Пробирка для крови на гепатит

Гепатит C – инфицирование печени, вызванное вирусом Flaviviridae HCV, состоящим из одной или нескольких молекул РНК. Как правило, проводится ряд диагностических мероприятий для установления у пациента гепатита C. ПЦР является анализом, точно подтверждающим диагноз. Часто заключение предоставляется врачами, когда у больного уже присутствуют первые признаки заболевания.

Что такое гепатит C

Поражение печени вирусной инфекцией, передающейся через кровь или половым путем, в медицине называется гепатитом С. Возбудителем является РНК-содержащий вирус неклеточных инфекционных агентов семейства Flaviviridae. Инфекция может долго находиться в организме, никак себя не проявляя. Поэтому лишь при обнаружении микроорганизма с помощью исследования крови методом ПЦР РНК гепатит C (как диагноз) считается обоснованным.

ПЦР количественный гепатит С

Флавивирус не продуцируется в искусственно выращенных изолированных клетках. В процессе размножения инфекционный агент создает иммунологически отличающиеся модификации. Эти факторы мешают организму давать соответствующий защитный ответ, а у специалистов возникают трудности с разработкой действенной вакцины.

Передается вирус парентеральным способом. Для заражения необходимо его попадание в достаточном количестве непосредственно в кровь.

Какие анализы сдают при гепатите C

Вирусные патологии печени диагностируются с помощью лабораторных тестов. Клинические исследования гепатита C проводят методом изучения чужеродных и опасных для организма антигенов или белковых соединений (антител) в биоматериале пациента, в основном в крови.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод базируется на выявлении в крови антител lgM. Иммуноглобулин считается наиболее крупным и представляет собой пентамер. Он проявляется при первичном защитном ответе лимфоцитов на неизвестное чужеродное вещество.
Радиоиммунологический анализ (РИА) – количественное определение иммуноглобулина lgM при помощи помеченного радиоактивного изотопа йода.
ПЦР гепатита C – определение в биоматериале (крови) вирусной РНК. Данный анализ достоверно подтверждает диагноз.

Исследование на иммуноглобулин G не является достоверным. Его наличие в сыворотке крови может говорить не только о присутствии флавивируса, так и о другой перенесенной инфекции, имеющей такого же возбудителя.

препарат амплификатор

Что определяет анализ ПЦР

Полимеразная цепня реакция (ПЦР) базируется на установлении участков ДНК, специфичных для некоторых болезнетворных микроорганизмов в образцах материала для исследований (эпителий, кровь). Анализ дает возможность определить патогенные мельчайшие организмы (вирусы) посредством выявления их РНК либо ДНК в биологическом материале.

Лабораторная процедура по выявлению антител ПЦР гепатита C проводится в 3 этапа:

Выделение. Исследуемый биоматериал очищают от примесей и получают ДНК в подвижной фазе хроматографической колонки.
Амплификация. Анализ проводят в приборе-термостате амплификаторе. Он с определенной цикличность нагревает и охлаждает пробирки. За одно исследование производится до 35 циклов. В результате получается достаточное количество фрагментов ДНК для выявления, идентификации и оценки возбудителя.
Электрофорез. Полученные фрагменты помещают в гель с разной насыщенностью агарозы и проводят электрофорез. Полученную электрофореграмму анализируют на компьютере.

Применяют не только стандартное исследование ПЦР, но и анализ Real Time PCR. Это диагностика в реальном времени. Метод позволяет проводить качественный и количественный анализ, что дает возможность выявить формацию и динамику болезни, а также назначить терапию, направленную на ликвидацию причины происхождения патологии. Также ПЦР в реальном времени применяют для определения чистой культуры инфекционных агентов (генотипирование).

забор крови

Как сдается анализ на полимеразную цепную реакцию

Для диагностики может быть использована любая биологическая жидкость человека. Биоматериалом для исследования на гепатит C обычно является кровь.

Забор образцов для диагностики проводят в процедурном кабинете. Для взятия крови используют одноразовые пробирки с веществом, угнетающим ее свертываемость. Мероприятия, сориентированные на предотвращение распространения возбудителей инфекции, помогают избежать попадания другого штамма микроорганизмов извне.

Кровь на ПЦР гепатита C сдают утром натощак. Пробу стараются сразу доставить в лабораторию. Допускается хранение биоматериала при температуре от +4 до +8 градусов Цельсия. Контейнеры маркируют и снабжают направлением. Результаты анализа можно получить через 48 часов, иногда раньше.

Виды ПЦР

Спектр применения полимеразной цепной реакции достаточно широк. Инфекционисты определяют с помощью ПЦР гепатит B, заболевания, передающиеся кровососущими насекомыми, СПИД, туберкулез. В онкологии с помощью данного метода выявляют опухолевые клетки на ранних стадиях.

Существует около четырнадцати видов анализа. Использование того или иного вида зависит от сферы применения и конечных результатов анализов. Некоторые разновидности ПЦР незаменимы там, где результат необходим в течение 20 минут.

Для диагностики гепатита C используют 3 вида полимеразной цепной реакции:

Качественная оценка может быть либо положительной указывающей на присутствие в организме инфекции, либо отрицательной – отсутствие флавивируса.
ПЦР в реальном времени (количественный анализ) – определяет количественное РНК возбудителя в МЕ/мл.
Генотипирование – анализ, выявляющий разновидность (генотип) вируса.

Для точного выявления и определения заболевания с последующим назначением оптимальной терапии применяют все три вида исследований.

пробирки с биоматериалом

Качественный анализ полимеразной цепной реакции

Анализ назначают в обязательном порядке всем, у кого ИФА выявил антитела к HCV. ПЦР качественный на гепатит C является стандартным тестом на чувствительность. Метод направлен лишь на обнаружение, никакого подсчета или выделения других веществ не производится.

Для определения антител используют специальные тест-системы с порогом чувствительности не ниже 50 МЕ/мл. При обнаружении антител назначаются другие уточняющие анализы. При отрицательном результате дальнейшие исследования не проводятся.

В некоторых случаях ложноотрицательный результат может быть следствием некомпетентности сотрудников лаборатории или низкокачественными реагентами. Для страховки лучше пересдать анализ в другом месте.

ПЦР гепатита С

Количественный ПЦР

Метод применяется для прямого исследования числа флавивируса за один цикл реакции. Для точного измерения используют фрагменты ДНК, применяемые для гибридизации, или флуоресцентно-меченые праймеры. Существует экономичный вариант детекции, с применением красителя SYBL Green. Красящее вещество вклинивается в небольшую бороздку ДНК и при облучении лазером окрашивается в синий цвет.

Концентрация определяется аппаратом-амплификатором в цифровом эквиваленте. В разных лабораториях показатели могут немного отличаться, поэтому их необходимо сравнивать с референтными показателями.

Количественный ПЦР гепатита C помогает подобрать оптимальную дозировку лекарственных средств и определить продолжительность терапии. Частота проведения исследования зависит от стадии заболевания, вида генотипа и назначенного курса лечения.

Определение генотипа

Вирус гепатита C имеет изменчивое генетическое строение. Многочисленные модификации не дают возможность создать вакцину, а также затрудняют терапию. Всего выявлено и зафиксировано 11 генотипов и 100 подтипов. В странах бывшего СССР у лиц, инфицированных гепатитом C, ПЦР выявляет в основном генотипы 1b и 3.

При наличии любого из генотипов может резвиться цирроз или рак печени. Поэтому так важно обнаружить вирус вовремя.

Для некоторых пациентов определенные лекарства, предназначенные для борьбы с HCV, являются токсичными. Генотипирование позволяет определить разновидность белка и назначить эффективное лекарственное средство.

В результатах анализов на типирование стоит цифра со строчной латинской буквой, указывающая на генотип вируса. В случае если HCV обнаружен, но не типируется, это означает, что у человека несвойственный для определенной географической зоны генотип.

ПЦР гепатит б

Результаты анализа

Расшифровкой результатов занимается врач. Только данные нескольких исследований (в совокупности с анамнезом и осмотром) могут дать общую реальную картину истории болезни.

У здорового человека тест на качественную реакцию в биоматериале ничего не обнаруживает. Если указано значение «обнаружено» – инфицирование подтверждается, а пациент нуждается в дальнейшей диагностике с последующим лечением.
Определение числа возбудителей инфекции дает возможность оценивать вирусную нагрузку на организм. В норме количественного ПЦР гепатита C возбудитель не обнаруживается. Показатель до 8*10^5 расценивается как низкая нагрузка и при грамотной терапии гарантирует благоприятный исход. Более высокие значения требуют углубленного обследования и определения длительной терапии, за положительный исход которой никто не ручается.
Положительные результаты генотипирования указывают, какой именно генотип распознан. Отрицательный результат свидетельствует либо об отсутствии флавивируса, либо о наличии генотипа, который нехарактерен для данного региона.

На что указывает положительный анализ ПЦР

Любое серьезное заболевание требует комплексной диагностики. Положительный ПЦР гепатита C подтверждает диагноз, но прогнозы можно делать только после дополнительных лабораторных и инструментальных исследований.

Обнаружение вируса не дает полного представления о патологии. Необходимо выявить его тип и характер, определить, как он влияет на печень и другие органы. Выявление HCV на ранних стадиях часто имеет благоприятный терапевтический исход.

Отрицательный ПЦР при положительном ИФА

При наблюдении симптомов, свойственных поражениям печени, есть большая вероятность того, что инфекции уже попала в организм. Поэтому следует обратиться к гепатологу или инфекционисту. Специалист в ходе расспросов соберет анамнез и назначит необходимое обследование.

Если по результатам исследований на гепатит C ПЦР отрицательный, а иммуноферментный анализ положительный, то это говорит о наличие в крови антител к флавивирусу. Обычно так бывает, когда инфекция попала в организм в небольшом количестве, поэтому иммунитет справился с ней самостоятельно. Но такие люди все равно считаются инфицированными и обязаны проходить обследование каждые 6 месяцев. Если с такими результатами анализов человеку отказывают в бесплатном медицинском обследовании, для сохранения здоровья лучше сдать ПЦР платно, а при положительных показателях обратится к специалисту для постановки диагноза и назначения лечения.

Достоинства и недостатки метода

При установлении диагноза «гепатит C» ПЦР имеет ряд преимуществ:

Обнаружение возбудителя на ранних стадиях.
Точное определение вируса.
Оперативность проводимой диагностики.
Минимальная вероятность ошибки.
Высокая чувствительность.

Недостатки метода:

Высокая стоимость анализа. Для проведения теста необходимы дорогостоящее оборудование, реагенты и высококвалифицированные медицинские сотрудники. Все вместе складывается в немалую сумму.
Жесткие требования к транспортировке биоматериала.

кровь на ПЦРгепатит С

Лечение воспаления печени

Анализ ПЦР на вирус гепатита C считается основополагающим для постановки диагноза, но не окончательным. Чтобы терапия была эффективной, требуется ряд дополнительных лабораторных и инструментальных исследований. После прохождения всех диагностических мероприятий врач назначает лечение:

Прописывается диета №5.
Спиртное полностью исключается.
Совместный прием «Интерферона» и «Рибавирина» в течение 25 дней.
Курсовой прием гепапротекторов «Эссенциале», «Карсил», «Фосфоглив».
В особых случаях применяют дискретный плазмаферез.

Медикаменты, назначенные гепатологом, применяют регулярно, не меняя дозировку. Продолжительность приема препаратов определяется врачом после сдачи контрольных анализов. После завершения курса терапии необходимо посещать доктора каждые полгода.

ПЦР-диагностика позволяет выявить возбудителя гепатита C на ранних сроках. Это способствует эффективности терапии и недопущению перехода заболевания в такие опасные формы, как цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

Источник

Гепатиты представляют собой серьезные заболевания, которые при неблагоприятном стечении обстоятельств могут приводить к раку печени, циррозу или печеночной недостаточности. В основе патологии лежат воспалительные процессы, обусловленные инфекционными или токсическими поражениями печени. Распространению гепатитов в обществе способствуют наркомания, алкоголизм, беспорядочные половые связи и низкое качество медицинских услуг.

Ключевым фактором в успешном лечении заболевания является его ранняя и точная диагностика при помощи лабораторных исследований крови. Рассмотрим основные виды анализов, которые необходимо сдать, чтобы подтвердить или опровергнуть наличие гепатита.

Какой анализ сдать? Маркёры вирусных гепатитов

Анализ может сдать любой желающий. Также пройти обследование рекомендуется лицам, у которых наблюдаются желтушность, изменение цвета экскрементов, слабость, тошнота, утрата аппетита, лихорадочные состояния, суставно-мышечные боли, тяжесть в правом подреберье. Если клинические симптомы вирусного гепатита отсутствуют, основанием для анализов являются повышенные концентрации внутриклеточных ферментов АсАт и АлАт, холестаз (уменьшение выделения желчи в двенадцатиперстную кишку) и контактирование с инфицированными гражданами. Обязательно сдавать кровь должны сотрудники медицинских учреждений, больные, которым предстоят операции, доноры крови и беременные женщины.

Гепатит A

(болезнь Боткина) передается через жидкости организма, продукты питания, воду и предметы быта. Патология может протекать в острой, подострой и субклинической (бессимптомной) формах. Она считается самой доброкачественной из всех форм инфекции и практически не вызывает хронических поражений печени. Смертность составляет менее 0,4%. Чаще всего симптомы патологии исчезают за 2 недели, а период восстановления функций печени не превышает 1,5 месяцев. Заболеваемость в странах СНГ составляет 20–50 человек на 100 000 населения.

Для диагностики проводятся следующие качественные методы исследования сыворотки крови:

определение специфичных участков РНК вируса в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени – обеспечивает 100% точность результата;
иммуноглобулины класса М–IgM обнаруживаются при первых клинических симптомах и далее 90–180 дней вплоть до полного выздоровления;
антитела класса G–IgG начинают вырабатываться во время болезни и остаются в организме навсегда. Исследование сыворотки крови на данные маркёры гепатита А может проводиться в целях контроля проведенной вакцинации, поскольку эти антитела показывают наличие иммунитета к заболеванию.

Гепатит B

вызывается вирусом Hepadnaviridae, передается половым путем или через кровь. Протекает в острой и хронической формах. Он приводит к значительному поражению печени, а нередко – к циррозу или раку. В данный момент около 300 млн людей на планете являются носителями этой инфекции. Для уточнения диагноза следует сделать такие тесты:

качественные или количественные анализы на антиген HBsAg, а также антитела Anti-HBc IgG, которые есть у больных, выздоровевших лиц и здоровых носителей. Содержание HBsAg в плазме крови у здорового человека не превышает 0,05 МЕ/мл;
качественные тесты на белок HBeAg и антитела Anti-HBc IgM, свидетельствующие об остром течении болезни;
определение ДНК вируса методом ПЦР в режиме реального времени.

Гепатит C

считается самым распространенным и наиболее опасным среди всех разновидностей заболевания. Часто он протекает бессимптомно на начальных стадиях и обнаруживается только при появлении таких серьезных осложнений, как цирроз или карцинома. Вирус передается преимущественно через жидкости организма и плохо поддается лечению. Его носителями в настоящее время считаются 500 млн людей.

Положительный анализ на гепатит С предполагает наличие соответствующего РНК-вируса в крови больного. Присутствие Anti-HCV и HCV IgG в организме, выявляемое качественными методами тестирования, говорит об острой стадии болезни. Количественные методы определения РНК методом ПЦР используются для оценки результативности терапии. Для генотипирования вируса и выбора тактики лечения необходимо исследование на интерлейкин-28-бета. Для проверки скрининговых анализов при положительном результате используется тест на антитела – рекомбинантный иммуноблот для выявления IgG-антител к различным антигенам вируса гепатита С.

Гепатиты D, G

. Активность вируса гепатита D зависит от наличия в организме вируса типа B. Заболевание протекает очень тяжело. Если заражение двумя типами вируса происходит одновременно, то у больного диагностируется патология в острой стадии, если же дельта-вирус (гепатит D) развивается на фоне уже имеющейся печеночной инфекции, то отмечается обострение заболевания. Гепатит G предположительно активизируется при наличии других типов инфекции, сам же он не вызывает активную форму болезни.

Лабораторное тестирование предусматривает выявление РНК-цепочек вирусов, а также выявление антител класса IgM, позволяющих отличить острую форму заболевания от хронической. Эти исследования являются качественными.

Гепатит E

по своему течению имеет сходство с вирусом типа А. Он передается через жидкости организма, сопровождается выраженным болевым синдромом и может принимать молниеносные формы. Эта патология особенно опасна для беременных женщин. У них болезнь может осложниться острой печеночной недостаточностью и энцефалопатией. В 20–30% случаев заболевание заканчивается смертью беременной. Если при лабораторном тестировании у пациента обнаруживаются антитела класса IgG и IgM, то это свидетельствует о патологии в острой стадии.

Подготовка к сдаче анализа и процедура забора крови

Биоматериал необходимо сдавать строго натощак. Также в течение суток перед посещением лаборатории следует воздерживаться от употребления жирной пищи и алкоголя. Результаты качественных тестов в большинстве случаев готовы уже через четыре часа после забора крови. На проведение количественного исследования может уйти до одного рабочего дня, не считая дня сдачи анализов.

Расшифровка результатов анализов на гепатит

Особенности расшифровки ответов зависят от типа исследования. Качественный тест позволяет установить факт наличия или отсутствия инфекции, а количественный дает возможность определить конкретную концентрацию исследуемого вещества. В некоторых случаях позитивным знаком является полное отсутствие антигена или белка, а в некоторых – содержание вещества в количестве ниже установленного уровня.

«Отрицательный» результат

Формулировка «анализ на гепатит – отрицательный» в бланке анализа свидетельствует об отсутствии заболевания. Подобный результат можно получить при прохождении качественного исследования методом ПЦР, объектом которого является РНК- или ДНК-цепочка вируса. Отрицательный ответ при проведении количественного иммунологического анализа говорит об отсутствии положительной реакции на наличие антигенов соответствующего типа. Но иногда при серологических (иммунологических) исследованиях в бланке анализов пишут величину ниже определенного значения, и в таком случае результат количественного теста считают отрицательным. Например, для вируса гепатита B пороговый уровень содержания антигена HBsAg в сыворотки крови составляет 0,05 МЕ/мл (единиц на миллилитр), когда показатель ниже – результат отрицательный, выше – положительный. На самом деле концентрацию ниже 0,05 МЕ/мл оборудование просто не может обнаружить, но, если де факто HBsAg присутствует в сыворотке крови в сколь угодно малом количестве – это означает инфицирование. Нормой является полное отсутствие как ДНК- или РНК-цепочек вирусов, так и их антигенов в биоматериале. А вот наличие антител к антигенам при отсутствии последних свидетельствует о том, что у вас выработан иммунный ответ на определенный вирус, либо вы переболели вирусным гепатитом ранее или прошли вакцинацию.

Анализ на гепатит «положительный»

Если результаты оказались положительными, то пациенту рекомендуется повторно пройти обследование, так как в некоторых случаях ложноположительный ответ может объясняться нарушением техники проведения тестирования, некачественными реактивами, неправильной подготовкой к процедуре (проведением теста после приема пищи), чувствительностью и специфичностью метода исследования, точностью анализаторов. Позитивный результат также может наблюдаться у человека, который некоторое время назад переболел острой формой вируса или является его здоровым носителем.

Согласно постановлениям Главного государственного санврача РФ от 22.10.2013 г. № 58 и от 28.02.2008 г. № 14, а также приказу Управления Роспотребнадзора по г. Москве от 01.10.2008 г. № 122 сведения о положительных результатах исследований на маркёры вирусных гепатитов передаются в ОРУИБ центров Госсанэпиднадзора.

Для того чтобы пройти обследование, нужно предъявить сотруднику диагностической лаборатории паспорт или документ, заменяющий его. Документ должен содержать информацию об адресе регистрации больного, а также его фотографию. При желании пациент может пройти тестирование анонимно, но подобные результаты не принимаются для оказания медпомощи.

При получении положительного ответа больной должен обратиться к врачу-инфекционисту, который назначит дополнительные исследования с целью подтверждения диагноза. Во время терапии тестирование может проводиться раз в 3 дня с целью отслеживания динамики состояния больного и эффективности лечения. При хроническом гепатите анализы сдаются каждые 6 месяцев с целью контроля состояния пациента.

Полное излечение возможно при своевременном проведении и правильно выбранной тактике терапии. Эффективность лечения зависит от конкретной инфекции, стадии болезни и общего состояния больного. Необходимость госпитализации определяется индивидуального для каждого пациента, в зависимости от тяжести его состояния. После выздоровления у человека сохраняются антитела, обеспечивающие ему пожизненный иммунитет либо устойчивый иммунный ответ на несколько лет, что зависит от многих факторов: возраста, индивидуальных особенностей организма и других.

Может ли анализ на гепатит быть ошибочным?

Ошибочные результаты нередко фиксируются при использовании некачественных реактивов, проведении исследования на устаревшем оборудовании или нарушении технологии тестирования. Иногда точность метода исследования предполагает определенный процент ошибки. Ложноотрицательный ответ возможен при тестировании на слишком ранней стадии заболевания, когда антитела еще не начали вырабатываться в нужном количестве, ложноположительный – на последней стадии острого гепатита, в период выздоровления.

Стоимость анализа

В государственных клиниках по направлению врача можно сдать анализ на гепатит бесплатно. Исследование на платной основе проводится в большинстве крупных городов страны. Цена зависит от конкретной лаборатории, используемого оборудования, сроков проведения, типа теста, региона и ряда других факторов.

Качественный тест на антитела к РНК- и ДНК-вирусу можно сделать в Москве и Санкт-Петербурге по цене 550–900 рублей. Стоимость количественного исследования варьируется в пределах 1200–10 000 рублей в зависимости от конкретного антигена, метода исследования, класса медицинского оборудования. Например, оценка вирусной нагрузки с детекцией в режиме реального времени, необходимая для определения эффективности лечения гепатита С, обойдется в 17 000–22 000 рублей. Выявление антигенов качественным методом в таких городах, как Новосибирск, Мурманск, Кострома, Махачкала, Симферополь будет стоить 300–800 рублей.

Сдача анализа на гепатит позволяет оперативно выявить заболевание и начать его лечение. А своевременно проведенная терапия в большинстве случаев обеспечивает полное выздоровление пациента или подавление активности вируса. Одним из главных способов профилактики гепатита B (наряду с соблюдением правил гигиены, а также с избеганием беспорядочных половых связей и отказом от приема наркотиков) является вакцинация. Ее обязательно нужно проводить тем, кто находится на гемодиализе, часто меняет сексуальных партнеров, работает с кровью или проживает в одной квартире с лицами, страдающими хронической формой болезни. Самые эффективные вакцины – отечественные. Они прицельно рассчитаны на те штаммы (генотипы) вируса, которые преобладают в нашей стране. Кроме того, современные российские вакцины производят без консерванта, в основе которого содержится ртуть.

Источник