Кровь на пцр гепатит с натощак

Гепатит С – заболевание, которое долгое время протекает без видимых признаков, а на поздней стадии приводит к тяжелым, нередко необратимым последствиям. Чтобы подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в организме, назначают различные виды анализов – ПЦР, ИФА, а также иные исследования. Все их объединяет биологический материал – венозная кровь. Не существует строгих правил подготовки к анализу на гепатит С, но есть общие рекомендации, которых следует придерживаться, чтобы получить предельно достоверный результат. 

Правила подготовки за 3-5 дней

К анализу на гепатит С готовятся поэтапно в течение нескольких суток. В этот промежуток желательно исключить факторы, которые могут повлиять на физиологическое состояние, а также биохимические, гормональные и гематологические показатели. 

Питание

Сдача крови на гепатит С обычно проводится в период с 8 до 11 утра натощак. Время выбрано для того, чтобы между процедурой и последним приемом пищи прошло не меньше 8 и не больше 14 часов.

Если человек принимает пищу в этот промежуток, результаты исследования будут искажены:

• продукты с содержанием сахаров вызывают колебание глюкозы;
• жирная пища провоцирует изменение мутности проб крови, повышает холестерин, калий, щелочную фосфатазу и триацилглицериды;
• томаты, бананы, орехи повышают показатели серотонина;
• кофе и чай вызывают скачок кортизола, изменение показателей эритроцитов и лейкоцитов, глюкозы.

Если период голода продолжается более 14 часов, анализы дадут результат, который невозможно будет сопоставить со значением нормы.

За сутки до исследования нужно отказаться от жирной и чрезмерно сладкой пищи.

Питание должно соответствовать обычному режиму. Для ужина накануне сдачи подойдет нежирный творог, диетическое мясо птицы, каши на воде, яблоки, макароны из твердых сортов пшеницы, яйца, хлеб, нежирная рыба, суп на легком овощном бульоне. 

Ограничения не касаются чистой питьевой воды. Ее можно употреблять в привычном режиме.

Ограничение физической активности

Накануне анализа крови на гепатит С рекомендуется отказаться от физических перегрузок (в том числе, от секса), поскольку это вызывает гормональные и биохимические перестройки в организме. Активные нагрузки влияют на следующие показатели:

• ферменты (креатинфосфокиназа, альдолаза, аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа);
• гормоны (тестостерон, лютеинизирующий гормон, андростендион).

За сутки до исследования на гепатит желательно отказаться от посещения бассейна и тренажерного зала.

Алкоголь

За 3-5 дней до анализа надо исключить алкоголь. Он оказывает следующее влияние на показатели крови:

• снижает концентрацию эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов;
• повышает вязкость крови и скорость оседания эритроцитов;
• угнетает функцию печени и поджелудочной железы, за счет чего уровень сахара в лабораторных показателях снижается;
• повышает образование молочной и уксусной кислоты;
• повышает содержание азотистых веществ из-за усиленного распада белка;
• вызывает сгущение крови и повышает ее свертываемость;
• понижает концентрацию антител, создает картину, которая соответствует вирусному гепатиту и прочим инфекциям, аллергии, злокачественным опухолям, может вызвать ложноположительный результат;
• снижает выработку гормонов щитовидной железы (Т3 и Т4) и надпочечников (кортизол, альдостерон, андрогенный гормон ДЭА, норадреналин).

Медикаменты

Прием лекарств – самый надежный способ исказить результаты анализа на гепатит и прочих лабораторных показателей. Препараты оказывают физико-химическое и фармакологическое влияние.

Физико-химическое, или прямое, влияние выражается в том, что действующие вещества вмешиваются в сам ход анализа. Например, тетрациклин, хинидин и другие препараты обладают свойствами флюоресценции. Витамины А и В2 повышают оптическую плотность раствора и тем самым искажают показатели билирубина.

Биологическое, или опосредованное, влияние выражается в том, что лекарства связываются с белками, повышают или подавляют их синтез, оказывают побочное действие на разные органы и системы, вызывают токсический эффект при передозировке, а также накапливаются в тканях. Их прием накануне анализа может спровоцировать ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Такой эффект заметен при приеме седативных, снотворных, психотропных и других препаратов.

Лаборатории рекомендуют перед анализом прекратить прием лекарств и выждать примерно 4-5 периодов полувыведения препарата. В среднем перерыв составляет около 3 суток. После анализа прием препаратов возобновляется.

Если лекарства жизненно необходимы и их нельзя отменить, предупредите лечащего врача, чтобы тот учел погрешности, вносимые препаратом.

Что еще может повлиять на точность анализа

Биохимические свойства крови изменяются под действием самых разных факторов:

1. Курение. Изменяет секрецию некоторых биологически активных веществ. Рекомендуется отказ минимум за 60 мин. до анализа.
2. Инструментальные обследования, например, ректальные, биопсия, МРТ, УЗИ, рентген и т.д. Нужен недельный перерыв между процедурой и анализом.
3. Тепловые процедуры. Требуется суточный перерыв перед сдачей крови на анализ на гепатит С и приемом бани или сауны.
4. Менструации у женщин. Вызывают колебания гормональных показателей.
5. Диета. Скудное питание провоцирует скачок билирубина. Рекомендуется есть в привычном режиме, но исключить жирную пищу.

Эмоциональное состояние оказывает непосредственное влияние на на показатели. При психологическом напряжении повышается уровень гормонов, альбумина, глюкозы, холестерина, фибриногена. Чтобы справиться с невольным волнением, стоит прийти в лабораторию за 10-20 минут до взятия проб и немного отдохнуть. Тогда влияние факторов стресса будет минимальным.

Особенности забора крови

Для анализа на гепатит С подходит только венозная кровь. Взятие материала из пальца не практикуется: если конечности холодные или отекшие либо в них нарушено кровообращение, результат будет недостоверным.

Лаборант проводит пункцию вены стерильной иглой в локтевом сгибе. Если это по каким-либо причинам невозможно, прокол делается в венах кистей рук или берется сосуд выше большого пальца руки. У детей забор может быть выполнен из яремной, лобной или височной вены. При наличии шрама или гематомы в точке забора выбирается другое место.

Анализ на гепатит может проходить как в лаборатории, так и дома. Чтобы сэкономить время или исключить фактор волнения, следует поинтересоваться, выполняет ли лаборатория выездные исследования, и по возможности сдать кровь дома.

Анализ крови на гепатит проводится натощак. Чистить зубы или воспользоваться жевательной резинкой лучше после диагностики, так как это провоцирует скачок сахара. Перед пункцией исключите резкие движения.

Перед непосредственной сдачей необходимо несколько минут посидеть, восстановить глубокое дыхание, успокоиться.

Повторный анализ на гепатит C следует сдать в тех же условиях, что и в предыдущий раз (та же лаборатория, аналогичное время, забор из той же вены). Если анализ сделан в разных лабораториях и с разной подготовкой, это не покажет результат в динамике.

Когда будут готовы результаты

На продолжительность исследования влияет не только методика, но и расположение лаборатории. Например, если образцы отправляются в соседний крупный город, где проводится исследование, то результат задержится. В среднем диагностика гепатита выполняется в следующие сроки:

• определение билирубина, АСТ, АЛТ, ГГТ – 1 день;
• ПЦР количественный и генотипирование – 1 день;
• антитела IgM к белкам вируса гепатита С – 2 дня;
• ПЦР в качественном формате, ультрачувствительный тест – 4 дня;
• иммуноблот рекомбинантный, антитела к вирусу гепатита С, IgG – 5 дней;
• ПЦР с количественным выявлением РНК вируса в режиме реального времени – 5 дней;
• выявление РНК гепатита С в плазме крови у пациентов с хронической инфекцией – 10 дней.

Если лаборатория находится не в клинике, где берется анализ, то результат исследования приходит с задержкой. 

ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.

Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг. 

При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.

В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами. 

Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:

• Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
• РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР. 
• Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры. 
• Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции. 
• Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus). 

При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов. 

Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:

1. Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня. 
2. Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц. 
3. Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов. 

Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами. 

Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции. 

Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).

ПЦР – самый точный анализ крови на гепатит С

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения. 

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

• общий анализ крови и мочи;
• биохимия крови;
• исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
• анализ на ВИЧ;
• флюорография;
• иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий). 

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа. 

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time. 

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С. 

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования. 

Виды: качественный, количественный и генотипирование

При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.

В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.

Существуют следующие разновидности ПЦР:

1. Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК. 
2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР. 
3. Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР. 

При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование). 

Показания к проведению лабораторного теста

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

• в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
• при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
• при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
• на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
• пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
• при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
• при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
• при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием. 

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

Где сдать анализ

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови. 

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Как правильно сдавать кровь

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях. 

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы. 

Сколько по времени делается исследование?

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры. 

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями. 

Расшифровка результатов

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

• беременность;
• перенесенный в острой форме гепатит С;
• пройденный курс лечения от HCV;
• наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Качественный анализ

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс. 

Количественный тест

Количественный анализ методом ПЦР проводится после подтверждения диагноза и его расшифровка важна для определения тактики лечения. В зависимости от концентрации частиц возбудителя гепатита С выделяют несколько степеней вирусной нагрузки: средняя, высокая и низкая. Чем больше показатель, тем тяжелее протекает инфекция и сложнее терапия. В норме вирусная РНК отсутствует в крови.

Генотипирование

Многие лаборатории проводят генотипирование в комплексе с количественной ПЦР, что позволяет сэкономить. Подобное исследование делают только один раз, перед началом лечения. Обычно выполняют анализ на один из четырех наиболее распространенных генотипов (1, 2, 3 или 4). Одновременно определяют и подтип HCV. Генотипирование на 5 и 6 подвид гепатита С возможно не в каждой лаборатории. 

Плюсы ПЦР диагностики

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

• высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
• простоте забора биоматериала;
• быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное исследование необходимо для оценки эффективности противовирусной терапии. Основная цель лечения – достижение нормы анализов (т. е. неопределяемого уровня РНК HCV) на 4, 12 или 24 неделе противовирусного курса и сохранение этого результата. 

Стоимость

Стоимость анализа ПЦР колеблется в зависимости от региона. Так, в Москве цены выше. Качественная ПЦР обойдется в 600–800 рублей, количественная – в 2200–3000 рублей, генотипирование – от 1000 рублей. Узнать точно, сколько стоит конкретное исследование, можно непосредственно в лаборатории, на сайте медицинской организации или по телефону.