Ложноположительный гепатит с при герпесе
Специфические лабораторные методы применяются для диагностики гепатита С. К ним относятся иммунохимические, молекулярно-биологические анализы распознавания РНК-содержащего вируса (ВГС).
Интерпретация полученных данных зависит от:
- Чувствительности применяемого метода. Это способ определения минимального компонента в величине разведения — антител, антигенов, нуклеиновых кислот. Выражается в количественных единицах — титрах.
- Специфичности конкретного метода, способного выявить ВГС и антитела к нему
Цель работника лаборатории заключается в разграничении ложноположительных анализов на гепатит С и обнаружение вируса и антител к нему.
Вы знаете, кому нужно сдавать анализы на гепатит С?
ДаНет, расскажите
Анализы на гепатит С
Постановка диагноза HСV-инфекции происходит с помощью вирусологических (ПЦР) и серологических тестов (ИФА).Симптоматика острой фазы заболевания практически отсутствует, но уже в первые 7-14 дней после инфицирования диагностировать этот период гепатита С можно при обнаружении РНК методом ПЦР.
Применение ИФА в этой стадии не результативно, так как антитела вырабатываются через несколько недель. Изобретение тестовых систем 3 поколения способствует определению IgM в ранние сроки. Метод используют в лабораториях, но он не отвечает целям полной диагностики и оценки эффективности лечения.
ИФА
Метод иммуноферментного анализа разработан в трех вариантах: иммуноферментный, радиоиммунный, флюороиммунный. Востребован твердофазный ИФА. В постановке реакции он прост, высокочувствителен и относительно не дорог.
В зависимости от агента, который определяют – антиген или антитело, ИФА представляет разную ценность в диагностике. Верные результаты получаются при выявлении вирусных антигенов. Это также не является критерием постановки диагноза, так как часть антигенов расположена только в печеночной ткани и в крови обнаружить их не возможно. Поэтому нужно применять ИФА с определением сразу двух видов вирусных антигенов.
При обнаружении антител к ВГС нельзя говорить о присутствии вируса. Выявлены случаи когда анализ ИФА оказывается ложноположительным у обследуемого. Это указывает на иммунологическую память ранее присутствующего вируса в организме.
В проведенных исследованиях 957 проб с положительным ИФА потребовались другие арбитражные методы — ПЦР. В итоге у 36,6% РНК не обнаружилось, что свидетельствует о получении ложноположительного ответа.
Разработанные за последнее десятилетие новые тестовые системы способны одновременно определять антитела и антигены к вирусу гепатита С.
ПЦР
Этот метод детекции — полимеразная цепная реакция, создан для обнаружения вирусной РНК в образце сыворотки крови. Исследование заключается в многоцикловом процессе, который состоит из переходящих друг в друга этапов.
С помощью применения обратной транскриптазы (фермента) образуются молекулы ДНК вируса гепатита С. Итоговый результат — выделение вирусной рибонуклеиновой кислоты. Количественный вариант ПЦР используют для определения концентрации РНК. Исследуется количество копий в 1 мл. Выражается в логарифмических выражениях (log10).
Для прогнозирования эффективности лечения важным является выяснение принадлежности гепатита С к генотипу. В проведении генотипирования используют типоспецифические праймеры, в методах основанных на методике ПЦР.
Чувствительным методом определения нуклеиновых кислот считается «ПЦР в реальном времени». С помощью этого метода получают результат в ходе реакции даже при малом количестве нуклеиновых кислот. Полученные показатели с высокой точностью определяют уровень вирусной нагрузки.
Может ли анализ на гепатит С быть ошибочным?
На сегодня по-прежнему остается шанс получения ложноположительного результата на наличие анти-ВГС. При определенных обстоятельствах искаженные данные получаются при проведении ИФА и ПЦР.
Доля ошибочных ложноположительных результатов составляет 10-20%.
Для уточнения нахождения вируса в крови обследуемого человека применяют метод обнаружения РНК совместно с другими чувствительными методами. Однако получение отрицательного ответа не свидетельствует о ложноположительном ответе. В случаях полного выздоровления пациентов (10-15%) в крови возможно присутствие анти-ВГС.
Получение ложноположительного результата зависит от естественных причин:
- появление мутантных штаммов;
- репродукции антител и антигенов возбудителя.
Причины ложноположительного анализа
Ошибочный анализ регистрируется в виде ложнонегативных и ложнопозитивных результатов.
Ложноположительный ответ получается при:
- смешении исследуемого образца с предыдущим через лабораторное оборудование или аэрозоли;
- соединение между пробами при работе с реакционной смесью.
Ложноотрицательные ответы определения РНК получаются при:
- нарушениях правил перевозки клинических образцов;
- несоблюдении теплового режима образцов крови;
- распад РНК при подготовке к пробе;
- поэтапное прохождение ПЦР нарушает гепарин и высокий уровень криоглобулинов;
- присутствие в сыворотке белковых, химических субстанций.
Распространенные причины ошибок анализов связаны с:
- иммунодефицитными состояниями;
- онкологией;
- аутоиммунными заболеваниями (синдром Рейно, полинейропатия, узелковый периартериит и другие);
- поражениями системы крови (тромбоцитопения, гемолитическая анемия);
- глистными инвазиями;
- сифилисом.
Человеческий фактор
Ошибка в анализе возможна с учетом действия работников, участвующих в процессе, с процедурного кабинета и до клинической лаборатории.
Человеческий фактор возможен при:
- нарушении нумерации пробирок в момент забора крови;
- указании ошибочного ответа;
- неправильных действиях лаборанта в ходе подготовки образца;
- проведении пробы в условиях повышенной комнатной температуры;
- неопытности молодого специалиста;
- изготовлении некачественных диагностических препаратов.
Моментом, который способен искажать данные исследований является алкоголь. Это своеобразный антидепрессант, который воздействует на диагностику гепатита С. У пьющих людей с хронической формой выявляться HCV РНК при отсутствии антител и наоборот.
Ложноположительный результат у беременных
Установленный гепатит С ложноположительный у беременной женщины может быть связан с физиологическими изменениями происходящими в организме в период вынашивания плода:
- выработку характерных гестационному периоду белков;
- полную перестройку гормональной системы;
- повышение концентрации противовоспалительных цитокининов;
- изменение биохимических показателей;
- присоединение инфекций бактериального и вирусного генеза.
Инфекционные заболевания
Инфекционные заболевания протекают с выделением антител (защитные факторы крови) в ответ на антигены (болезнетворные возбудители). Работа иммунитета человека заключается в выработке иммуноглобулинов в ответ на проникновение чужеродных агентов.
Одновременное выделение иммуноглобулинов при инфекционном процессе в сочетании с гепатитом С искажает результаты анализов ИФА, что ведет к возрастанию количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Инфекции, которые приводят к ошибке:
- токсоплазмоз;
- цитомегаловирус;
- передающиеся половым путем (уреаплазма, микоплазма, трихомоноз).
Лабораторная диагностика гепатита С при коинфекции с ВИЧ затруднена. Ложноотрицательный ИФА по выявлению анти-ВГС связан с формированием иммунодефицита у человека. Поэтому всегда проводится исследование РНК методом ПЦР.
Как избежать ложноположительного результата?
Ошибочный диагноз гепатита сводят к минимуму благодаря:
- качественному обучению лабораторных работников и прохождению курсов повышения квалификации;
- проведению этапов ПЦР в изолированных зонах;
- применению автоматических пипеток для каждого этапа реакции;
- проведение дополнительных анализов для уточнения.
Исключить ложноположительный результат возможно при проведении дополнительных (supplemental) тестов. Это препараты, созданные специально для определения антител к конкретным белкам, кодированных разными зонами вирусной РНК.
Внедрение новых методик лабораторного исследования вирусного гепатита С обеспечивает раннюю диагностику заболевания и сводит к минимуму появление ложных результатов. Это мера способствует своевременно начатому лечению, которое заканчивается выздоровлением.
( 1 оценка, среднее 5 из 5 )
Источник
Медицинский эксперт статьи
х
Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.
У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.
Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.
Гепатит, вызванный вирусом простого герпеса типа 1 и 2 (HSV 1 и HSV 2) — заболевание, обусловленное вирусами простого герпеса, которыми плод инфицируется от матери с заболеванием, вызванным данными вирусами.
[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]
Распространение
Инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (HSV), относится к числу повсеместно и широко распространенных заболеваний.
По данным ВОЗ, данная инфекция занимает второе место среди вирусных инфекций после гриппа. В последние годы выросла роль герпетической инфекции как маркера ВИЧ-инфекции.
HSV — это популяция, состоящая из вирусов простого герпеса типа 1 и 2 (генитального). Например, в США 30 млн чел. страдают рецидивами генитального герпеса.
Первичное заражение человека HSV происходит в детском возрасте и в подавляющем большинстве случаев протекает практически бессимптомно. Вирус после попадания в организм человека остается в нем пожизненно, принимая латентную форму персистенции. В стрессовых ситуациях (травмы, психические нарушения, болезни и др.) возможны клинические рецидивы инфекции в виде стоматита, герпеса кожи, генитального герпеса, офтальмогерпеса и поражения нервной системы.
К детородному возрасту (19-30 лет) 75-90% или даже 100% женщин инфицированы HSV. У беременных инфекция, обусловленная HSV 2, обнаруживается с частотой от 7 до 47%.
Причины и патогенез
Внутриутробное инфицирование эмбриона и плода связывают преимущественно с HSV 2 — на него приходится до 80% анте- и неонатальной инфекции, вызванной HSV. Активная герпетическая инфекция у матери после 32-й недели беременности приводит к инфицированию плода и новорожденного в 40-60% случаев. Высокий риск инфицирования плода HSV возникает, если у беременной с HSV-инфекцией имеются различные воспалительные процессы в генитальной сфере (хронический вульвовагинит, вялотекущий эндометрит), а также в анамнезе — спонтанные аборты.
Считается, что в большинстве случаев внутриутробная HSV-инфекция все же обусловлена бессимптомным выделением вируса герпеса у беременной. При этом у женщины даже нет упоминаний в анамнезе о герпетической инфекции.
Трансплацентарный путь служит основным при антенатальном инфицировании вирусами, в том числе HSV. В связи с этим персистентная форма инфекции у женщины определяет высокую вероятность инфицирования плода на протяжении всей беременности.
Рецидивирующий генитальный герпес с вирусемией во время беременности может стать причиной гибели плода в виде спонтанных абортов на ранних сроках беременности — в 30% случаев и причиной поздних выкидышей — в 50% случаев.
Инфицирование плода HSV в III триместре приводит к развитию инфекционного процесса с разнообразными клиническими проявлениями гипотрофии, менингоэнцефалита, пневмонии, пневмопатии, сепсиса, гепатита. Ребенок рождается с клинической картиной болезни. Однако известно, что при инфицировании HSV в антенатальном периоде дети могут родиться относительно здоровыми. В связи с этим возникает вопрос: почему при столь широком распространении инфекции у беременных поражение плода возникает редко или даже очень редко? Теоретически можно допустить, что заражение плода скорее всего возникает при первичной инфекции в процессе беременности или если первичное заражение плода происходит непосредственно в родах, или сразу после рождения ребенка. Иначе говоря, клиническая картина врожденного герпетического гепатита предположительно возникает у детей, рожденных от серонегативных матерей, инфицированных вирусами простого герпеса во время текущей беременности. Однако такое предположение входит в противоречие с существующим представлением о повсеместном обнаружении маркеров HSV-инфекции, начиная с раннего детского возраста. Эти вопросы нуждаются в дополнительном изучении.
[16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24], [25], [26], [27], [28], [29]
Морфология
В случаях антенатальной HSV-инфекции всегда обнаруживаю гея изменения в печени. При внутриутробной герпетической инфекции с синдромом гепатита описаны характерные гистологические признаки врожденного гепатита. При макроскопическом исследовании отмечается увеличение размеров печени. На разрезе ткань печени пестрая: на темно-коричневом фоне по всей поверхности выявляется множество желтовато-белых очажков диаметром 2-3 мм.
При микроскопическом исследовании в печени определяются очаги коагуляционного некроза, В центральной части очагов некроза отмечается глыбчатый распад, а по периферии — лимфоцитарная инфильтрация. Выявляются дискомплексация печеночных балок и дистрофические изменения в гепатоцитах. Характерным признаком герпетической инфекции служит наличие базофильных включений — телец Коудри, которые окрашены светлым венчиком. В строме печени, дольковой и междольковой соединительной ткани рас-полагаются очаговые лимфогистиоцитарные инфильтраты.
Симптомы гепатита, вызванного вирусом простого герпеса типа 1 и 2
Новорожденные с врожденным HSV-гепатитом в большинстве случаев появляются на свет доношенными, с нормальной массой и поступают в стационар в состоянии средней 1яжести, реже — в тяжелом состоянии. Проявления HSV-инфекции наблюдаются в виде пузырьковых высыпаний на губах, крыльях носа, небных дужках, на язычке и мягком небе на гиперемированном фоне в 33-71% случаев. Симптомы интоксикации выражены умеренно. Дети вялые, срыгивают, плохо сосут. Тяжелое состояние отмечается, как правило, у новорожденных с выраженным поражением ЦНС.
Желтушный синдром развивается в первые трое суток — от слабой степени до интенсивной; у отдельных детей при всех остальных признаках гепатита желтуха может отсутствовать.
У всех больных имеется гепатомегалия. При этом печень умеренной плотности, с гладкой поверхностью, с округлым или острым краем, выступает из подреберья на 3-5 см. Селезенка у большинства больных (60-70%) также увеличена.
Биохимические показатели варьируют. Активность печеночно-клеточных ферментов повышается в 2-5 раз, при этом показатели АЛТ и ACT составляют 80-450 ЕД/л. Уровень общего билирубина возрастает в 3-5 раз, у детей с синдромом холестаза — в 7-10 раз, при этом конъюгированной и неконъюгированной фракции — почти поровну. При синдроме холестаза показатели активности ЩФ и ГГТП увеличиваются в 2-3 раза по сравнению с нормой.
У детей с холестатической формой гепатита желтуха бывает выраженной, с зеленоватым оттенком; детей беспокоит зуд, они плоха спят. При этом манифестирует геморрагический синдром в виде экхимозов на коже, кровотечений из мест инъекций, кровавой рвоты. В ряде случаев герпетический гепатит может принять фульминантную форму, с тяжелыми клиническими и лабораторными проявлениями геморрагического синдрома и развитием комы.
При УЗИ у всех детей с врожденным герпетическим гепатитом отмечается повышенная эхоплотность паренхимы печени.
Большинство клиницистов отмечают, что у детей с врожденным герпетическим гепатитом бывает длительный субфебрилитет, наблюдаются увеличение в размерах нескольких групп лимфатических узлов и различные нарушения со стороны нервной системы (мышечная гипотония или гипертония, повышенная возбудимость, гипертензионный синдром и др.).
Варианты течения
Врожденный гепатит, обусловленный HSV-инфекцией, имеет острое течение. Желтуха, даже интенсивной выраженности, исчезает к 6-му месяцу жизни. Гепатомегалия сохраняется несколько месяцев. Показатели функциональных проб печени нормализуются ко 2-6-му месяцу диспротеинемия не отмечается. Хронического течения врожденного гепатита, вызванного вирусом простою герпеса, не наблюдается.
В ряде случаев гепатит может заканчиваться легально, как правило, при развитии фульминантной формы болезни.
В связи с различными нарушениями со стороны нервной системы, которые могут проявиться не только при рождении, но и в дальнейшем, дети находятся длительное время на учете у невропатолога.
Диагностика гепатита, вызванного вирусом простого герпеса типа 1 и 2
При рождении ребенка с врожденным гепатитом далеко не всегда ясно, какой этиологии поражение печени.
Необходимо исключать различные внутриутробные инфекции, сопровождающиеся синдромом гепатита. Это вирусный гепатит В, цитомегалия, хламидиоз, токсоплазмоз, септические бактериальные процессы. На диагноз HSV-инфекции ориентирует наличие группирующихся высыпаний на коже и слизистых оболочках у младенца; иногда при этом есть указания на активацию генитального и лабиального герпеса у матери во время беременности.
Современная специфическая диагностика HSV-инфекции основывается на положительных результатах детекции ДНК HSV в сыворотке крови и других биологических субстратах с помощью ПЦР а также на обнаружении специфических анти-HSV класса IgG в нарастающих титрах (более чем 4-кратный прирост).
[30], [31], [32], [33], [34], [35], [36], [37], [38]
Лечение гепатита, вызванного вирусом простого герпеса типа 1 и 2
В противовирусной терапии применяется виферон в суточной дозе 500 тыс. МЕ в течение 2-4 нед в комбинации с гепатопротекторами, например с фосфогливом. При холестатическом варианте гепатита назначаются урсофальк в каплях на 2-3 нед, сорбенты, фенобарбитал, 25% раствор магния сульфата.
Ацикловир применяется при сочетании гепатита с тяжелыми поражениями ЦНС из расчета 15 мг на 1 кг массы тела в сутки 7-10 сут, в зависимости от состояния ребенка. При необходимости проводится дезинтоксикационная инфузионная терапия. Местно обрабатываются герпетические высыпания.
Профилактика
Для предотвращения антенатального заражения плода при обнаружении активной герпетической инфекции у матери необходимо проводить не только местное лечение высыпаний, но и противовирусную терапию, например разрешенным для беременных препаратом интерферона альфа — вифероном в суточной дозе 1-2 млн МЕ в течение 2-3 нед при сроках гестации более 16 нед,
Вопрос о назначении парентеральных форм рекомбинантного интерферона альфа, а также противовирусных препаратов из группы ацикловира решается строго индивидуально, с учетом реального риска поражения плода.
На стадии разработки находится противогерпетическая вакцина.
Источник
