Молекулярный анализ крови при гепатите с
Вирусный гепатит С представляет серьезную медико-социальную проблему. Около 180 млн. человек в мире сегодня страдают этим заболеванием, 350 тысяч ежегодно умирает. Длительное скрытое (бессимптомное) течение заболевания приводит к запоздалой диагностике. Анализ на гепатит С проводится с целью диагностики заболевания, дифференциальной диагностики, с его помощью определяют ранее перенесенное заболевание «на ногах».
Исследование применяется у лиц с симптомами гепатита С, повышенным уровнем ферментов печени, при получении сведений о перенесенном ранее заболевании неуточненной этиологии, у лиц из групп риска и скрининговых исследованиях.
Диагностика гепатита С проводится в 2 этапа:
1 этап. Определение наличия в сыворотке крови антител к вирусу (анти HCV).
2 этап. При наличии анти HCV проводится тест на наличие РНК (рибонуклеиновой кислоты) методом ПЦР на гепатит С. Тест позволяет выявить фазу процесса — «активная/неактивная», решить вопрос о необходимости лечения. Известно, что около 30% инфицированных лиц, самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются. С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.
Степень поражения печени определяется с помощью биопсии или других инвазивных и неинвазивных тестов (например, фибротест). Степень стеатоза печени определяется с помощью стеатотеста. Во всех случаях диагностика гепатита С должна базироваться на данных эпидемиологического расследования, клинике заболевания и данных биохимического исследования крови.
Рис. 1. Тяжелые последствия вирусного поражения печени — напряженный асцит.
Анализ на гепатит С: анти HСV
Антитела к вирусам (анти HCV) являются специфическими маркерами инфицирования. В организме больного человека к белкам вируса (антигенам) вырабатываются специфические антитела — иммуноглобулины класса IgM и IgG (анти HCV IgM/IgG).
При получении положительного результата на антитела выполняется подтверждающий тест — определение суммарных антител к структурным и неструктурным белкам вируса. К структурным оболочечным белкам вируса Е1 и Е2 вырабатываются aнти HCV IgM, нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG), к 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG).
Для выявления антител к вирусу гепатита С используется иммуноферментный анализ (ИФА). Для подтверждения (+) результатов ИФА применяют подтверждающие тесты — RIBA (рекомбинатный иммуноблотинг), реже Inno-Lia (анализ синтетических пептидов).
Анализ на анти HCV IgM
- Антитела IgM появляются в сыворотке крови через 4 — 6 недель после инфицирования и быстро достигают максимума. По окончании острого процесса (через 5 — 6 мес.) их концентрация падает.
- Длительная регистрация наличия анти HCV IgM говорит о том, что гепатит С приобрел хроническое течение.
- Повышение уровня IgM в период хронического течения говорит о реактивации инфекционного процесса.
- Уровень иммуноглобулинов IgM позволяет проводить оценку эффективности лечения.
Анализ на анти HCV IgG
Антитела IgG появляются в сыворотке крови больного через 11 — 12 недель после инфицирования. На 5 — 6 месяце регистрируется пик концентрации. Далее антитела сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и период выздоровления.
Анализ на суммарные антитела к вирусу гепатита С
Суммарные антитела к вирусу (аnti HCV total) используются для диагностики «свежих» случаев заболевания. Суммарные антитела — это антитела нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG) и 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG) — aнти HCV NS3, aнти HCV NS4 и aнти HCV NS5.
Суммарные антитела к вирусу гепатита С появляются в сыворотке крови инфицируемого спустя 11 — 12 недель от начала инфицирования, достигают пика к 5 — 6 месяцу и сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и в течение 5 — 9 лет после периода выздоровления.
Каждый из видов антител имеет самостоятельное диагностическое значение:
- Анти HCV C (cor) являются основными показателями контакта с вирусами гепатита С.
- Анти HCV NS3 выявляются одними из первых в процессе сероконверсии (выработки антител в ответ на присутствие вируса), указывают на остроту инфекционного процесса и свидетельствуют о высокой вирусной нагрузке. С их помощью определяется гепатит С у больных, не подозревающих у себя наличие инфекции. Продолжительное нахождение анти HCV NS3 в сыворотке крови говорит о высоком риске хронизации процесса.
- Анти HCV NS4 говорят о том, что гепатит С имеет длительное течение. По уровню титров антител можно судить о степени поражения печени.
- Анти HCV NS5 указывают на наличие вирусной РНК. Их обнаружение в острый период является предвестником хронизации процесса. Высокие титры антител на фоне лечения говорят о том, что больной не отвечает на лечение.
- Анти HCV NS4 и анти HCV Данный вид антител появляются на поздних сроках развития гепатита. Их снижение указывает на формирование ремиссии инфекционного процесса. После излечения титры антител NS4 и NS5 снижаются в течение 8 — 10 лет. От повторного заражения этот вид антител не защищает.
Рис. 2. Макропрепарат. Цирроз печени — грозное осложнение вирусного гепатита С.
к содержанию ↑
Расшифровка анализа на гепатит С — анти HСV
Отсутствие антител к вирусу гепатита С обозначается термином «Норма». Однако это не всегда это обозначает отсутствие заболевания у человека. Так отсутствие антител в крови у инфицированного человека регистрируется до момента их появления в крови — в срок до 6-и месяцев с момента заражения (в среднем через 12 недель). Период отсутствия антител в крови инфицируемого называется «серологическим окном». Высокой специфичностью (до 99,7%) обладают тест-системы 3-го поколения (ELISA-3). Около 0,3% приходится на получение ложноположительных результатов.
Наличие анти HCV свидетельствуют о текущей инфицированности или перенесенной в прошлом инфекции.
- Обнаружение антител IgM и антител Corе IgG , нарастание титров антител Corе IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков острого гепатита говорит об остром периоде заболевания.
- Обнаружение антител IgM, анти HCV Corе IgG, анти HCV NS IgG и (+) результат ПЦР при наличии клинических и лабораторных признаков заболевания указывает на реактивацию хронического гепатита С.
- Обнаружение анти HCV Corе IgG и анти HCV NS IgG при отсутствии клинических и лабораторных признаков заболевания и отрицательном результате ПЦР говорит о наличии у больного хронического гепатита в латентной фазе.
Рис. 3. Макропрепарат печени. Первичный рак печени — грозное осложнение гепатита С.
к содержанию ↑
ПЦР на гепатит С
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является «золотым стандартом» диагностики вирусного гепатита С. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять генетический материал вирусов (РНК) даже если их в исследуемом материале единицы. ПЦР способна выявлять РНК вирусов задолго до появления антител в сыворотке крови, но не ранее чем с 5-го дня от момента инфицирования. При заболевании с помощью ПЦР РНК вирусов обнаруживаются не только в сыворотке крови, но и в биоптатах печени.
- Полимеразная цепная реакция позволяет определить наличие или отсутствие в крови вирусов гепатита С и решить вопрос о начале лечения. Известно, что до 30% больных самостоятельно избавляются от инфекции, так как имеют сильную иммунную систему и в лечении не нуждаются.
- С помощью ПЦР определяется генотип вируса. Разные генотипы по-разному реагируют на лечение.
- ПЦР применяется с целью контроля за эффективностью лечения.
- ПЦР применяется при отсутствии антител в крови, но при наличии весомых подозрений на заболевание (повышение уровня щелочной фосфатазы, общего билирубина, превышение в 2 раза печеночных ферментов АСТ и АЛТ).
- Анализ ПЦР на гепатит С используется с целью контроля над внутриутробной передачей вирусов гепатита.
к содержанию ↑
Вирусная нагрузка при гепатите С
С помощью анализа ПЦР возможно определить не только наличие РНК вирусов в крови — качественный анализ (обнаружено/не обнаружено), но и их количество — вирусную нагрузку (количество единиц вирусной РНК в 1 мл крови). Количественный показатель ПЦР применяется с целью контроля эффективности лечения.
Методы, применяющиеся для проведения ПЦР, обладают разной чувствительностью. В РФ согласно методическим рекомендациям 2014 года рекомендовано применять методики, обладающие чувствительностью 25 МЕ/мл и менее. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации по изучению печени 2015 года предлагается применять методики определения вирусной РНК, обладающих чувствительностью 15 МЕ/мл и менее.
В зависимости от чувствительности тест-системы больной получает тот или иной результат исследования:
- Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR составляет 600 МЕ/мл (анализатор старого поколения).
- Минимальная чувствительность анализатора COBAS AMPLICOR ВГС-TEST составляет 50 МЕ/мл, что составляет 100 копий в 1 мл.
- Минимальная чувствительность анализатора РеалБест РНК ВГС составляет 15 МЕ/мл, что составляет 38 копий в 1 мл (входит в группу современных тест-систем). Специфичность данных анализаторов составляет 100%. С их помощью выявляются РНК вирусов гепатита С субтипов 1а и 1b, 2а, 2b, 2c и 2i, 3, 4, 5а и 6.
При наличии копий РНК ниже порога чувствительности данного анализатора пациент получает ответ «не обнаружено».
Рис. 4. Пример анализа ПЦР (количественный тест). Определение вирусной нагрузки.
Интерпретация результатов анализа ПЦР на гепатит С
- Отсутствие РНК вируса указывает на отсутствие инфицирования.
- Отсутствие РНК в анализе на фоне наличия антител в крови указывает на исчезновение болезни под влиянием лечения или при самоизлечении.
- В ряде случаев вирус присутствует в крови, но в подпороговых уровнях, когда его концентрация не улавливается анализаторами. Такие больные остаются опасными в плане заражения.
- Выявление РНК вируса в течение 6 месяцев подряд у больных с острым гепатитом С говорит о том, что заболевание приняло хроническое течение.
- Снижение вирусной РНК в анализах на фоне лечения говорит об эффективности проводимой терапии и наоборот.
Рис. 5. Макропрепарат. Жировой гепатоз — одно из последствий заболевания.
к содержанию ↑
Основные биохимические анализы крови при гепатите С
Биохимические анализы крови помогают установить функциональное состояние многих органов и систем человека.
Анализ крови на печеночные ферменты АЛТ и АСТ
Печеночные ферменты синтезируются внутриклеточно. Они принимают участие в синтезе аминокислот. Их большое количество находится в клетках печени, сердца, почек и скелетной мускулатуры. При поражении органов (нарушение целостности клеточных мембран) ферменты поступают в кровь, где их уровень повышается. Повышенный уровень ферментов регистрируется при поражении (лизисе, разрушении) печеночных клеток, инфаркте миокарда и других заболеваниях. Чем выше уровень трансаминаз в сыворотке крови, тем больше клеток подверглось разрушению. АЛТ преобладают в клетках печени, АСТ — в клетках миокарда. При разрушении клеток печени уровень АЛТ повышается в 1,5 — 2 раза. При разрушении клеток миокарда уровень АСТ повышается в 8 — 10 раз.
При диагностике хронического вирусного гепатита необходимо обращать внимание на соотношение АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса). Превышение уровня АСТ над АЛТ говорит о поражении печеночных клеток.
- Норма АСТ для мужчин составляет до 41 ед./л, женщин — до 35 ед./л, детей старше 12 лет — до 45 ед./л.
- Норма АЛТ для мужчин составляет до 45 ед./л, женщин — до 34 ед./л, дети 12 лет и старше — до 39 ед./л.
- В норме (у здоровых людей) коэффициент АСТ/АЛТ имеет значение от 0,91 — 1,75.
Анализ крови на билирубин
Билирубин является продуктом распада гемоглобина. Билирубин в крови содержится в виде непрямого (до 96%) и прямого (4%). Процесс распада этого вещества происходит, в основном, в клетках печени, откуда с желчью выводится из организма. При разрушении клеток печени уровень билирубина в сыворотке крови возрастает. В норме содержание общего билирубина составляет менее 3,4 — 21,0 мкмоль/л. При уровне 30 — 35 мкмоль/л и выше билирубин проникает в ткани, из-за чего кожа и склеры приобретают желтушную окраску.
Рис. 6. Желтуха — один из признаков поражения печени.
Все о гепатите С
ССЫЛКИ ПО ТЕМЕСтатьи раздела «Гепатит С»Самое популярное
ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?
Подпишитесь на нашу рассылку!
Источник: microbak.ru
Читайте также
Вид:
Источник
При гепатите важно своевременное и адекватное лечение. Однако методы терапии и медикаменты, которые назначает врач, зависят от результатов исследования. Анализы крови при гепатите позволяют выявить концентрацию вируса, срок нахождения гепатита в организме и тип заболевания, поэтому данный вид исследования считается главным при подозрении на патологии печени.
Показания к назначению
Анализ крови назначается при многих заболеваниях, в том числе и при подозрении на гепатит. Таким образом, показаниями к назначению анализа являются клинические симптомы заболевания:
Тошнота
- тошнота;
- желтушность кожных покровов и слизистых;
- изменение цвета кала и мочи;
- повышенная утомляемость.
Однако на ранней стадии гепатит может себя не проявлять, как часто происходит при гепатите С, так что носительство вируса определить сложно. Также пациент может принять симптомы данного вирусного заболевания за признаки другой патологии, не связанной с вирусом. По этой причине необходимо пройти медицинское обследование и сдать кровь на анализ, поскольку этот метод определяет болезнь и дает врачу необходимую информацию для назначения адекватного лечения.
Симптомы гепатита могут иногда пропадать на некоторое время в период перехода от острой фазы к хронической – это опасно, поскольку пациент считает, что заболевание вылечено. Однако именно хроническая стадия характеризуется неприятными и выраженными симптомами, которые ухудшают качество жизни.
Разновидности анализов
Исследование крови является обязательным пунктом медицинского обследования при подозрении на гепатит. Существуют следующие виды лабораторного исследования биологического материала:
ПЦР
- общий анализ крови;
- биохимический анализ;
- метод полимеразной цепной реакции (ПЦР);
- иммунологическое исследование крови.
Общий анализ отображает состояние пациента, однако он не несет специфической информации о вирусе гепатита. Тем не менее данные об изменениях уровня гемоглобина, лейкоцитов и лимфоцитов являются полезными для составления общей картины здоровья обследуемого человека. Как правило, в комплексе с анализом крови при гепатите сдается анализ мочи.
Биохимический анализ крови уточняет следующую информацию:
- количество печеночных ферментов, которые обнаруживаются в кровотоке вследствие поражения гепатоцитов (клеток печени);
- концентрация билирубина – прямого и общего;
- изменения в соотношении белковых фракций крови;
- уровень содержания триглицеридов.
Метод ПЦР позволяет определить тип вируса – его используют при подозрении на любое вирусное заболевание, так как он считается эффективным.
Иммунологическое исследование крови необходимо для выявления антител к вирусу и клеткам печени (при аутоиммунном гепатите). Тест имеет срок действия – для гепатитов B и C длительность составляет 12 недель. Анализ можно провести и в домашних условиях, для этого потребуются специальные полоски, которые выявляют антигены вируса B и антител к гепатиту C в биоматериале – слюне и крови.
Таким образом, кровь — это богатый источник информации о гепатите, который необходим для определения верного диагноза.
Подготовка к сдаче крови
Чтобы анализы дали хороший, приближенный к действительности результат, необходимо правильно подготовиться к сдаче биоматериала в лабораторию. В случае сдачи крови важно проследить за потребляемыми продуктами, поскольку вещества, впитываемые кишечником, идут прямиком в кровоток и меняют концентрацию продуктов метаболизма. По этой причине кровь мутнеет, и показатели могут нарушаться.
Анализ крови сдается натощак
Рекомендуется делать анализ натощак утром. Перед забором крови поужинать следует за 10 часов, желательно легким, нежирным мясом или салатом. Потребление сахара значительно сказывается на качестве пробы, поэтому ни в коем случае нельзя пить сладкие напитки до посещения больницы. Иногда врачи даже советуют пропустить утренние гигиенические процедуры, поскольку в зубной пасте содержится сахар, а пасту можно случайно проглотить со слюной. До забора крови допускается выпить немного чистой воды, без добавок.
Нужно отметить, что и голодание в течение 2–3 суток также способно исказить результат анализа. Дело в том, что через пару дней без пищи в кровотоке повышается количество желчного пигмента – билирубина, который является важным составляющим исследования на вирус гепатита. Если человек не кушает в течение 2–3 дней, то в крови также снижается уровень глюкозы и увеличивается концентрация свободных жирных кислот и триглицеридов, но холестерин остается практически без изменения.
Чтобы добиться достоверности результатов, необходимо полноценное питание накануне сдачи крови. Стоит убрать из рациона чрезмерно соленые, жирные и острые блюда, поскольку вероятно повышение количества ферментов, жиров и калия. Кроме этого, жирные блюда делают кровь мутной: если употребить много сливочного масла вечером перед процедурой, исследование может быть затруднено. Также перед сдачей пробы следует отказаться от желтых и оранжевых овощей, так как они содержат большое количество каротиноидов, повышающих концентрацию билирубина.
До анализов нельзя есть фрукты и овощи оранжевого цвета
Расшифровка результатов
Диагностика гепатита методом лабораторных исследований требует совокупности коэффициентов, изменения которых указывают на наличие или отсутствие патологии. Расшифровать анализ может только специалист, однако некоторые показатели достаточно ярко отражают изменения в состоянии здоровья.
К основным показателям относят:
- иммуноглобулины;
- билирубин;
- АЛТ (аланинаминотрансфераза) и АСТ (астаспартатаминовая трансфераза) – печеночные ферменты;
- триглицериды;
- гемоглобин;
- лейкоциты.
Если результаты пробы крови не дали очевидных и однозначных результатов, то врач назначает дополнительные анализы.
Нормальные показатели
У незараженного человека нет иммуноглобулинов анти-HCV, поскольку они появляются лишь при наличии вирусного белка гепатита.
Нормальная концентрация билирубина в крови человека составляет до 20 мкмоль/л, АЛТ колеблется от 0,1 до 0,68 мкмоль/л, а АСТ достигает значений в рамках 0,1-0,45 мкмоль/л.
В обычном состоянии у человека в крови от 0,4 до 2,9 ммоль/л триглицеридов. Норма гемоглобина составляет 120–160 г/л крови. Концентрация лейкоцитов – 4–9*109.
Отклонения от нормы
Специфические иммуноглобулины появляются вследствие реакции организма на ядра вируса гепатита и его геном. В первые 3–6 месяцев со дня заражения должны образоваться первые антитела – более долгий срок крайне редок.
Желтуха
Если билирубин выше 20 мкмоль/л, то у человека развивается желтуха – один из главных признаков перехода гепатита С в хроническую фазу. Повышение показателей АЛТ и АСТ указывает на острую стадию гепатита и начало разрушения гепатоцитов. Снижение же характерно для развития цирроза печени.
Содержание триглицеридов при гепатите увеличивается. Снижение концентрации лейкоцитов и гемоглобина показывает наличие вируса в крови, повышенной кровоточивости или иной кровяной патологии.
Анализ крови необходим для выявления вида, фазы и продолжительности нахождения вируса гепатита в организме человека. При этом нужно правильно подготовиться к сдаче, чтобы анализ дал максимально точный результат: для этого важно проследить за питанием и не кушать до непосредственной сдачи анализа. Расшифровку же необходимо доверить специалисту, поскольку анализ крови на гепатит имеет комплексный характер и имеет множество нюансов, характерных для различных заболеваний.
Источник