Лабораторная диагностика кишечных инфекций микробиология

Цель. Изучить
особенности этиологии, эпидемиологии
и патогенеза кишечных инфекций. Овладеть
навыками оценки результатов лабораторной
диагностики кишечных инфекций.

Теоретическая справка

Семейство
Enterobactericeaeвключает 12
родов:Escherichia,Salmonella,Shigellaи др. бактерии этого
семейства имеют общие морфологические
и физиологические свойства: все они
грамотрицательные палочки, без спор,
неприхотливы к питательным средам,
факультативные анаэробы, имеют
многочисленные сахаролитические,
протеолитические ферменты. Антигенное
строение служит одним из существенных
критериев, на которых основывается
классификация, а так же идентификация
энтеробактерий. Различают три типа
антигенов: О-соматический, у некоторых
Н-жгутиковый, К-антигены, у энтеробактерий
обнаружены общие антигены. Один них –
антиген Кунига – связан с ЛПС.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Цель. Изучить
классификацию и особенности патогенеза
эшерихиозов. Овладеть методами оценки
результатов лабораторного исследования
для подтверждения диагнозов эшерихиозов.
Научиться практически решать вопросы
по использованию эубиотиков для коррекции
микрофлоры кишечника.

Теоретическая
справка

Кишечная
палочка была впервые выделена из
кишечника ребенка и определена как
бактерия–коменсал. Установлено, что
она может вызывать аутоинфекции на
фоне снижения резистентности
макроорганизма. По мере совершенствования
бактериологических методов диагностики
были выделены патогенные варианты E.coli, попадающие в организм
фекально-оральным путем. Наиболее
восприимчивы к этим инфекциям
новорожденные, так как через плаценту
не проходятIgM,IgA,
обусловливающих защиту при кишечных
инфекциях. В женском грудном молоке эти
иммуноглобулины содержатся в титрах
1:8-1:128. в течение 12-18 месяцев ребенок
получающий грудное молоко, более устойчив
к этим инфекциям.

Патогенные
варианты E.coliделятся на пять категорий по О-антигену:

1.Энтеропатогенные
(ЭПКП): 0111, 055, 0126.

2.Энтероинвазивные
(ЭИКП): 0152, 0124, 0144.

3.Этеротоксигенные
(ЭТКП): 0128, 085, 0148.

4.Энтерогеморрагические
(ЭГКП): 0157, 026, 0145.

5.Энтероадгезивные
(ЭАГКП) (структурная основа пока
неизвестна).

В лабораторной
диагностике эшерихиозов используется
первый принцип диагностики: обнаружение
возбудителя – метод бактериологиеский.

Выбор
исследуемого материала — испражнений
– определен локализацией патологического
процесса в кишечнике. Посев производят
на среду Левина или на среду ЭНДО –
темно-красные колонии с металлическим
блеском. Для выявления патогенных
вариантов кишечных палочек учитывают
антигенное строение этих микроорганизмов:
О-, К- и Н-антигены. Агглютинация с
ОК-сывороткой материала из колонии
позволяет определить наличие О-антигена,
свидетельствующего о патогенном варианте
этих бактерий. В то же время антиген
К(В) обусловливает О-инаглютинабельность
микроорганизмов, а о серогруппе эшерихий
судят по О-антигенам. Разрушение
термолабильных К- и Н-антигенов позволяет
определить принадлежность выделенных
бактерий к той или иной серогруппе.

Самостоятельное практическое задание Задание 1

Цель.Освоить бактериологический метод
диагностики эшерихиозов.

Задача 1а.

В инфекционную
больницу поступил двухмесячный ребенок
с высокой температурой, частым жидким
стулом. Предварительный диагноз
«Колиэнтерит». Проведите лабораторное
исследование для диагностики заболевания,
оформите протокол и ответ лечащему
врачу.

Задача 1б.

В инфекционную
больницу поступила больная с жалобами
на высокую температуру, жидкий стул со
слизью, рвоту. Предварительный диагноз:
«Дизентерия? Эшерихиоз?» Бактериологический
метод не подтвердил наличия дизентерии.
Проведите аналогичное исследование
для подтверждения возможного диагноза
эшерихиоза. Оформите протокол и ответ
лечащему врачу.

Методика.

Бактериологический
метод диагностики.

1-й этап– посев материала.

Посеять с
помощью петли 1-2 капли исследуемого
материала методом механического
разобщения микробов на среду Эндо. Чашку
поместить в термостат на 24 часа.

2-й этап– выделение чистой культуры.

Изучить
колонии, выросшие на среде Эндо: колонии
кишечных палочек темно-красного цвета
с металлическим блеском. Для дифференциации
патогенных кишечных палочек от
непатогенных поставить на стекле реакцию
агглютинации выросших колоний со смесью
ОК-сывороток. Отсеять колонию, дающую
положительную реакцию агглютинации,
на трехсахарный агар (Олькеницкого,
Клиглера) для выделения чистой культуры.
Поместить посев в термостат на 24 часа.

3-й этап
идентификация выделенной чистой
культуры:

а) по морфологии

б) биохимическим
свойствам

в) антигенной
структуре

Вывод

Задание 2

Цель. Изучить
состав элективных и дифференциально-диагностических
сред для культивирования микроорганизмов
кишечно-тифозной и дизентерийной групп.
Оформить протокол.

Методика.

Используя
аннотации к питательным средам, внести
в протокол описание сред, применяемых
для диагностики кишечных инфекций.

Цель…

Задание 3

Цель. Изучить
препараты для коррекции микрофлоры
кишечника и используемые при лечении
эшерихиозов. Изучить специфические
препараты для определения серогруппы
патогенных кишечных палочек.

Методика.

Используя
аннотации к препаратам по теме:
«Микробиология эшерихиозов», внести в
протокол перечень эубиотиков, а так же
описание диагностических сывороток,
применяемых при бактериологическом
методе диагностики.

Протокол
исследования.

Цель…

Аннотация: к
препаратам по теме «Микробиология
эшерихиозов»

Лечебные
препараты

Для лечения
используются препараты, обладающие
антагонистическими свойствами в
отношении патогенных серогрупп кишечных
палочек и дизентерийных бактерий, либо
живые вирусы бактерий – бактериофаги.

1.Колибактерин
сухой и молочный. Содержит живую культуру
антагонистически активного штамма
кишечной палочки М17. Молочный колибактерин
готовится путем закваски кипяченого
молока растворенным сухим колибактерином.
Колибактерин применяется для лечения
следующих заболеваний у детей и взрослых:
хронические колиты различной этиологии,
в том числе постдизентерийные;
неспецифический язвенный колит;
дисбактериозы, возникающие в результате
применения антибиотиков, сульфаниламидных
препаратов и других причин; санация
выздоравливающих после дизентерии.
Колибактерин применяется с 6-месячного
возраста. Лечение колибактерином следует
применять вместе с применением витаминов.
К аналогичным препаратам относятся
бифидумбактерин, бификол, лактобактерин.

2. Бифидумбактерин
готовиться из облигатных для человека
анаэробных бифидобактерий.

3. Бификол
комплексный препарат из №1 и №2

4. Лактобактерин
содержит облигатные для человека
молочнокислые бактерии, как бифидумбактерин,
антагонистически активные к патогенным
и условно-патогенным энтеробактериям.

5. Бактериофаг
коли – смесь очищенных стерильных
фильтратов фаголизатов колибактерий
наиболее распространенных серогрупп:
018, 020, 026, 033, 044, 075, 0114, 018, 0142, 0144 и др.
применяют местно на пораженный участок,
в рану, в полость при абсцессах и при
заболевании внутренних органов.

6. Бактериофаг
коли-протейный – смесь стерильных
фильтратов фаголизатов энтеропатогенных
эшерихий, активных в отношении наиболее
распространенных серогрупп: 0111, 020, 026,
033, 044, 055, 0119, 0124, 0125, 0127, 0151 и др. и протея
видов мирабилис и вульгарис. Применяют
для лечения и профилактики дисбактериозов,
инфекций коли-протейной этиологии.

Диагностические
препараты

Агглютинирующие
ОК-сыворотки против энтеропатогенных
серогрупп кишечной палочки: ОК-коли-сыворотка
026, ОК-коли-сыворотка 055, ОК-коли-сыворотка
0111 и др. Получены путем гипериммунизации
кроликов взвесью бактерий соответствующей
серогруппы E.coli.
применяются для постановки реакции
агглютинации в целях определения
серологической группы кишечных палочек.
При учете реакции обратить внимание на
титр сыворотки. Реакция считается
специфической, если она продолжительна
в разведении сыворотки не меньше, чем
половина её титра.

Основным методом
лабораторной диагностики кишечных
инфекций является бактериологический,
основанный на выделении чистой культуры
возбудителя и ее идентификации. Для
идентификации бактерий кишечной группы
ис­пользуют изучение их ферментативной
активности и антигенной структуры.

Этапы бактериологического исследования

1 день.
Посев исследуемых материалов на
дифференциально-диагностические среды
(Эндо, Плоскирева, Левина).

Для выделения
гемокультуры сальмонелл производят
посев крови на 10-20% желчный бульон или
на среду Рапопорт. Соотношение крови и
среды должно составлять 1:10. Инкубация
18-24 часа при температуре 37ºС

2 день.
Просмотр и описание колоний. Микроскопия
материала из колоний и окраска по Граму.
Пересев материала из колоний на скошенный
МПА, среду Ресселя для накопления чистой
культуры. Со среды Рапопорт культуру
пересевают на среду Эндо и Ресселя.

В случае диффузного
помутнения и изменения цвета среды
Рапопорта (она приобретает красный
цвет) за счет ферментации глюкозы с
образованием кислоты делают предварительный
вывод о наличии возбудителей брюшного
тифа; при наличии кроме этих признаков
газообразования в поплавке — возбудителей
паратифов.

Постановка
ориентировочной реакции агглюцинации
на стекле с материалом из отдельных
колоний и смесью эшерихиозных сывороток,
со смесью дизентерийных сывороток, со
смесью сывороток против сальмонелл,
содержащих антитела против наиболее
распространенных сероваров возбудителей
кишечных инфекций. При положительном
результате проводят реакцию агглютинации
с моновалентными агглютинирующими
сыворотками на стекле.

3 день.
Проверка чистоты выделенной культуры.
Учет изменения цвета среды Ресселя.
Постановка с чистыми культурами реакции
агглютинации на стекле с поливалентными
сыворотками, затем с видовыми и типовыми
сыворотками. Постановка развернутой
реакции агглютинации. Пересев культур
на среды для определения ферментативной
активности (среды Гисса).

4 день.
Учет результатов реакции агглютинации.

Учет роста на
средах Гисса.

Окончательный
ответ о виде и сероваре дают на основании
результатов реакции агглютинации и
«пестрого» ряда.

Возбудители
эшерихиозов ферментируют глюкозу и
лактозу с образованием кислоты и газа,
выделяют сероводород.

Шигеллы ферментируют
углеводы с образованием кислоты.
Возбудители сальмонеллезов не ферментируют
лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу
маннит и мальтозу с образованием кислоты
и газа, не образуют индол и за неболь­шим
исключением выделяют сероводород.

Дифференциально-диагностическая
таблица кишечно-тифозной группы