Пцр гепатит с когда сдавать анализы

Гепатит С переходит из острой фазы в хроническую в 80% случаев. Репликация болезнетворных вирусов в функциональных клетках печени ведет к дисфункции органа. Это обусловлено тем, что паренхиматозная ткань заменяется соединительной. В результате анамнез больного дополняется кровотечениями в ЖКТ, интоксикацией организма, проблемами со свертываемостью крови. Поэтому чем раньше будут диагностированы патологические изменения, тем больше у пациента шансов на выздоровление. Анализ ПЦР на гепатит С считается наиболее точным методом исследования.

Этот диагностический метод разрешено проводить спустя несколько дней после заражения. Полимеразная цепная реакция позволяет достоверно определить генотип и концентрацию вируса в крови. Чтобы сделать анализ, у пациента берут биологический материал, в котором может присутствовать РНК возбудителя.

ПЦР на гепатит С осуществляют в три этапа:

Качественный анализ – с его помощью определяют генетический материал возбудителя.
Количественное исследование – таким образом выявляют вирусную нагрузку.
Генотипирование – на этой стадии врач узнает разновидность заболевания.

Методику разработали около 30 лет назад. Ее применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет обнаружить уникальный генетический материал. Для этого используют праймеры. Так называют короткие нити РНК, которые присоединяют к началу гена.

Анализ ПЦР

В результате количество фрагментов болезнетворного вируса многократно увеличивается. Каждая фаза требует особого температурного режима и определенного промежутка времени. Молекула ДНК формируется в течение 3 минут. Амплификация включает в себя около 30 циклов. ПЦР делают в лаборатории посредством специального оборудования.

Показания к назначению

Сдача анализа ПЦР может быть обусловлена наличием клинических симптомов гепатита С. Процедура показана людям, которые:

контактировали с инфицированным человеком;
страдают от острых и хронических заболеваний печени;
проходят лечение от патологических изменений в паренхиматозной ткани;
входят в группу риска;
являются донорами крови и ее компонентов.

ПЦР осуществляют не только при гепатите С. Анализ используют в медицине, биологии, криминалистике. Определение специфических показателей – этап, необходимый для подбора лекарственной схемы.

Преимущества анализа

В схему диагностического обследования включают иммунофлуоресцентный анализ и ПЦР. С помощью первого можно определить концентрацию иммуноглобулинов. Эти вещества вырабатываются защитным механизмом после проникновения болезнетворных вирусов в организм. В отличие от ПЦР ИФА не обладает эффективностью во время инкубационного периода. С помощью полимеразной цепной реакции гепатит С можно выявить в первые 7 дней после инфицирования.

Данное клиническое исследование обладает следующими характеристиками:

Минимальная вероятность ложного результата.
Высокая эффективность.
Специфичность.
Чувствительность.
Универсальность.
Автоматизация процесса.
Безопасность.
Скорость получения показателей.

Единственным минусом ПЦР является ее техническая сложность. Это связано с тем, что врачу необходимо подобрать правильный состав нуклеотидов, в функциях которых синтез ДНК. Из-за повышенной чувствительности метода возможно получение ложноположительного или ложноотрицательного результатов.

Чтобы добиться точности значимых показателей, биологический материал тщательно очищают от медикаментозных препаратов и белковых соединений. Для подтверждения результата требуется сравнение ранее проверенных образцов. К факторам, провоцирующим ошибку, причисляют:

Нарушение техники забора анализа

Нарушение техники забора анализа.
Изменения в последовательности фрагментов РНК.
Совпадение синтезируемых нуклеотидов и генов болезнетворных вирусов.

Вероятность получения ложного результата при гепатите С присутствует из-за невозможности определения генетической основы заболевания. ПЦР-диагностика позволяет напрямую выявить возбудителя. С помощью амплификации ДНК происходит обнаружение болезнетворных микроорганизмов в продуктах питания, воде и почве.

Ограничения, касающиеся данного метода, не уменьшают его эффективности и популярности. Клиническое исследование проводят регулярно. Таким образом врач может оценить эффективность принятых лечебных мер. Необходимость в этом возникает из-за того, что вирус гепатита С способен мутировать. Отсутствие положительного эффекта означает адаптацию вируса к применяемым лекарственным средствам.

Подготовка к сдаче

Для того чтобы провести полимеразную цепную реакцию у больного, страдающего от гепатита С, берут венозную кровь. Обычно для изучения требуется две порции биологического материала. Посредством одной делается непосредственно ПЦР, а другую направляют на иммуноферментный анализ.

Кровь для анализа ПЦР берут из вены

Подготовка имеет большое значение. Пациент сдает кровь на ПЦР утром на голодный желудок. За несколько дней до процедуры придется отказаться от вредных продуктов питания, спиртных напитков, никотина и наркотиков. Больному следует избегать половых контактов, чрезмерной физической и эмоциональной нагрузки. Бассейн и спортзал оказываются под запретом. Подготавливаться придется в любом случае.

Существуют особые указания относительно медикаментозных препаратов. Это касается антибиотиков и антидепрессантов. Женщины, у которых начались менструации, должны отсрочить сдачу анализа на гепатит С. Кольпоскопия также является поводом для отказа от процедуры.

Перечисленные правила довольно просты. Благодаря им, можно добиться максимальной достоверности данного диагностического метода. Расшифровывать результаты должен специалист. Самостоятельно интерпретировать их у пациента вряд ли получится.

Процесс сдачи анализа

ПЦР-диагностику осуществляют следующим образом:

Кровь помещают в термостат

Сначала забирают биологический материал. Кровь помещают в простерилизованные приспособления. Необходимый объем не превышает 1-1,5 мл. Держать кровь и ее компоненты следует не дольше 24 часов. Температура хранения не должна превышать 4 градусов по Цельсию.
После начинают клиническое исследование. Подготовленную кровь помещают в термостат вместе с амплификационной смесью. Обычно требуется не более 25 мл специального состава. Амплификация проводится в автоматическом режиме на протяжении нескольких часов.
Параллельно делают контрольные анализы. Для этого используют биологические материалы, взятые у здорового человека. Это поможет избежать ложных результатов.
Расшифровка и регистрация показателей. Генетический материал обнаруживают с помощью бромистого этидия. Благодаря специфическому воздействию, фрагменты ДНК высвечиваются. Наличие (отсутствие) вируса выявляют ориентируясь на данные таблицы.

Расшифровка результатов

Определить значение полученных показателей может только инфекционист и гепатолог. Анализ ПЦР вводят диагностический комплекс вместе с биохимическим исследованием крови, УЗИ, ИФА и биопсией. Диагноз ставят на основании всех результатов. Порядок расшифровки анализов зависит от этапа диагностического обследования.

Ультразвуковая диагностика

На первой стадии ПЦР положительным результатом теста считается обнаружение фрагментов ДНК болезнетворного вируса. При проведении количественного анализа определяют уровень вирусной нагрузки. Она может быть низкой (менее 8*10^5 МЕ/мл), средней (от 8*10^5 МЕ/мл), высокой (больше 2,4*10^7 МЕ/мл). Нормой (отрицательным результатом) считается отсутствие специфических антител и частиц вирусной РНК. На этапе генотипирования об инфекционном заражении свидетельствует РНК определенного генотипа.

При получении положительного результата больному назначают эффективную терапевтическую схему. При этом обязательно учитывают информацию о наличии вируса в крови, степени его активности и генотипе. Цена процедуры зависит от методики тестирования, вида биологического материала. К общей стоимости могут быть добавлены затраты за забор крови или других жидкостей. Последнее обусловлено тем, что возбудителя часто обнаруживают в урине, каловых массах и сперме.

Источник

Анализ ПЦР на гепатит С с большой вероятностью позволяет определить заболевание. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на гепатит С определяет, есть в крови возбудитель или нет, помогает оценить степень инфекционной нагрузки.

Проводить анализ ПЦР на гепатит С имеют право не только государственные учреждения, но и лицензированные лаборатории. Сколько стоит анализ, зависит от чувствительности оборудования, квалификации лаборантов.

РНК-вирус на начальных стадиях заболевания определяется только на чувствительной аппаратуре. Лучше проводить комплексную диагностику. Расшифровку результатов делает инфекционист, только он скажет, если ли заболевание или результат ложноположительный.

Что такое ПЦР?

Методика молекулярного исследования выявляет в пробах биологический материал возбудителя, особые белки, содержащиеся в его оболочке. ПЦР гепатит С выявляет с вероятностью 99,9%. Специальное оборудование определяет концентрацию РНК-HCV в сывороточной пробе. Что такое ПЦР по своей сути – расщепление цепочки РНК на составляющие, их клонирование в течение установленного времени, а затем определение концентрации этих белковых компонентов.

Выявляется подвид генотипа. Возбудитель постоянно мутирует, для выбора правильной тактики лечения устанавливают, какой это гепатит С: подвид 1а, 2а или 2в. Они по-разному реагируют на препараты.

Преимущества ПЦР диагностики:

раннее выявление заболевания, когда еще не проявляются симптомы;
определение вирусоносителя до фазы массового размножения;
точность результатов, ошибки бывают единичными, связаны с уровнем квалификации лаборантов, выходом техники из строя.

Когда необходимо сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Выявляют РНК гепатита C перед постановкой диагноза. Исследования назначаются, если:

человек имел сексуальный контакт с потенциальным вирусоносителем, например, при изнасиловании, случайной связи;
повышена концентрация билирубина в крови;
есть признаки заболевания (потемнение мочи, просветление кала);
увеличена печень;
есть подозрение на цирроз;
в показателях биохимического анализа превышены АЛТ, АСТ;
раньше выявлялся вирус.

Виды ПЦР на гепатит С

Молекулярное исследование методом ПЦР при гепатите C проводится комплексно или только на наличие возбудителя. Подвид вируса определяют при хронической форме заболевания. Теперь подробно о каждом методе.

Качественный

Определить, присутствует ли в крови возбудитель, сможет качественный анализ на гепатит С. Это первый этап всесторонних исследований. Норма, при которой определяется возбудитель, зависит от чувствительности диагностической аппаратуры, она колеблется в диапазоне от 15 до 50 МЕ/мл.

Чем ниже этот показатель, тем точнее выявляется генетический вирусный материал – специфические белки, содержащиеся в оболочке или ядре возбудителя. Анализ ПЦР на гепатит С точнее на чувствительной аппаратуре.

Количественный

Это исследование проводится для определения вирусной нагрузки. По результатам ПЦР определяется концентрация возбудителя в одном миллилитре сывороточной пробы. Такой анализ крови проводится на разных стадиях лечения:

первоначально, на основании результатов устанавливается дозировка противовирусных препаратов;
на четвертой неделе, после первого полного курса терапии;
через 12 недель после начала лечения;
на 24 неделе для определения степени снижения вирусной нагрузки, эффективности терапии.

Генотипирование

Результаты ПЦР не дают полного представления о возбудителе, степени тяжести заболевания, риск дальнейшего разрушения печени. Тактика лечения определяется по генотипу вируса гепатита С. РНК-вирус постоянно мутирует. Всемирной организацией здравоохранения официально признано семь генотипов.

В нашем регионе диагностируют три первых из них. Они различаются устойчивостью к лекарствам. Первый хуже поддается лечению, после курса терапии выздоровление бывает в 60% случаев. Второй и третий – не такие устойчивые, только в 15% случаев лечение затягивается. По генотипу определяется длительность курса приема противовирусных средств.

Расшифровка результатов ПЦР на гепатит С и нормы

Качественных показателей два:

«обнаружено» означает, что в пробе концентрация вируса выше значения чувствительности диагностического оборудования;
«не обнаружено» свидетельствует о незначительном присутствии возбудителя или полном его отсутствии.

Читайте также: Кровь на гепатит с минск

Оценку количественной нагрузки делает инфекционист. Цифровой показатель 8*10^5 МЕ/мл означает высокую вирусную нагрузку. При значении 1,8*10^2 МЕ/мл однозначно определить, активен ли вирус, нельзя, проводятся повторные исследования, о течении болезни судят по динамике изменения показателей.

Когда значение выше 2,4*10^7 МЕ/мл, результаты перепроверяются при уменьшенной концентрации пробы. В результатах анализа на генотипирование указывается разновидность вируса (1а, 2а, 2в). Когда концентрация вируса незначительная, делается пометка «не обнаружено».

ПЦР рассматривается вместе с результатами других исследований. Если качественный результат отрицательный, а в крови повышена концентрация специфических белков, вырабатываемых против возбудителя, это значит, организм самостоятельно поборол инфекцию. По статистике, каждый пятый больной гепатитом С способен противостоять инфекции без медикаментозных вмешательств.

Существует понятие «ложноположительный результат», он бывает при аутоиммунных заболеваниях, когда у больного есть системные заболевания или в крови присевают другие вирусы.

Что делать, если ПЦР на гепатит С положительный?

Для постановки окончательного диагноза пациент проходит всесторонне обследование. Если проводилась качественная оценка, сделать количественную, и наоборот.

Положительный анализ на гепатит С не всегда говорит о болезни, после самоизлечения до полугода в крови присутствуют Anti-HCV. Не исключена ситуация, что анализ ложноположительный, и причиной повышенной концентрации антител стало другое заболевание.

Если диагноз подтвердился, назначается лечение. В зависимости от подвида вируса оно лечится от 3 месяцев до года. Надо запастись терпением, регулярно проходить обследования, сдавать анализы, чтобы определить динамику изменения результатов.

Когда человеку ставится, окончательный диагноз, на него возлагаются добровольные обязанности по соблюдению мер осторожности, чтобы исключить случаи заражения других, контактирующих с ним людей:

пользоваться отдельными предметами гигиены;
изолировать раны при случайных порезах;
использовать барьерную контрацепцию;
воздержаться от поцелуев, если кровоточат десны, есть ранки в полости рта.

Бывает ли анализ ПЦР на гепатит С ошибочным?

Когда назначаются повторные исследования, не стоит паниковать. Случаи неправильных результатов возможны, если пациент не подготовился к сдаче крови. Она сдается на голодный желудок, за сутки до этого нельзя нагружать печень вредной пищей, употреблять алкоголь.

На результаты исследования способны оказать влияние следующие факторы:

респираторные инфекции;
беременность;
перекрестные реакции при проведении вакцинации от других болезней;
системные заболевания суставов, органов дыхания, кроветворных органов;
прием препаратов, влияющих на состав крови.

Источник

Для постановки диагноза “хронический вирусный гепатит С (ХВГС)” требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Содержание
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Три вида ПЦР анализов
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Результат анализа ПЦР на гепатит С

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

высокая чувствительность – 97-98%;
гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

Источник