Пцр и биохимия на гепатит в

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

• отрицательный результат — вируса нет;
• положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

1. Перед назначением лечения.
2. Для оценки эффективности терапии.
3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Гепатит Б – вирусное заболевание печени, опасное осложнениями. Возбудитель передается гематогенным и половым путем, заражение происходит в бытовых условиях, если частички инфицированной крови попадают на слизистые или в ранки. Вирус сохраняет жизнеспособность в течение недели в сухой среде, до полугода во влажной. Разрушается только при нагреве до температуры свыше 140 градусов или в дезинфицирующих растворах.

Выявить присутствие вируса визуально невозможно. Методы диагностики позволяют с высокой точностью установить инфекционную природу патологии печени. Это связано с природой ДНК-вируса. В нем содержатся особые белки, в ответ на них иммунитет вырабатывает антитела. По анализам на гепатит Б устанавливается факт заражения, стадия заболевания, динамика выздоровления, наличие иммунитета.

Что такое гепатит В?

Инфекция развивается по аутоиммунному принципу. Попадая в кровь, возбудитель достигает клеток печени, проникает в них, начинает размножаться. В период выхода из гепатоцита выделяет геном, который распознают иммунные клетки. Атакуя возбудитель, организм уничтожает собственную печень. Желтушность и другие симптомы появляются, когда секреторные функции паренхимы угасают, нарастает интоксикация организма.

Установить диагноз помогает исследование крови. Если результат на гепатит В положительный, делается оценка вирусной нагрузки. В зависимости от нее разрабатывается терапия, контролируется процесс формирования иммунитета. Повторное заражение исключено. Хроническая форма, требующая длительного лечения, возникает в 15% случаев.

Как в анализах обозначается гепатит B?

В международной классификации возбудители болезни обозначаются буквенными символами. Возбудитель гепатита вида В – HBV, на русском языке – ВГВ. Его присутствие в крови выявляют:

• по промежуточному белку HBеAg, он содержится в оболочке вируса;
• ядерному геному HBcAg, он появляется при активном делении HBV.

Эти символы встречаются в бланках.

Как пишут гепатит Б в анализах, когда в пробах находится вирус? В графе делается отметка «положительный», а рядом з буквенный символ HBеAg или HBcAg. В количественном анализе указывается числовой показатель в единицах измерения «копий/мл».

Какие анализы крови сдают при гепатите В и их расшифровка?

Заподозрить возбудитель можно по общему и биохимическому анализу крови. Печень выполняет очистительную функцию, при нарушении ее работы концентрация компонентов крови меняется. Факт присутствия гепатита Б в крови устанавливают маркерами, выявляющим гены ДНК-Серологическая проба выявляет вид возбудителя. Расшифровка анализа на гепатит В под силу медицинским работникам. Антигены и антитела встречаются в различных комбинациях в зависимости от фазы болезни, степени ее тяжести, состояния иммунитета.

Маркеры гепатита

На молекулярном уровне тестированием выявляются компоненты крови, появляющиеся в ее составе при заражении вирусом. Этот анализ крови на гепатит позволяет определить тип возбудителя. Для вида В характерны особые антигены и антитела. По ним специалистами определяется фаза течения болезни. Например, наличие антител IgM говорит об острой фазе заболевания, IgG появляются в процессе формирования иммунитета. Другие маркеры выявляют антигены и антитела разных типов, все они характерны для инфекции. На бытовом уровне достаточно знать, как в анализах обозначают гепатит В:

• Anti-HBс-total или anti-НBcore-total – присутствие антител к HBV типа IgM и IgG;
• HBs или Hepatitis B surface Antigen – австралийский антиген, характерный для HBV;
• HBeAg и HBcAg – антигены HBV, свидетельствуют о делении вируса в клетках печени;
• Anti-HBе и Anti-HBs – вид антител, вырабатываемых иммунитетом при инфицировании или после вакцинации.

ПЦР на гепатит В

Анализ методом ПЦР полимеразной цепной реакции позволяет выявить возбудитель. Он виден по качественному показателю: положительный говорит об инфицировании пациента. Количественная оценка указывается в числовом значении. HBV-DNA – показатель вирусной нагрузки. По нему определяют, борется ли организм с инфекцией, правильно ли выбран противовирусный препарат.

Биохимический анализ крови при гепатите В

Когда печень поражена вирусом, меняются показатели, возрастает:

• концентрация ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), они появляются после разрушения гепатоцитов;
• содержание ГГТ (гамма-глутамилтрансфераза), характерный признак интоксикации организма, вызывающей гибель гепатоцитов.
• уровень билирубина.

Непрямой билирубин вызывает желтушность. Он связывается в паренхиме ферментами энзимами, трансформируется в водорастворимую форму (прямой билирубин). В таком виде выводится по желчным протокам.

Если присутствует гепатит А, анализы выявляют снижение уровня альбумина и общего белка, это говорит об угасании функции паренхимы. Гепатоциты выделяют ферменты, участвующие в белковом обмене, альбумин нужен для связывания билирубина, чтобы он из ядовитой непрямой формы в паренхиме перешел в прямую.

Клинический анализ крови

При подозрении на инфекционную природу заболевания на исследование сдаются моча и кровь. По ОАК определяют содержание эритроцитов и скорость их осаждения, превышение нормы говорит о воспалительном процессе. Уровень тромбоцитов позволяет поставить ориентировочный диагноз, так как при поражении гепатоцитов снижается свертываемость. По результатам общего анализа назначаются дополнительные исследования пациента.

Результаты анализа: положительный, отрицательный и ложноположительный

После проведения тестирования возможны три версии результатов на присутствие антигенов и антител:

1. Если проба на гепатит В положительная, что это значит? В пробах присутствуют антигены HBV. Сначала возрастает концентрация HBеAg, затем появляются HBсAg. Когда начинается процесс выздоровления, появляются антитела, вырабатываемые организмом для борьбы с вирусом. При хронической форме болезни выявляется австралийский антиген. Если результат положительный, определится концентрация возбудителя. Значительное превышение нормы говорит об остром течении заболевания.
2. Если возбудитель попал в организм, но его концентрация ничтожна или антигенов вообще нет в пробах, результат отрицательный. Это говорит, что инфицирования не было. Отсутствие возбудителя при наличии антител говорит о выздоровлении (инфицирование было, но на момент взятия проб пациент здоров).
3. Ложноположительный анализ на гепатит показывает присутствие возбудителя у здорового человека. Такое возможно, если:

• пациент поставил прививку;
• женщина беременная, у нее изменен гормональный фон;
• развивается онкология;
• были погрешности при заборе проб;
• в организме присутствует другая инфекция;
• ослаблен иммунитет;
• имеются заболевания аутоиммунной природы.

Может ли быть ошибка в анализе на гепатит В?

Когда биологический материал обследуется в лицензированных лабораториях, вероятность механической ошибки мала. Она возникает при:

• несоблюдении правил забора проб, их транспортировке, хранении (биологический материал нельзя прогревать до температуры свыше 20 градусов);
• сбое в работе оборудования (отключении электроэнергии, изменение частоты, напряжения и силы тока);
• ошибке или низкой квалификации лаборанта (не исключена путаница проб).

Неправильный результат возможен, если пациент не подготовлен к анализу. Накануне сдачи нужно умерить физические нагрузки, они способны спровоцировать сбой иммунитета. Важно правильно питаться, исключить алкоголь, газировку, копчености, консервации. Нельзя сдавать анализы после лучевой диагностики (рентгена, КТ, МРТ, УЗИ). Пробы берутся на голодный желудок, через 12 часов после последнего приема пищи. Лекарственные препараты, особенно иммуностимулирующие, также способны изменить результаты.