Обследование ифа на гепатит с

Иммуноферментный анализ – это метод диагностики вирусных заболеваний. ИФА на гепатит С показывает реакцию иммунной системы на действие патогенных микроорганизмов. Для процедуры используют венозную кровь и ищут в ней антитела к вирусу гепатита. Иммуноферментный анализ недорогой, выполняется быстро, но требует подтверждения повторным ИФА или более дорогим ПЦР.

Сущность и достоверность метода

Метод основан на способности антител (клеток иммунной системы) образовывать комплексы с частицами вируса гепатита (антигенами). Для определения этих комплексов пользуются специальными маркерными ферментами. Анализ дает возможность выявить количество антител к вирусу в первые 6-12 недель болезни.

Подготовка к ИФА включает:

• исключение физических нагрузок за сутки до исследования;
• запрет на употребление алкогольных напитков, табачных изделий и жирной пищи;
• временное прекращение приема лекарственных препаратов и оральных контрацептивов.

Кровь для иммуноферментного анализа на гепатит берут утром натощак. Достоверность данного метода повышается при повторном проведении ИФА спустя 2 недели после процедуры.

Результат анализа показывает:

1. уровень эффективности работы иммунной системы при борьбе с вирусом;
2. стадию заболевания;
3. течение – острый или хронический гепатит.

Женщинам в период беременности необходимо сдать кровь на ИФА минимум два раза:

• на ранних сроках (4-5 недель);
• перед родами;

Преимущества ИФА заключаются в:

• доступной стоимости анализа для всего населения;

• полной автоматизации процесса, исключающей ошибку человека;

• быстром получении результата анализа;

• возможности выявить инфекционное заболевание на ранних этапах;

• высокой точности.

Показания к ИФА на гепатит С

Гепатит С – опасное вирусное заболевание, которое передается через кровь и разрушает клетки печени.

Показания к анализу крови на ВГС:

• наличие ВИЧ-инфекции;
• симптомы острого гепатита: рвота, вялость, чувство горечи во рту, отсутствие аппетита, желтушный цвет кожных покровов и др.;
• хронический гепатит;
• наличие в биохимическом анализе крови повышенного билирубина и изменение коэффициента де Ритиса (указывают на нарушения работы печени);
• принадлежность к группе риска (врачи, медсестры, наркозависимые);
• наркотическая и алкогольная зависимость.

Проверку на гепатит С обязаны проходить военные, сотрудники правоохранительных органов, работники общепита и социальных служб.

Какие антитела обнаруживает тест

Анализ на гепатит С, проведенный методом ИФА, способен обнаружить антитела двух типов:

1. IgM;
2. IgG.

IgM – иммуноглобулин, имеющий самую крупную молекулярную массу и неспособный проникать через плацентарный барьер. Антитела класса IgM вырабатываются в организме первыми – спустя 6 недель после заражения. Через полгода уровень иммуноглобулинов типа М снижается и остается таким до следующего рецидива болезни (при хроническом гепатите). Иммуноглобулины M являются основой первичного иммунного ответа зараженного организма.

IgG – основной иммуноглобулин сыворотки крови, является вторичным иммунным ответом. Обеспечивает иммунитет ребенка, рожденного от инфицированной матери. Иммуноглобулины G вырабатываются спустя 3 месяца после возникновения заболевания, достигают максимальной концентрации на пятом месяце и остаются в этом количестве на протяжении многих лет.

В периоде острого вирусного гепатита есть две стадии. На первой происходит активация и выделение IgM, на второй – IgG. В острой фазе болезни IgM и IgG образуются к нуклеокапсидному белку вируса Core. При латентном (скрытом) течении вырабатываются IgG к белку core и неструктурному белку NS.

Способы проведения

Диагностика гепатита включает два способа проведения ИФА – прямой и непрямой.

Прямой

Прямой метод ИФА на антитела к гепатиту С основан на образовании комплексов антиген-антитело.

Стадии проведения:

1. В специальную таблицу с лунками заносят биологический материал пациента (кровь) и оставляют на 30 минут. Важные элементы приклеиваются ко дну лунок. 
2. Добавляют специальные меченые антитела. Они прикрепляются к антителам исследуемой крови (если такие есть). Здесь выжидают несколько часов. 
3. Содержимое лунок сливают и промывают от лишних веществ.
4. В каждую лунку добавляют ферменты, которые распознают добавленные ранее антитела. Ферменты связаны со специальным маркером.
5. При положительной реакции маркерное вещество становится окрашенным.

Эта методика включает несколько простых шагов и обеспечивает достоверный результат.

Непрямой

Непрямой метод ИФА отличается тем, что в системе участвуют не два, а три компонента.

Он включает два варианта:

• Конкурирующий: в исследуемую систему добавляют антигены, кровь пациента, в которой предполагается наличие иммуноглобулинов, и антитела, помеченные ферментом. Две группы антител вступают в борьбу за образование комплексов с антигеном. Положительной реакция считается при максимальном количестве антител первой группы и минимальном – второй группы.
• Сэндвич-ИФА: в лунки заносят антитела к исследуемому антигену, после чего добавляют кровь и новые антитела. Исследуемый антиген оказывается между двумя молекулами иммуноглобулинов. Этот «сэндвич» виден визуально или при подсвечивании специальным спектром.

Расшифровка анализа

Существует четыре варианта расшифровки анализа:

1. Положительный результат. В исследуемом материале обнаружены IgM и IgG к вирусу гепатита – означает, что человек заражен давно (более 3 месяцев назад). Если обнаружены только IgM, то инфекция попала в кровь месяц назад, если только IgG – произошло выздоровление или хронизация гепатита.
2. Отрицательный результат. Иммуноглобулинов в исследуемой крови не обнаружено. Человек полностью здоров.
3. Ложноположительный результат. ИФА всегда нужно проверять полимеразной цепной реакцией (выявляет сам вирус в крови или печеночной ткани). Если ПЦР дает отрицательный результат, то ИФА следует провести заново.
4. Сомнительный результат. Если прошло очень мало времени после рискованной ситуации, ИФА может не выявить наличия антител. Для подтверждения результата необходимо провести повторный анализ через две недели.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты ИФА могут возникнуть вследствие ошибки в лаборатории или неправильной подготовке к анализу. У беременных ложные результаты встречаются чаще, чем у остальных людей.

Почему ИФА положительный, а ПЦР отрицательная

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – дополнительный метод диагностики вирусных заболеваний. Выявляет РНК вируса, то есть его генетическую информацию, применяется для подтверждения диагноза. В некоторых случаях ПЦР дает отрицательный результат при положительном показателе ИФА.

Почему так происходит:

• Выздоровление: ПЦР реагирует только на РНК вируса гепатита, а ИФА может дать положительный результат и после выздоровления, ведь он выявляет клетки иммунной системы, которые сохраняются в крови на несколько лет.
• Разный исследуемый материал: при заборе из разной локализации может возникнуть несоответствие результатов. Так, для ПЦР берут не только кровь, но и кусочек ткани печени.
• Разные тестовые системы. 

Что покажет ИФА после лечения гепатита

После пройденной терапии против гепатита С необходимо еще раз сдать кровь на ИФА.

Иммуноглобулины G сохраняются в организме несколько лет после выздоровления, поэтому повторный анализ на гепатит может быть положительным. В этом случае необходимо дополнительно сдать кровь на ПЦР. Отрицательный результат ПЦР на гепатит будет свидетельством того, что человек здоров, а положительный – подтвердит ИФА и укажет на некачественное лечение.

Отрицательный результат повторного ИФА является подтверждением выздоровления.

ИФА относится к лабораторным методам высокой точности и позволяет выявить заболевание на ранних сроках. При первых симптомах гепатита нужно срочно обратиться к врачу, который назначит необходимые анализы для подтверждения диагноза.

Если у вас так же обнаружен РНК гепатита С в крови (вирусная нагрузка), рекомендуем ознакомиться с материалом по расшифровке анализов при гепатите С.

О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней. 

Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.

Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы. 

Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции. 

Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов. 

Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.

Как определить гепатит С?

Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:

• постоянное чувство слабости;
• астенический синдром;
• непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
• сонливость;
• эмоциональная раздражительность;
• расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).

Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.

Как определить гепатит С у взрослых и у детей:

• по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
• по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
• по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.

Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики. 

Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора. 

Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа. 

Основные методы лабораторной диагностики

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Когда можно обнаружить HCV в крови?

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека. 

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели. 

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса. 

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

• биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
• ИФА;
• ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение. 

ПЦР диагностика

Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.

Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:

Качественное исследование

Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.

Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения. 

При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.

Количественный анализ

Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).

Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют. 

Генотипирование

Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения. 

Экспресс-тестирование в домашних условиях

В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.

Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию. 

Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.

Подготовка к сдаче анализов

При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:

• исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
• соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
• сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
• не курить за 8 часов до исследования.

Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста. 

Изменение показателей крови

Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.

Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:

• снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
• уменьшение содержания гемоглобина;
• изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
• повышение параметров скорости оседания эритроцитов.

Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.

О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:

• билирубина;
• АЛТ;
• АСТ;
• креатинина;
• альбумина. 

Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов. 

Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.

Как выявить осложнения

Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов. 

От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.

Биопсия печени

Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией. 

Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом. 

Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры. 

УЗИ

Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.

Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:

• нарушения кровоснабжения органа;
• изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
• наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
• увеличение размеров печени.

По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови. 

Эластометрия

Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.

КТ, МРТ

Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.

Самодиагностика

Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским ил