Подготовка к сдаче анализа гепатита с на пцр
Гепатит С переходит из острой фазы в хроническую в 80% случаев. Репликация болезнетворных вирусов в функциональных клетках печени ведет к дисфункции органа. Это обусловлено тем, что паренхиматозная ткань заменяется соединительной. В результате анамнез больного дополняется кровотечениями в ЖКТ, интоксикацией организма, проблемами со свертываемостью крови. Поэтому чем раньше будут диагностированы патологические изменения, тем больше у пациента шансов на выздоровление. Анализ ПЦР на гепатит С считается наиболее точным методом исследования.
Этот диагностический метод разрешено проводить спустя несколько дней после заражения. Полимеразная цепная реакция позволяет достоверно определить генотип и концентрацию вируса в крови. Чтобы сделать анализ, у пациента берут биологический материал, в котором может присутствовать РНК возбудителя.
ПЦР на гепатит С осуществляют в три этапа:
- Качественный анализ – с его помощью определяют генетический материал возбудителя.
- Количественное исследование – таким образом выявляют вирусную нагрузку.
- Генотипирование – на этой стадии врач узнает разновидность заболевания.
Методику разработали около 30 лет назад. Ее применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет обнаружить уникальный генетический материал. Для этого используют праймеры. Так называют короткие нити РНК, которые присоединяют к началу гена.
Анализ ПЦР
В результате количество фрагментов болезнетворного вируса многократно увеличивается. Каждая фаза требует особого температурного режима и определенного промежутка времени. Молекула ДНК формируется в течение 3 минут. Амплификация включает в себя около 30 циклов. ПЦР делают в лаборатории посредством специального оборудования.
Показания к назначению
Сдача анализа ПЦР может быть обусловлена наличием клинических симптомов гепатита С. Процедура показана людям, которые:
- контактировали с инфицированным человеком;
- страдают от острых и хронических заболеваний печени;
- проходят лечение от патологических изменений в паренхиматозной ткани;
- входят в группу риска;
- являются донорами крови и ее компонентов.
ПЦР осуществляют не только при гепатите С. Анализ используют в медицине, биологии, криминалистике. Определение специфических показателей – этап, необходимый для подбора лекарственной схемы.
Преимущества анализа
В схему диагностического обследования включают иммунофлуоресцентный анализ и ПЦР. С помощью первого можно определить концентрацию иммуноглобулинов. Эти вещества вырабатываются защитным механизмом после проникновения болезнетворных вирусов в организм. В отличие от ПЦР ИФА не обладает эффективностью во время инкубационного периода. С помощью полимеразной цепной реакции гепатит С можно выявить в первые 7 дней после инфицирования.
Данное клиническое исследование обладает следующими характеристиками:
- Минимальная вероятность ложного результата.
- Высокая эффективность.
- Специфичность.
- Чувствительность.
- Универсальность.
- Автоматизация процесса.
- Безопасность.
- Скорость получения показателей.
Единственным минусом ПЦР является ее техническая сложность. Это связано с тем, что врачу необходимо подобрать правильный состав нуклеотидов, в функциях которых синтез ДНК. Из-за повышенной чувствительности метода возможно получение ложноположительного или ложноотрицательного результатов.
Чтобы добиться точности значимых показателей, биологический материал тщательно очищают от медикаментозных препаратов и белковых соединений. Для подтверждения результата требуется сравнение ранее проверенных образцов. К факторам, провоцирующим ошибку, причисляют:
Нарушение техники забора анализа
- Нарушение техники забора анализа.
- Изменения в последовательности фрагментов РНК.
- Совпадение синтезируемых нуклеотидов и генов болезнетворных вирусов.
Вероятность получения ложного результата при гепатите С присутствует из-за невозможности определения генетической основы заболевания. ПЦР-диагностика позволяет напрямую выявить возбудителя. С помощью амплификации ДНК происходит обнаружение болезнетворных микроорганизмов в продуктах питания, воде и почве.
Ограничения, касающиеся данного метода, не уменьшают его эффективности и популярности. Клиническое исследование проводят регулярно. Таким образом врач может оценить эффективность принятых лечебных мер. Необходимость в этом возникает из-за того, что вирус гепатита С способен мутировать. Отсутствие положительного эффекта означает адаптацию вируса к применяемым лекарственным средствам.
Подготовка к сдаче
Для того чтобы провести полимеразную цепную реакцию у больного, страдающего от гепатита С, берут венозную кровь. Обычно для изучения требуется две порции биологического материала. Посредством одной делается непосредственно ПЦР, а другую направляют на иммуноферментный анализ.
Кровь для анализа ПЦР берут из вены
Подготовка имеет большое значение. Пациент сдает кровь на ПЦР утром на голодный желудок. За несколько дней до процедуры придется отказаться от вредных продуктов питания, спиртных напитков, никотина и наркотиков. Больному следует избегать половых контактов, чрезмерной физической и эмоциональной нагрузки. Бассейн и спортзал оказываются под запретом. Подготавливаться придется в любом случае.
Существуют особые указания относительно медикаментозных препаратов. Это касается антибиотиков и антидепрессантов. Женщины, у которых начались менструации, должны отсрочить сдачу анализа на гепатит С. Кольпоскопия также является поводом для отказа от процедуры.
Перечисленные правила довольно просты. Благодаря им, можно добиться максимальной достоверности данного диагностического метода. Расшифровывать результаты должен специалист. Самостоятельно интерпретировать их у пациента вряд ли получится.
Процесс сдачи анализа
ПЦР-диагностику осуществляют следующим образом:
Кровь помещают в термостат
- Сначала забирают биологический материал. Кровь помещают в простерилизованные приспособления. Необходимый объем не превышает 1-1,5 мл. Держать кровь и ее компоненты следует не дольше 24 часов. Температура хранения не должна превышать 4 градусов по Цельсию.
- После начинают клиническое исследование. Подготовленную кровь помещают в термостат вместе с амплификационной смесью. Обычно требуется не более 25 мл специального состава. Амплификация проводится в автоматическом режиме на протяжении нескольких часов.
- Параллельно делают контрольные анализы. Для этого используют биологические материалы, взятые у здорового человека. Это поможет избежать ложных результатов.
- Расшифровка и регистрация показателей. Генетический материал обнаруживают с помощью бромистого этидия. Благодаря специфическому воздействию, фрагменты ДНК высвечиваются. Наличие (отсутствие) вируса выявляют ориентируясь на данные таблицы.
Расшифровка результатов
Определить значение полученных показателей может только инфекционист и гепатолог. Анализ ПЦР вводят диагностический комплекс вместе с биохимическим исследованием крови, УЗИ, ИФА и биопсией. Диагноз ставят на основании всех результатов. Порядок расшифровки анализов зависит от этапа диагностического обследования.
Ультразвуковая диагностика
На первой стадии ПЦР положительным результатом теста считается обнаружение фрагментов ДНК болезнетворного вируса. При проведении количественного анализа определяют уровень вирусной нагрузки. Она может быть низкой (менее 8*10^5 МЕ/мл), средней (от 8*10^5 МЕ/мл), высокой (больше 2,4*10^7 МЕ/мл). Нормой (отрицательным результатом) считается отсутствие специфических антител и частиц вирусной РНК. На этапе генотипирования об инфекционном заражении свидетельствует РНК определенного генотипа.
При получении положительного результата больному назначают эффективную терапевтическую схему. При этом обязательно учитывают информацию о наличии вируса в крови, степени его активности и генотипе. Цена процедуры зависит от методики тестирования, вида биологического материала. К общей стоимости могут быть добавлены затраты за забор крови или других жидкостей. Последнее обусловлено тем, что возбудителя часто обнаруживают в урине, каловых массах и сперме.
Источник
Автор:Татьяна
Анализ ПЦР гепатит С – это исследование, основной целью которого является идентификация генетического материала возбудителя. Анализ выявляет возбудитель заболевания методом использования полимеразной цепной реакции. Данная диагностика отличается высокой степенью точности, специфичностью к выявлению отсутствия или наличия вирусной инфекции.
Суть диагностики
Чтобы провести ПЦР анализ на определение вируса гепатита С у пациента берётся венозная кровь, которая потенциально содержит в себе РНК (рибонуклеиновая кислота) HCV искомого вируса.
Тест ПЦР на гепатит С подразумевает порядок действий, когда в частицы крови пациента добавляют:
- праймеры (короткие искусственно-синтезируемые участки необходимо гена);
- специальный фермент (РНК-полимераза).
После забора биологический материал отправляется на исследования в лабораторию. Одна порция крови нужна для проведения непосредственно ПЦР анализа, вторая – отправляется на исследование по методу ИФА. Фермент способен за короткое время увеличить численность генетического материала вируса возбудителя. В специальном аппарате проводится несколько циклов тепловых и охлаждающих процессов. На конечном этапе полученный материал сопоставляется с генами вируса и делается заключение о наличии или отсутствии патологии в организме пациента.
Суть и проведение ПЦР анализа в лаборатории. Снято каналом SiberianMedicalLaboratory.
Виды исследования
Существует 3 вида диагностики, дающие возможность определять наличия вируса гепатита С в организме человека:
- генотипирование;
- качественный;
- количественный.
Качественный метод
Диагностика гепатита С качественным методом применима для пациентов, у которых в анализе крови определены антитела к вирусу. В случае наличия острой фазы РНК ВГС подобные диагностические мероприятия позволяют определить наличие заболевания за 1-2 недели после инфицирования. В этот период антитела к гепатиту С могут быть ещё не выработаны.
Количественный метод
Количественный метод диагностики используется для определения концентрации вируса в образцах крови. Подобный тест на виремию (степень концентрации) даёт возможность точно определить количество единиц вирусной РНК. Конечный результат выражается в соответственном объёме. Если речь идёт о количественном анализе, тогда показатели измеряются в 1 мл (1 куб. см).
Параметр вирусной нагрузки означает уровень инфекционности заболевания, то есть отображает степень «заразности» пациента. На практике это значит, что чем выше концентрация вируса в крови, тем больше шансов у пациента заразить окружающих гепатитом С. Количественный метод исследования также позволяет установить качество и результативность проведённого лечения.
Генотипирование
Генотипированием выявляют мутации возбудителя заболевания. Перед назначением лечебного плана определяют генотип вируса: от этого зависит качество и продолжительность терапии. Так, например, при лечении заболевания I-типа эффективность составляет 60%, в случае II, III-типа – около 80%.
Достоинства анализа ПЦР на гепатит
Среди основных достоинств проведения процедуры выделяют:
- Возможность ранней диагностики. ПЦР анализ способен определить наличие вируса на ранних стадиях заражения.
- Низкая погрешность результатов. Исследуемый биологический ресурс позволяет диагностировать участок генетического материала, который является характерным только для одного типа вирусной инфекции. Это обстоятельство позволяет не допустить ложных результатов диагностики.
- Высокая степень чувствительности. Анализ ПЦР способен выявлять РНК вируса в небольших количествах, что также дает возможность вовремя отследить скрытые инфекции.
Показания к проведению
Сдавать анализ ПЦР на гепатит C нужно, если есть:
- наличие контактов с больными людьми, которое могло бы привести к заражению;
- симптомы заболевания цирроза печени (увеличение селезенки, нехарактерные изменения размеров печени, обнаружение на животе венозного сплетения под кожей);
- положительные результаты ИФА;
- увеличение активности АСТ и АЛТ (проявляется в биохимическом анализе крови);
- необходимость контроля ведения антивирусной терапии;
- проведение начального этапа лечения для необходимости установления вирусной нагрузки;
- проведение завершающего этапа терапии для исключения возможных рецидивов;
- наличие у пациента гепатита В, чтобы исключить вариант развития смешанного поражения печени.
Как подготовиться к сдаче крови для ПЦР-исследования
Подготовка к ПЦР анализу включает следующие рекомендации:
- забор крови проводится утром;
- анализ проводится натощак, поэтому желательно выдержать перерыв между последним приёмом пищи 8-10 часов;
- за несколько дней до проведения диагностики следует исключить жирную, острую и жареную пищу, алкогольные напитки и курение;
- за сутки до анализа следует воздержаться от тяжёлых физических нагрузок, исключить занятия в спортзале или бассейне.
Результаты анализа: нормы и отклонения
Сам анализ делается недолго, а расшифровывает результаты ПЦР на гепатит С высококвалифицированный специалист гепатолог или инфекционист. На основании результатов анализа пациенту выставляется диагноз.
Чтобы правильно расшифровать результаты обследования, учитывают показатели:
- биохимического анализа крови;
- данные ультразвукового исследования;
- результаты биопсии.
Расшифровка количественного анализа
При получении результатов количественного анализа ПЦР учитываются следующие показатели:
| Показатель | Характеристика |
| Не обнаружено | Норма здорового человека. Данный показатель обозначает, что в организме человека не присутствует генетический материал вируса или его концентрация ниже порога чувствительности. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Значение подобных результатов изучается с повышенной осторожностью, так как необходимо соотношение информации с другими видами диагностирования. Такой результат требует повторного проведения процедуры, ввиду того, что концентрация РНК возбудителя ниже порога количественного определения. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Вирусная нагрузка данного параметра считается низкой. Снижение концентрации вируса говорит о том, что лечебные мероприятия проводятся эффективно. |
| Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокая вирусная нагрузка, следует пересмотреть подход к лечению. |
| Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | В этом случае концентрация РНК возбудителя достигает запредельных отметок, поэтому делать выводы об уровне вирусной нагрузке нет смысла. Чаще всего при таком результате назначается повторный тест с разведение частиц крови. |
Расшифровка качественного анализа
В заключении качественного анализа ПЦР на гепатит С могут присутствовать следующие данные:
| Показатель | Характеристика |
| Обнаружено | Если зафиксирован положительный ответ, это значит, что в исследуемом образце крови присутствует генетический материал вируса. Простыми словами – подтверждается факт заражения человека. |
| Не обнаружено | Если в конечном итоге выходит отрицательный ответ, значит, заражение не произошло или количество РНК вируса недостаточно для определения чувствительности. |
Расшифровка генотипирования
При получении анализов на генотипирование вируса можно обнаружить следующие варианты показателей:
| Показатель | Характеристика |
| Обнаружена РНК конкретного генотипа | Данный результат показывает то, что в биологическом материале пациента найден вирус гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Обозначается каждый генотип цифрой и латинской буквой. |
| Обнаружена РНК вируса гепатита С | При подобных результатах назначается повторное исследование, так как данный параметр обозначает наличие вируса гепатита, который не относится к 1,2,3 типу. Подобные случаи считаются редкими в России. |
| Не обнаружено | Данный результат считается нормой и свидетельствует о том, что человек здоров или концентрация вируса ниже порога определения. |
Ложноположительные и ложноотрицальные результаты
Ложно положительные и ложноотрицательные результаты ПЦР исследования получаются в таких случаях:
- при недостаточной квалификации медицинского персонала, которые проводят диагностику;
- ошибки в работе лаборантов, когда кровь транспортируется в лабораторию ненадлежащим способом или биоматериал загрязнён;
- случаи ненамеренной подмены проб крови;
- нарушения в процессе подготовки биологического материала;
- воздействие на исследуемые образцы повышенной температурой.
Среди других причин получения неточных результатов выделяют такие:
- кровь пациента содержит остаточные частицы гепарина и прочих коагулянтов;
- в образце присутствуют вещества-ингибиторы, способствующие замедлению или остановке полимеразной цепной реакции.
Где сделать ПЦР-диагностику и сколько стоит?
Подобные исследования проводятся:
- в частных медицинских центрах;
- в КДВ;
- в государственных поликлиниках.
Государственные поликлинники проводят анализ ПЦР на гепатит С бесплатно на основаниях наличия у пациента направления от гепатолога или инфекциониста.
Диагностика заболевания на платной основе проводится во всех крупных городах России.
Стоимость диагностики зависит от:
- качества оборудования клиники;
- скорость выполнения работы;
- типа теста.
Цена на изучение крови методом ПЦР колеблется в следующих пределах:
- качественный ПЦР анализ — 600-900 рублей (в Москве и Санкт-Петербурге);
- качественный ПЦР анализ — 300-800 рублей (регионы);
- определение вирусной нагрузки — 17000-22000;
- определение других видов инфекции количественного анализа 1200-10000 рублей.
Фотогалерея
Загрузка …
Видео
Ошибочные анализы на гепатит С. Снято каналом Гепатит С побежден.
У Вас остались вопросы? Специалисты и читатели сайта HROMOSOMA помогут вам, задать вопрос
Источник
Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.
Содержание
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Три вида ПЦР анализов
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Результат анализа ПЦР на гепатит С
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.
Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.
Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.
Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.
Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.
ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:
- высокая чувствительность – 97-98%;
- гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
- быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).
Три вида ПЦР анализов
Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.
Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.
Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.
Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:
- в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
- часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
- вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.
Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:
- исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
- разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
- накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
- за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
- до момента забора крови не рекомендуется курить.
Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.
Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).
Результат анализа ПЦР на гепатит С
Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.
Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.
Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.
Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.
Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.
Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.
Источник
