборанту о приёме лекарств (если такой момент имеет место). На прохождение ПЦР влияет употребление запрещённой пищи, стресс, вредные привычки, физические нагрузки, различные заболевания.
Лаборант, который обрабатывает образец биологического материала должен быть компетентен, знать методику проведения количественного ПЦР, а также работу оборудования. Правильная идентификация, подсчёт копий – основа верного результата
Качество, способ, сроки хранения реактивов должны соответствовать заявленным требованиям.
Соблюдение температурного режима на всех этапах реакции обязательно.

Правила и рекомендации по подготовке, сбору материала, проведения количественного ПЦР необходимо соблюдать для достижения 100% точности полученного результата. Ошибочные данные приводят к неправильному выбору тактики лечения и неэффективности терапии.

Что делать, если наличие РНК вируса подтвердилось?

При подозрении на инфицирование гепатитом С надо обязательно проконсультироваться с врачом. Если проведена диагностика, а ПЦР положительная или её количественные показатели говорят о наличии вирусной нагрузки, это однозначно повод безотлагательно посетить медучреждение.

Доктор, расшифровав результаты анализов, назначит лечение. Правильно выбранные лекарства, техника терапии, своевременное начало приёма медикаментов помогут избежать патологических изменений структуры и работы печени.

Гепатит С — тяжёлое вирусное заболевание, которое может привести к необратимым последствиям для человека. Ранняя, точная диагностика (количественный ПЦР) даёт возможность увеличить вероятность выздоровления в несколько раз.

Источник