Неопределенный результат к гепатиту с

Нередко возникает ситуация, когда тест на вирусный гепатит Б или С является ложноположительным. В данной статье речь пойдет о причинах таких явлений.

Виды ложноположительных анализов на гепатиты

Анализы на выявление гепатитов могут быть качественными (они указывают на наличие или отсутствие того или иного вируса гепатита в крови) или количественными (устанавливают форму заболевания, помогают контролировать течение болезни и эффективность терапии).

Ложноположительными могут быть результаты только качественных тестов. Причем, ошибка качественного анализа на гепатит B встречается очень редко. Чаще по вине самого исследуемого или по вине врачей происходит ошибка на гепатит C.

Качественный анализ на гепатит В

Качественный ПЦР-тест на ДНК вируса гепатита В подтверждает наличие вируса гепатита B в крови, что очень важно в тех случаях, когда диагноз сомнителен. Мутации вируса могут вызвать изменения HBsAg и HBeAg, которые в таком случае не определятся методом ИФА. При этом на прогноз заболевания и риск осложнений это не оказывает никакого влияния.

Важное достоинство ПЦР-теста — это тот факт, что ДНК вируса гепатита В появляется в крови раньше его поверхностного компонента белковой оболочки, что позволяет применять качественный анализ ПЦР для ранней диагностики гепатита Б у людей с высоким риском заражения.

Качественный анализ на гепатит С

Качественный ПЦР анализ указывает на наличие вируса в крови. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено».

Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени.

Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено».

Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы.

Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК вируса гепатита С также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Что такое ложноположительный результат

Ложноположительный анализ исследования на наличие специфических антител к гепатиту фиксируется в том случае, если результаты анализа носят положительный характер, однако при этом вирусный возбудитель в организме отсутствует. Это может происходить в результате воздействия внешних или внутренних факторов.

Ложный анализ выявляется при проведении дополнительного исследования путем ПЦР – диагностики, при которой вирус гепатита не обнаруживается. Таким образом, результат анализа крови на гепатит нельзя считать достоверным на 100%.

Именно поэтому для установления точного диагноза и в целях недопущения врачебной ошибки пациенту назначается комплексное обследование с проведением различных исследований.

Причины ложноположительных реакций в анализах на гепатиты С и В

Болезни пациента

Ложноположительный результат может обнаруживаться при развитии определенных патологических процессов в организме. К болезням и другим состояниям, которые вызывают подобное явление, относят:

• Заболевания аутоиммунного происхождения.
• Опухолевидные процессы доброкачественного или злокачественного характера.
• Запущенные инфекционные процессы в организме, о которых пациент не проинформировал лечащего врача.
• Различные дисфункции в деятельности иммунитета.
• Прием определенных медикаментозных средств, в составе которых присутствует гепарин. Прием иммуностимулирующих средств.
• Беременность.
• Новорожденные дети, у которых диагностированы внутриутробные инфекции.
• Повышенная концентрация криоглобулина в кровяной жидкости.
• Обострения заболеваний органов верхней дыхательной системы.
• Развитие аутоиммунного гепатита.
• Предварительно проведенная вакцинация против гриппа или столбняка. Прохождение курса лечения с помощью интерферона альфа.

Также в некоторых случаях результат может быть недостоверным, если инфицирование произошло совсем недавно, вирус находится в стадии инкубации.

В данном случае следует прислушиваться к своему организму, при появлении каких-либо сомнительных симптомов сразу же обращаться к доктору и проходить все назначенные диагностические мероприятия.

Ошибки исследования

Помимо физиологических факторов ложноположительный анализ может быть спровоцирован рядом внешних причин. К наиболее распространенным из них принято относить следующие:

1. недостаточно качественно проведенное исследование;
2. ошибки медперсонала, допущенные во время проведения анализа;
3. неверно подготовленные образцы крови;
4. случайно подмененные пробы;
5. начальная стадия развития заболевания;
6. нарушения, связанные с процессами транспортировки, а также хранения биоматериала;
7. низкая степень квалификации лаборантов;
8. воздействие на образцы крови повышенными температурами;
9. загрязнение биоматериала;
10. перекрестная реакция;
11. неспецифическая реакция.

Противоречивые показатели при определении антител к гепатиту С могут возникать при применении наборов для диагностики от различных фирм-производителей.

Зафиксированы случаи получения противоположных результатов при исследовании одной и той же сыворотки крови различными диагностическими тестами.

Дело в том, что диагностические наборы основываются на применении определенных антигенов для взаимодействия с антителами в биоматериале, что и становится причиной ложноположительного результата исследования.

Неправильная подготовка пациента к анализам

Одним из возможных факторов, влияющих на искажение результатов, является неправильная подготовка самого человека перед сдачей крови. Чтоб анализы не были ложноположительными, необходимо строго придерживаться правил подготовки:

• кровь для анализа сдается только натощак и желательно утром;
• за 12 часов до сдачи биологического материала нельзя принимать алкоголь, курить, также нужно исключить физическую активность и прием пищи;
• необходимо исключить прием лекарственных препаратов, а если это невозможно, то нужно проинформировать врача;
• детям до 5 лет перед сдачей крови на исследование необходимо поить ребенка кипяченой водой каждые 30 минут, причем 1 порция в среднем должна быть 150 мл.

Кроме того, вирус гепатита проявляется не сразу, его симптоматика заставляет себя ждать.

Сдача анализов в период беременности: особенности проведения процедуры

Будущим мамам во время беременности необходимо сдавать анализ на гепатит не менее 3 раз. При этом достаточно часто фиксируются ложноположительный тест на гепатит, что связано с определенными изменениями в организме беременной женщины.

Этому способствуют следующие причины:

1. Изменение гормонального баланса.
2. Нарушение обменных процессов.
3. Грипп.
4. Респираторные инфекции.
5. Процесс гестации.

Это объясняется вступлением в реакцию схожих белков, вырабатываемых иммунной системой беременной женщины при проникновении в организм чужеродных агентов патогенного характера.

Кроме того, образцы плазмы крови будущих мам принято считать сложными, что повышает вероятность недостоверных результатов анализа у беременных женщин. Также в этот период может быть зафиксирован ложноположительный анализ на гепатит В.

Поэтому при обнаружении в крови пациента антител к вирусам гепатита С или В, ему назначаются дополнительные исследования.

Дополнительная диагностика

В качестве дополнительной диагностики гепатита пациенту назначаются следующие виды исследовательских процедур:

• Тест на рекомбинантный иммуноблотинг.
• Анализ методом полимеразной цепной реакции.
• Анализ на билирубин.
• Ультразвуковое исследование брюшной полости, на определение структурных изменений в печени.

Ложноположительный анализ на выявление антител к гепатиту наблюдается достаточно редко, однако может стать для пациента настоящим псхоэмоциональным потрясением и причинить массу дискомфорта.

Специалисты рекомендуют не впадать в отчаяние в случае положительного результата анализа, а пройти дополнительные виды исследований на заболевание гепатитом.

Специфические лабораторные методы применяются для диагностики гепатита С. К ним относятся иммунохимические, молекулярно-биологические анализы распознавания РНК-содержащего вируса (ВГС).

Интерпретация полученных данных зависит от:

1. Чувствительности применяемого метода. Это способ определения минимального компонента в величине разведения — антител, антигенов, нуклеиновых кислот. Выражается в количественных единицах — титрах.
2. Специфичности конкретного метода, способного выявить ВГС и антитела к нему

Цель работника лаборатории заключается в разграничении ложноположительных анализов на гепатит С и обнаружение вируса и антител к нему.

Анализы на гепатит С

Постановка диагноза HСV-инфекции происходит с помощью вирусологических (ПЦР) и серологических тестов (ИФА).Симптоматика острой фазы заболевания практически отсутствует, но уже в первые 7-14 дней после инфицирования диагностировать этот период гепатита С можно при обнаружении РНК методом ПЦР.

Применение ИФА в этой стадии не результативно, так как антитела вырабатываются через несколько недель. Изобретение тестовых систем 3 поколения способствует определению IgM в ранние сроки. Метод используют в лабораториях, но он не отвечает целям полной диагностики и оценки эффективности лечения.

ИФА

Метод иммуноферментного анализа разработан в трех вариантах: иммуноферментный, радиоиммунный, флюороиммунный. Востребован твердофазный ИФА. В постановке реакции он прост, высокочувствителен и относительно не дорог.

В зависимости от агента, который определяют – антиген или антитело, ИФА представляет разную ценность в диагностике. Верные результаты получаются при выявлении вирусных антигенов. Это также не является критерием постановки диагноза, так как часть антигенов расположена только в печеночной ткани и в крови обнаружить их не возможно. Поэтому нужно применять ИФА с определением сразу двух видов вирусных антигенов.

При обнаружении антител к ВГС нельзя говорить о присутствии вируса. Выявлены случаи когда анализ ИФА оказывается ложноположительным у обследуемого. Это указывает на иммунологическую память ранее присутствующего вируса в организме.

В проведенных исследованиях 957 проб с положительным ИФА потребовались другие арбитражные методы — ПЦР. В итоге у 36,6% РНК не обнаружилось, что свидетельствует о получении ложноположительного ответа.

Разработанные за последнее десятилетие новые тестовые системы способны одновременно определять антитела и антигены к вирусу гепатита С.

ПЦР

Этот метод детекции — полимеразная цепная реакция, создан для обнаружения вирусной РНК в образце сыворотки крови. Исследование заключается в многоцикловом процессе, который состоит из переходящих друг в друга этапов.

С помощью применения обратной транскриптазы (фермента) образуются молекулы ДНК вируса гепатита С. Итоговый результат — выделение вирусной рибонуклеиновой кислоты. Количественный вариант ПЦР используют для определения концентрации РНК. Исследуется количество копий в 1 мл. Выражается в логарифмических выражениях (log10).

Для прогнозирования эффективности лечения важным является выяснение принадлежности гепатита С к генотипу. В проведении генотипирования используют типоспецифические праймеры, в методах основанных на методике ПЦР.

Чувствительным методом определения нуклеиновых кислот считается «ПЦР в реальном времени». С помощью этого метода получают результат в ходе реакции даже при малом количестве нуклеиновых кислот. Полученные показатели с высокой точностью определяют уровень вирусной нагрузки.

Может ли анализ на гепатит С быть ошибочным?

На сегодня по-прежнему остается шанс получения ложноположительного результата на наличие анти-ВГС. При определенных обстоятельствах искаженные данные получаются при проведении ИФА и ПЦР.

Доля ошибочных ложноположительных результатов составляет 10-20%.

Для уточнения нахождения вируса в крови обследуемого человека применяют метод обнаружения РНК совместно с другими чувствительными методами. Однако получение отрицательного ответа не свидетельствует о ложноположительном ответе. В случаях полного выздоровления пациентов (10-15%) в крови возможно присутствие анти-ВГС.

Получение ложноположительного результата зависит от естественных причин:

• появление мутантных штаммов;
• репродукции антител и антигенов возбудителя.

Причины ложноположительного анализа

Ошибочный анализ регистрируется в виде ложнонегативных и ложнопозитивных результатов.

Ложноположительный ответ получается при:

• смешении исследуемого образца с предыдущим через лабораторное оборудование или аэрозоли;
• соединение между пробами при работе с реакционной смесью.

Ложноотрицательные ответы определения РНК получаются при:

• нарушениях правил перевозки клинических образцов;
• несоблюдении теплового режима образцов крови;
• распад РНК при подготовке к пробе;
• поэтапное прохождение ПЦР нарушает гепарин и высокий уровень криоглобулинов;
• присутствие в сыворотке белковых, химических субстанций.

Распространенные причины ошибок анализов связаны с:

• иммунодефицитными состояниями;
• онкологией;
• аутоиммунными заболеваниями (синдром Рейно, полинейропатия, узелковый периартериит и другие);
• поражениями системы крови (тромбоцитопения, гемолитическая анемия);
• глистными инвазиями;
• сифилисом.

Человеческий фактор

Ошибка в анализе возможна с учетом действия работников, участвующих в процессе, с процедурного кабинета и до клинической лаборатории.

Человеческий фактор возможен при:

• нарушении нумерации пробирок в момент забора крови;
• указании ошибочного ответа;
• неправильных действиях лаборанта в ходе подготовки образца;
• проведении пробы в условиях повышенной комнатной температуры;
• неопытности молодого специалиста;
• изготовлении некачественных диагностических препаратов.

Моментом, который способен искажать данные исследований является алкоголь. Это своеобразный антидепрессант, который воздействует на диагностику гепатита С. У пьющих людей с хронической формой выявляться HCV РНК при отсутствии антител и наоборот.

Ложноположительный результат у беременных

Установленный гепатит С ложноположительный у беременной женщины может быть связан с физиологическими изменениями происходящими в организме в период вынашивания плода:

• выработку характерных гестационному периоду белков;
• полную перестройку гормональной системы;
• повышение концентрации противовоспалительных цитокининов;
• изменение биохимических показателей;
• присоединение инфекций бактериального и вирусного генеза.

Инфекционные заболевания

Инфекционные заболевания протекают с выделением антител (защитные факторы крови) в ответ на антигены (болезнетворные возбудители). Работа иммунитета человека заключается в выработке иммуноглобулинов в ответ на проникновение чужеродных агентов.

Одновременное выделение иммуноглобулинов при инфекционном процессе в сочетании с гепатитом С искажает результаты анализов ИФА, что ведет к возрастанию количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Инфекции, которые приводят к ошибке:

• токсоплазмоз;
• цитомегаловирус;
• передающиеся половым путем (уреаплазма, микоплазма, трихомоноз).

Лабораторная диагностика гепатита С при коинфекции с ВИЧ затруднена. Ложноотрицательный ИФА по выявлению анти-ВГС связан с формированием иммунодефицита у человека. Поэтому всегда проводится исследование РНК методом ПЦР.

Как избежать ложноположительного результата?

Ошибочный диагноз гепатита сводят к минимуму благодаря:

• качественному обучению лабораторных работников и прохождению курсов повышения квалификации;
• проведению этапов ПЦР в изолированных зонах;
• применению автоматических пипеток для каждого этапа реакции;
• проведение дополнительных анализов для уточнения.

Исключить ложноположительный результат возможно при проведении дополнительных (supplemental) тестов. Это препараты, созданные специально для определения антител к конкретным белкам, кодированных разными зонами вирусной РНК.

Внедрение новых методик лабораторного исследования вирусного гепатита С обеспечивает раннюю диагностику заболевания и сводит к минимуму появление ложных результатов. Это мера способствует своевременно начатому лечению, которое заканчивается выздоровлением.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )