Пцр на гепатит с норма не обнаружено

Анализ ПЦР на гепатит С представляет собой внутривенный забор крови с целью определения в ней вируса РНК гепатита на генетическом уровне. Своё название анализ получил исходя из метода исследования.

ПЦР — это полимеразная цепная реакция, с помощью которой в сыворотке крови определяют наличие гепатита С. Итог может быть положительным и отрицательным.

Достоинства метода ПЦР

Этот метод диагностики обладает следующими достоинствами:

  1. Метод ПЦР позволяет определить следующие результаты:
    • наличие вируса РНК;
    • степень радиоактивного излучения;
    • первоначальную генетическую информацию;
    • уникальность и неповторимость генетических данных.
  2. Можно использовать любой необходимый клинический материал:
    • кровь;
    • плазма;
    • моча;
    • биологические жидкости и выделения;
    • мокрота и другие.
  3. Позволяет определить в крови более одного микроорганизма одномоментно, в отличие от других проб.
  4. Получение результата в течение суток.
  5. Упрощённые методы хранения и транспортировки анализа, возбудители определяются даже в мёртвой среде.
  6. Уникальность ПЦР позволяет выявлять определённые микроорганизмы, которые не поддаются ни одной другой пробе.
  7. Высокая степень чувствительности реактивов, тест является самым точным в своём роде.

Особенности качественного анализа ПЦР

Качественный тест проводится с целью определения наличия вируса в крови и получения отрицательного или положительного итога.

Показанием к проведению этого вида диагностики является выявление в организме пациента антител к гепатиту С.

Возможные итоги:

  • обнаружено (положительный);
  • не обнаружено (отрицательный).

Качественный тест не подходит пациентам с очень низким содержанием вируса в крови, так имеет определённую чувствительность.

Результат «обнаружено»

Обнаружить вирус гепатита С можно уже через несколько недель после инфицирования организма, даже при отсутствии антител к этому возбудителю. Такой результат свидетельствует о наличии в организме и кровипациента фрагмента РНК, характерного для гепатита С.

Пациент считается инфицированным данным вирусом и подвергается дальнейшему распространению патогенных клеток в организме.

Результат «не обнаружено»

Такой вариант говорит о том, что в исследуемом образце биологического материала отсутствуют фрагментыРНК специфичные для гепатита С. Это отрицательный результат.

Чувствительность теста не позволяет выявить низкое содержание фрагментов РНК, поэтому итог «не обнаружено» не всегда является правдоподобным.

Особенности интерпретации результатов

Главной особенностью интерпретации результатов является порог чувствительности метода ПЦР.

Он зависит от следующих показателей:

  • точность проведения исследования;
  • вид и качество используемой аппаратуры.

Отмечено, что чувствительность может колебаться в пределах 10-500 МЕ/мл. Из этого следует, что если в организме исследуемого пациента присутствует вирус в концентрации меньше 10 МЕ/мл тест покажетрезультат «не обнаружено». Но это вовсе не означает, что возбудитель полностью отсутствует.

Варианты диагностических систем

На данный момент выделяют следующие варианты систем диагностики:

  1. Если забор крови проводится у пациента, находящегося на противовирусном лечении, то должны быть использованы системы диагностики чувствительностью не меньше 50 МЕ/мл. Для этой цели применяют следующие анализаторы:
    • Cobas Ampicolor ВГС-Теst;
    • РеалБест РНК ВГС.
  2. Чтобы поставить окончательный диагноз «гепатит С» необходимо обнаружить РНК вирус в трёх разных заборах биологического материала. Эти рекомендации разработаны Всемирной Организацией Здравоохранения. Эсли итог трехкратно отрицательный, то диагноз не подтверждается.
  3. На данный момент помимо метода ПЦР существует более точный тест, именуемый ТМА (транскрипционный метод амплификации). Его порог чувствительности гораздо выше, чем в других методикахдиагностики.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

На данном этапе развитии генетики известно несколько видов и вариантов модификации вирусов.

Лабораторная диагностика в нашей стране со стопроцентной точностью может определить следующие генотипы:

  • 1а;
  • 1в;
  • 2а;
  • 2в;
  • 2с;
  • 3;
  • 4;
  • 5а;
  • 6.

Особенности количественного анализа ПЦР

Количественный анализ представляет собой определение вируса гепатита С в организме человека. Во время исследования с помощью ПЦР определяют РНК и вирусную нагрузку в исходном материале. Иначе, можно сказать, что тест позволяет выявить какое количество вирусных клеток находится в биологической жидкости. Для этого вида исследования используется только венозная кровь. Специфической подготовки к тесту нет.

Количественный анализ позволяет вести контроль на уже начавшемся этапе лечения и оценивать его эффективность. Для оценки берут данные теста до начала и во время терапевтических мероприятий. С помощью полученных результатов можно прогнозировать течение болезни.

При успешности выбранного метода лечения через 3 месяца количество РНК должно уменьшиться в несколько раз. Согласно рекомендациям количественный анализ проводят через один, затем через три и шесть месяцев. Последний результат при успешности лечения должен быть отрицательным.

Оценка результатов количественного теста ПЦР

В нашей стране существует 2 возможных варианта оценки результата количественного теста ПЦР:

  • количество копий на миллилитр биологической жидкости;
  • количество международных единиц на миллилитр.

Чтобы получить международные единицы количество копий делят на 4.

Выделяют 2 уровня нагрузки или виремии:

  • высокая с показателем ПЦР выше 800000 МЕ/мл;
  • низкая с показателем ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.
Читайте также:  Гепатит с качественный анализ отрицательный передается детям

Результат количественного теста предусматривает 2 варианта:

  • «ниже диапазона измерений»;
  • «не обнаружено» (отрицательный).

Оценка: «ниже диапазона измерений»

Такое заключение ставится когда количественный тест РНК не обнаружил в исходном материале клетки возбудителя гепатита С. Но вирус всё равно присутствует в крови. Достоверность анализа подтверждаетсякачественным способом, так как порог чувствительности количественного теста может не обнаружить маленькие значения и концентрации возбудителя.

Оценка: «не обнаружено»

Такое заключение ставиться когда в исходном материале во время диагностики не были обнаружены РНКвирусы гепатита С. Это отрицательный результат.

Интерпретация результатов анализа количественного теста ПЦР

С помощью показателя вирусной нагрузки определяют:

  • степень запущенности болезни;
  • насколько заразен больной;
  • эффективность противовирусной терапии.

Чем выше показатели вируса гепатита С в организме, тем опаснее пациент для окружающих людей и тем прогрессивнее его заболевание.

ПЦР на гепатит С является важным методом диагностики, особенно в процессе терапевтических мероприятий. Благодаря полученным отрицательным или положительным итогам можно оценить их эффективность, полностью излечить больного или сократить сроки лечения.

Автор: Петрунина Светлана Сергеевна,
медсестра палаты интенсивной терапии,
специализация-острые отравления, реанимация,
специально для сайта moizhivot.ru

Полезное видео о полимеразной цепной реакции

Гастроэнтерологи в вашем городе

Выберите город:

источник: moizhivot.ru

Качественный анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР на гепатит С определяет наличие или отсутствие ВГС в организме. В лабораторных условиях исследуется структура РНК, в составе которой и будет находиться вирус. В случае выявления вируса С необходимо пройти курс лечения, так как запущенное состояние печени в результате приведет к тяжелым последствиям. Качественный ПЦР проводится и после выздоровления для подтверждения отсутствия антител. Назначается и для профилактического осмотра. При низкой концентрации возбудителя в крови ПЦР (качественный) может ничего не обнаружить, ведь у диагностической системы есть свои пороги чувствительности. В случае начальной стадии болезни или легкой форме проводят ПЦР ультра диагностику на сверхчувствительном оборудовании.

Что такое РНК вирус?

Термином РНК вируса гепатита С (или вирус гепатита С РНК) называется само заболевание печени. Вирус С связывается со здоровой клеткой организма, проникая внутрь. Со временем разносится по всему организму, стоит только ему попасть в кровь. В итоге возбудитель проникает в печень, сращивается с ее клетками и усиленно работает. Печеночные клетки (гепатоциты) работают под его воздействием, претерпевая изменения, и от этого гибнут. Чем дольше вирус С находится в печени, тем большее количество клеток гибнет. Со временем развиваются опасные болезни, приводящие к злокачественному перерождению и летальному исходу.

Заражение печени этой разновидностью вируса может никак не проявляться внешне. Долгие годы или десятки лет зараженный человек чувствует себя абсолютно здоровым, и только случайное обследование чаще всего и выявляет патологию. При сдаче крови на гепатит исследуется часть цепочки РНК (рибонуклеиновой кислоты), входящей в состав человеческого гена (ДНК). Результаты лабораторного исследования не стоит использовать для самолечения, ведь это только показатель. Точную картину и дальнейшую диагностику лучше определит врач.

Когда делается: показания к исследованию

В подтверждение ВГС назначается анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция). Исследования ПЦР помогают найти материал возбудителя в структуре РНК и назначить эффективную терапию. Назначается в следующих случаях:

  • выявление признаков воспаления печени;
  • скрининговые исследования с целью профилактики;
  • обследование контактирующих людей;
  • диагностирование гепатитов смешанного происхождения (определение главного возбудителя);
  • определение уровня активности размножения вируса при хронической форме;
  • цирроз печени;
  • для определения эффективности назначенного лечения.

Исследования ПЦР назначает врач для определения эффективности курса лечения гепатита.

Существует качественный, а также количественный анализ ПЦР. Количественный ПЦР показывает процентное соотношение РНК с носителями вируса в крови, а качественный указывает на вирусное присутствие либо отсутствие. Положительный показатель качества (присутствия РНК гепатита С) нуждается и в количественном исследовании. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита С сопряжена с риском его передачи, то есть заражения окружающих. Низкие показатели количества лучше поддаются лечению. Количество РНК-вирусов в составе крови никак не связано с интенсивностью заболевания. Делается анализ ПЦР и в случае интерфероновой терапии, чтобы назначить продолжительность и сложность лечебного курса.

Особенности качественного ПЦР анализ на гепатит С

Назначается качественный анализ с показателем полимеразной цепной реакции всем пациентам, у кого в крови обнаружены антитела к гепатиту С. Кто переболел и выздоровел, должен повторно пройти тестирование. Рекомендуется сдать анализ и на гепатит В, затем, в случае положительного заключения, и на гепатит D. Также качественно анализированная реакация должна проводиться в комплексе с другими анализами крови. Анализы покажут полную картину вирусного распространения.

Из результатов теста будет виден только положительный анализ на гепатит С или же отрицательный, то есть наличие или отсутствия вируса. Если в выводе стоит «обнаружено», значит, вирус есть и продолжает активно действовать. Обозначение «не обнаружено» говорит об отсутствии вируса или его маленьком количестве. При таком показателе следует учитывать то, что аналитическая чувствительность диагностических систем разная и РНК гепатит С все же может находиться в крови, но не проявиться в анализе.

Читайте также:  Если антитела на гепатит отрицательный

Особо чувствительный метод ПЦР ультра гепатит С выявляет даже в мизерных количествах. Используется гибридизационно-флуоресцентное исследование, которое во много раз выше, чем стандартные системы ПЦР. Метод применяют в нескольких случаях:

  • подозреваются скрытые формы гепатита С;
  • диагностика ПЦР не подтвердила возбудитель, но антитела есть;
  • в случае выздоровления;
  • для выявления ранней стадии заражения.

Расшифровка анализа

Определение РНК вируса гепатита С методом полимеразно-цепной реакции.

На окончательное решение при постановке диагноза влияет ПЦР расшифровка ВГС, в частности, при ультраметоде. Основной недостаток такого исследования — строгое соблюдение стерильных условий для образца и материалов. Небольшое отклонение иногда показывает неточные выводы аналитики, усложнит постановку диагноза и последующее лечение. Анализ ПЦР на определение РНК вируса гепатита не всегда уверенно показывает картину заболевания, иногда допускаются неточности, причем в обе стороны.

Диагностируя вирус гепатита, рекомендуется применять комплексное обследование.

Норма показателей

Отсутствие в результатах исследования антител JgM к РНК вирусному гепатиту С считается нормой при анализе полимеразной цепной реакции. В то же время выводы серологического анализа указывают на присутствие антител к вирусу С и это также в пределах нормы. Качественное определение не показывает интенсивность заболевания, оно только выявляет возбудитель гепатита С в РНК. Такой анализ повторяют и после лечения, чтобы подтвердить действительное выздоровление.

Отклонения

Если антитела JgM к РНК ВГС присутствуют, это говорит о развивающемся заражении. Заболевание при этом протекает остро или хронически, проявляется в разных стадиях. Если зафиксировано уменьшение количества антител, то анализ будет свидетельствовать о достижении результатов лечения в ходе выздоровления. Встречаются в диагностике исключительно редкие случаи ложноположительных выводов. Они обнаруживаются у женщин при беременности и у людей с другими инфекционными болезнями.

источник: InfoPechen.ru

Источник

Содержание

  1. Виды ПЦР
  2. Показания для анализа
  3. Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
  4. Расшифровка результатов ПЦР-исследования
  5. Преимущества ПЦР-анализа
  6. Недостатки ПЦР
  7. Цена ПЦР-анализа на гепатит С

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

Анализ на ПЦР на гепатит

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Виды анализа ПЦР

Рекомендуемые товары

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

  • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
  • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
  • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
  • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
  • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
  • У пациента диагностирован цирроз.
  • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).
Читайте также:  Гепатит с если рнк не обнаружен

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Расшифровка ПЦР

Качественный анализ. Расшифровка

Обнаружено Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаружено Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаружено Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/мл Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*10^5 МЕ/мл Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*10^5 МЕ/мл Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Генотипирование. Расшифровка

Обнаружена РНК определенного генотипа В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита С В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаружено Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

Отрицательный анализ ПЦР и антитела

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

  1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
  2. Загрязнение образца крови.
  3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
  4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Преимущества анализа ПЦР

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Источник