Пцр количественный гепатит в что показывает

Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови. Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя.

Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.

Что такое ПЦР на гепатит В?

Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма.

По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.

ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.

Показания к исследованию

Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.

Исследования проходят:

• реципиенты донорской крови;
• больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
• инфицированные ВИЧ;
• беременные женщины;
• медицинские работники инфекционных отделений;
• лаборанты, исследующие кровь;
• больные с печеночными патологиями;
• все потенциально зараженные;
• люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.

Количественный ПЦР проводится:

• если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
• после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
• при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.

Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.

Виды ПЦР

Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру.

В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.

Количественный ПЦР на гепатит В

Показатель ПЦР количественный при гепатите B характеризует:

• интенсивность деления вируса в клетках печени;
• способность организма противостоять инфекции;
• правильность выбора противовирусных средств.

В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.

По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.

Качественный ПЦР

Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз.

В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты.

Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.

Расшифровка результатов ПЦР на гепатит В

Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.

Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.

Что делать если при ПЦР подтвердили гепатит В?

Важно обезопасить близких:

• отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
• пользоваться индивидуальным полотенцем;
• изолировать раны.

Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )

Гепатит – это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Чтобы с точностью поставить диагноз и выбрать метод лечения врач может назначить целый ряд анализов: от анализа крови на антитела до УЗИ печени. Но, сам гепатит диагностируется по крови, все дополнительные исследования предназначены в основном для понимания насколько вирус повредил печень.

На сеансе доктор может назначить вам метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это наиболее современный и действенный метод изучения гена вируса и его возможностей. Такая диагностика способна установить разновидность заболевания и определить его дальнейшую мутацию в организме больного гепатита.

Что такое ПЦР и его виды

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это более быстрый и точный метод, что направлен на поиск возбудителя заболевания, путем существенного повышения части ДНК вируса гепатита в образце.

Анализ проводится путем забора крови, которую в последующем помещают в специальные реактивы, в которых происходит клонирование клеток. Из одной клетки получается две, и так далее. В итоге появляются сотни ДНК, благодаря которым можно диагностировать возбудитель и выявить вирус на ранней стадии.

ПЦР делится на несколько видов:

• Качественный анализ — распознает гены инфекция в крови. Если при проведении качественного анализа у пациента подтверждается заболевание, то следует провести количественный анализ, устанавливающий степень инфекции. В результате проведения данной диагностики специалисты пишут “обнаружено/ не обнаружено”. “Обнаружено” — говорит о том, что недуг присутствует в организме и выявлен уже его РНК. “Не обнаружено” — свидетельствует об отсутствии в пробе гена вируса, то есть РНК гепатита отсутствует. Но врачи рекомендуют провести повторное исследование через 10 дней.
• Количественный анализ — определяет объем генетического материала инфекции в крови. Такая диагностика помогает установить тяжесть болезни и всю клиническую историю. В результате такого анализа может быть написано только: “Положительно/Отрицательно/Недействительный”. “Положительно” — изображает инфекционную нагрузку. Доктора такой метод диагностики болезни назначают для определения действенности проводимого лечения на 4, 12, 16 и 24 неделях болезни. Если показатель вируса находится в диапазоне 8х10т МЕ/мл, то лечение эффективно, если показатели выше — то нет. “Отрицательно” — ген инфекции не обнаружен. “Недействительный” — такое бывает, если ген вируса обнаружили при качественном, но при этом не выявили при количественном анализе. Встречается подобное при условии, что объем инфекции ниже уровня.

Отличием количественного анализа есть то, что не все его проходят. Качественный — определяет наличие, а количественный — помогает с подтверждением заключения «вирус гепатита», прогнозом протекания болезни и определения хода лечения.

Насколько эффективна терапия, смотрят по числу РНК до и во время лечения. Также с его помощью определяют назначение доз препаратов.

В каких случаях делают количественный анализ

Исследование делается параллельно с качественным анализом после того, как проверка крови на наличие антител к гепатиту (ИФА) показала положительный результат. Делают его несколько раз:

• При первичной диагностике гепатита С до принятия решения о выборе курса лечения;
• Во время лечения заболевания (обычно на 1, 4, 12 и 24 неделе) для определения клинической картины результатов терапии;
• После лечения для определения рецидива.

Количественный анализ является одним из основных видов исследования, на которые врач полагается при выборе методов лечения гепатита. Он служит для того чтобы:

• Понять как сильно организм заражен вирусом, количественное присутствие антигенов в теле.
• Эффективности выбранной терапии.
• Подобрать метод лечения и составить его прогноз.
• Анализ крови, эластометрия, биопсия и другие.

Как правило, его производят до начала излечения. Основными показаниями могут быть:

1. Определение вирусной нагрузки и контроль за антивирусной терапией;
2. Качественный ПЦР нашел антитела гепатита С;
3. Нахождение острого и хронического гепатита С;
4. Существование микст-гепатитов;
5. При планировании лечения;
6. Если качественное исследование еще находит присутствие болезни по прошествии двенадцатой недели терапии.

Подготовка к сдаче крови на количественный анализ

Сдача биоматериала на проведение анализа происходит из вены. Особых рекомендаций по подготовке нет, поэтому актуальны стандартные правила, которые нужно соблюдать перед сдачей крови на исследование:

• Делать это лучше утром натощак (последний прием пищи должен быть не ранее 8-12 часов до сдачи).
• Если забор крови происходит не утром, то на завтрак нельзя употреблять жирную пищу (интервал в 8-12 часов также должен соблюдаться).
• Отказаться от алкоголя, жирной и жаренной еды за 1-2 дня до исследования.
• Не приходить на анализ на следующий день после праздничного застолья.
• Курение запрещено как минимум за час до сдачи биоматериала.
• Перед забором крови стоит посидеть 10-15 минут в спокойствии, чтобы расслабить тело, исключить влияние на результаты напряжения, как физического, так и психологического.
• Если принимаете какие-либо лекарственные средства или им подобные препараты, то анализ можно сдавать спустя 10-14 дней после последнего их приема. (об этом факте необходимо сообщить врачу, возможно он установит иное условие).
• Биоматериал не сдается сразу после выполнения ректального исследования, рентгенографии, физиотерапевтических процедур.
• Первоначальный и повторный анализы лучше сдавать в одной и той же лаборатории (медицинском учреждении), так они разные заведения могут использовать различные реагенты, оборудование, единицы измерения и точность.

Срок выдачи результатов отличается в зависимости от медицинского учреждения и его загруженности. Итоги можно подвести спустя 4-5 часов после начало исследования. Поэтому результат могут выдавать уже на следующий день после забора крови.

Расшифровка результатов результатов количественного анализа на вирус гепатита с и b

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена.

«Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Коэффициенты перевода разные (колеблются примерно от 1 до 5) и зависит от метода, использованного для определения количественного показателя.

В основном на практике принято, что 1 МЕ/мл = 4 копиям на мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему.

При гепатите C нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки(виремии):

Когда человек здоров, норма есть — «не обнаружено». У заболевших людей нормой будет снижение дозы вируса в результатах на логарифмическую единицу, что проявляется убыванием числа нулей в анализе на один (например, с 1*106 МЕ/мл до 1*105 МЕ/мл). Рамки диапазона концентрации вируса, что определяет амплификатор, находятся в границах 1,8*102 — 2,4*107 МЕ/мл.

1. Если при повторном анализа нагрузка вируса является меньшей, чем 8*105 МЕ/мл, то можно утверждать, что терапия идёт в правильном направлении и в борьбе с заболеванием есть успех.
2. Говорить о раннем вирусологическом ответе можно при условии снижения количественного присутствия РНК вируса на третий день лечения. Но вероятность этого находится на уровне 85%.
3. Если же, показатель более 8*105 МЕ/мл, то доктор должен пересмотреть схему лечения и выбрать более подходящую. Соответственно, чем больше уровень, тем сильнее вирус поразил организм и хуже прогноз.

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит б диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

При изменениях результатов анализов вне нормы, это может свидетельствовать о возвращении болезни и размножении вируса.

Плюсы методики

1. Методика ПЦР дает возможность дать заключение и назначить правильное лечение.
2. Быстрота результатов — не требует разграничения и выращивания видов возбудителя. Автоматизация процесса позволяет обрабатывать и изучать материал с получением результата за 4−5 часов.
3. Прямота определения возбудителя — найдя особую часть ДНК, прямо указывает на наличие недуга. Например, ИФА — находит белки-маркеры (продукты жизнедеятельности бактерий), что не дает точного подтверждения наличия болезни.
4. Специфичность — исследуется вещество, характерное только для конкретного возбудителя, что исключает реакцию на ложные совместно-реагирующие агенты.
5. Восприимчивость — может обнаружить самое малое количество вирусов.
6. Универсальность — основывается на нахождении фрагментов ДНК или РНК конкретных организмов. Это дает возможность провести диагностику для любых агентов из одного биоматериала, если другие методы бессильны.
7. Выявляет не только явные, но и скрытые инфекции — эффективен для изучения агентов трудно выращиваемых, не выращиваемых, стойких.

К сожалению, диагностика может быть ошибочной. Очень важно проходить ПЦР в клинике, которая хорошо себя зарекомендовала. Ведь несмотря на то, что ПЦР определяет наличие вируса с точностью до 100%, этот показатель может снизиться до 95%, если учреждение использует устаревшее оборудование или неподходящие реактивы.

При правильной подготовке к анализу в современных лечебных центрах такая вероятность близка к нулю.