Режим амплификации для вируса гепатита с

При подтверждении HCV-инфекции, задача врача состоит в первую очередь в оценке состояния здоровья пациента. Но новейшие технологии лабораторной диагностики позволяют предположить, насколько высок риск осложнений, установить активность патологического процесса. Поэтому одним из основных диагностических параметров является вирусная нагрузка при гепатите С (Ц). Для этого показателя в медицинской литературе также применяют термин «виремия».

Исследование на вирусную нагрузку

Ключевую роль в определении схемы терапии играет генотип HCV. Как показывает практика, наиболее распространена первая разновидность, остальные встречаются несколько реже. Но именно 1 генотип крайне тяжело поддается лечению, и высокая виремия служит одним из предикторов неблагоприятного течения патологии. На основании количественного лабораторного теста специалист может назначить более эффективное лекарство нового поколения вместо часто применяемых комбинированных схем с софосбувиром. 

Показатели вирусной нагрузки необходимы и для контроля проводимой противовирусной терапии. Виремию в обязательном порядке определяют до начала приема медикаментов, а затем исследование повторяют еще дважды в течение курса лечения. Устойчивая тенденция к снижению говорит в пользу хорошего «ответа» на препараты и наоборот, сохранение вирусной нагрузки на одном уровне либо увеличение цифр (по сравнению с первым анализом) требует быстрого изменения схемы терапии либо отмены приема медикаментов до выяснения причины резистентности. 

Что значит вирусологическая нагрузка

При подозрении на гепатит С пациенту приходится сдавать множество анализов, названия которых понятны далеко не всегда. Попробуем разобраться в специальных медицинских терминах и обозначениях тестов, назначаемых врачом. Для обследования больного проводят анализы по двум основным методикам. 

  1. Серологическое исследование. В лабораторном бланке часто обозначается как anti-HCV. Тест предназначен для выявления антител (иммуноглобулинов) к возбудителю гепатита С, которые достигают определяемого уровня на 4–6 неделе после заражения. Но по титру АТ к HCV можно только приблизительно определить тяжесть заражения.
  2. Молекулярные исследования. Включают несколько тестов. Обозначается как ПЦР (полимеразная цепная реакция). Анализ достаточно сложен в исполнении и позволяет установить РНК вируса в кровотоке. Самый простой тест – качественный, когда определяют только присутствие HCVв сыворотке. Количественный позволяет выяснить точное количество копий РНК в 1 мл крови. При помощи генотипирования устанавливают структуру вириона и точную разновидность HCV (I–VI). 

Количественную ПЦР проводят не сразу. Максимально возможной чувствительностью характеризуются тест-системы, используемые для постановки качественного исследования. Но высокая стоимость анализа ограничивает его повсеместное применение. Для рутинной диагностики применяют более простой в проведении ИФА. 

Дальнейшее обследование проводят при позитивном ИФА. Ранее качественная ПЦР считалась более чувствительной, чем количественная. Но современные тест-системы позволяют определить количество вируса гепатита С в крови при показателях 5 МЕ/мл и выше. 

Лаборатории могут использовать разные наборы для постановки количественного анализа. Поэтому все исследования лучше проводить в одном месте, чтобы не допустить погрешности в показаниях тестов.

Анализ на гепатит С

Какая вирусная нагрузка бывает при гепатите С? Для ответа на этот вопрос используют не только числовые показатели.

Для удобства диагностики и прогнозирования исхода заболевания виремию делят на группы:

  • низкая;
  • высокая.

В некоторых медицинских источниках дополнительно используют термины «умеренная» и «очень высокая». На многих форумах пациенты нередко жалуются на погрешности при проведении количественной ПЦР. Дело в том, что разные тест-системы могут отличаться по интерпретации результатов. Если ранее виремию обозначали в копиях РНК/мл, сейчас все современные лаборатории указывают показатель в Международных Единицах ( МЕ/мл). 

Как определить

Как определить вирусную нагрузку? Чтобы посчитать данный параметр, используют различные лабораторные методики. Их названия и краткое описание приведено в таблице.

Наименование тестаОписание
ПЦРОтличается высокой чувствительностью, распространенностью и универсальностью
Метод разветвленной ДНКИсследование просто в проведении и обычно применяется для тестирования большого количества образцов. На практике тест используется крайне редко из-за низкой чувствительности
Транскрипционная амплификацияМетодика основана на амплификации генетических образцов вируса в крови. Способ отличается быстротой проведения, а чувствительность сопоставима с ПЦР. Но многие лаборатории только начинают переход на новые тест-системы

Как правило, исследование выполняют методом ПЦР. Но перед проведением теста необходимо обязательно поинтересоваться, какой методикой он проводится. Это нужно для правильной интерпретации результатов. Анализ рекомендуют выполнять по максимально чувствительным способам. Только таким образом можно определить ответную реакцию пациента на проводимую терапию и вовремя обратить внимание на признаки возможных осложнений. 

Чувствительность диагностических методов

Чувствительность проводимого теста – это минимальное количество копий вируса, которое можно обнаружить при помощи данного исследования. При обследовании перед назначением терапии доктора не акцентируют внимание на особенностях методики выполнения анализа. Однако в последующем, когда речь идет об оценке эффективности лечения, важно выполнять тесты максимально чувствительным методом. 

Характеристики применяемых на сегодняшний день способов определения виремии указаны в таблице.

Наименование исследованияЧувствительность теста
ПЦРОт 5–10 МЕ/мл
Методика разветвленной ДНКОт 600 МЕ/мл
Способ транскрипционной амплификацииОт 5 МЕ/мл

При этом доктора обращают внимание пациентов, что в лабораториях для обозначения вирусной нагрузки градацию показателей проводят с использованием степеней (102, 104, 106 и т.д.). Поэтому расшифровку результатов анализа лучше доверить врачу, а все бланки дублировать и обязательно вклеивать в карту пациента.

Читайте также:  Профилактика заражения вирусным гепатитом в лпу

Анализ на генотип гепатита С

Когда показан количественный анализ

Проблемой, как узнать уровень виремии, доктора занимаются уже после подтверждения диагноза HCV – инфекции. Тем более, современные тест-наборы, предназначенные для постановки качественной ПЦР, более чувствительны, чем системы для проведения количественного анализа. Нередко, лаборатории предлагают пакет, включающий анализ на вирусную нагрузку и генотипирование. Такой комплекс исследований обходится дешевле, чем выполнение тестов по отдельности. 

Показания к установлению уровня виремии приведены в таблице.

Показания к сдаче анализаОписание
Позитивный Anti-HCV и положительный качественный тест ПЦРПодтверждают диагноз гепатита С, уровень вирусологической нагрузки устанавливается для определения дальнейшей тактики противовирусной терапии
Негативный Anti-HCV и позитивная качественная ПЦР

Такие результаты свидетельствуют об иммунодефиците. Его причину выясняют до начала лечения. Состояние мешает адекватной иммунной реакции (выработке антител) на возбудителя вируса.

Количественный тест ПЦР служит дополнительным подтверждением диагноза и также влияет на последующую терапию

Период лечения

Современные противовирусные препараты принимают на протяжении 12 или 24 недель.

При 12-недельном курсе терапии определены следующие сроки выполнения количественного теста:

  • 21–28 день,
  • 77–84 день (последняя неделя приема).

При 24-недельном курсе лечения анализ на виремию сдают:

  • на 4 неделе,
  • на 12 неделе,
  • на 24 неделе.

Дополнительно пациент может сдать кровь на уровень виремии в любое время самостоятельно в частной лаборатории без направления от врача.

При 48-недельном лечебном курсе (обычно проводится с применением интерферона и рибавирина):

  • в течение 4 недели,
  • в промежуток с 12 по 16 неделю,
  • на 23–24 неделе,
  • на последней неделе лечения.
После окончания терапииКоличественный анализ повторяют в течение 1–2 лет с момента окончания приема медикаментов с интервалом в 3 месяца. Если сохраняется негативный результат, в карточке делают пометку, что пациент выздоровел

Если по истечении двух лет после окончания терапии количественный тест вновь показал виремию (вне зависимости от уровня), говорят о повторном инфицировании. В таком случае все исследования проводят сначала. Определяют степень поражения печени при помощи эластографии, УЗИ и биопсии (инвазивная процедура, проводится по строгим показаниям). 

Количественный анализ крови демонстрирует только уровень виремии (в цифровом значении). В ходе исследования не устанавливают разновидность вируса гепатита С. Для этого показано генотипирование.

Гепатолог-инфекционист

Расшифровка показателей в результатах анализов

На этапе количественной оценки виремии пациент уже находится под наблюдением врача. Если результат первичного анализа (anti-HCV) вызывает сомнения, терапевт направляет больного к узкому специалисту. Это либо инфекционист, либо гепатолог. 

Если определяется вирусная нагрузка при гепатите С, расшифровка должна проводиться только врачом. Но общепринятые варианты трактовки представлены в таблице ниже. 

Результаты исследованийОписание
8×105 МЕ/мл и болееВысокая виремия
7,9×105 МЕ/мл и менееНизкая виремия
Некоторые зарубежные специалисты считают, что критическая граница между высокой и низкой вирусологической нагрузкой составляет 4×105 МЕ/мл
Виремия не определяетсяРНК возбудителя либо отсутствует, либо его количества недостаточно для лабораторного определения

Отсутствие генетического материала HCV в крови является вариантом нормы. 

Норма

При первичном обследовании, когда подтвержден диагноз гепатита С, о норме при количественном определении вируса речь не идет. РНК патогена будет обнаружено в крови в любом случае. Но во время лечения нормой считается отсутствие возбудителя HCV в плазме уже к середине курса терапии. 

Необнаруживаемый уровень HCV на 4–6 неделе приема медикаментов служит предиктором успешного лечения. При этом анализ следует выполнять максимально чувствительными методами, которые смогут определить содержание патогена в количестве 5 МЕ/мл и выше. Нормой считают отсутствие вируса после окончания медикаментозной терапии. 

Высокая

Высокой является виремия от 8×104 МЕ/мл и более (некоторые авторы называют число в два раза ниже – 4×104 МЕ/мл). Подобные показатели – один из неблагоприятных факторов течения патологии, говорят в пользу очень активной репликации вируса, быстром распространении HCV. Чем больше параметры виремии, тем выше вероятность развития осложнений – цирроза, фиброза, асцита, внепеченочных проявлений гепатита. 

В таких случаях нужно особое внимание уделить состоянию печени. Обычно врач проводит все возможные лабораторные и инструментальные исследования, чтобы получить максимально полную картину и исключить скрытые патологии. Также слишком большие показатели виремии (особенно при невысоких титрах либо отсутствии антител) могут быть следствием проблем с иммунитетом (ВИЧ, иммунодепрессивные состояния и т.д.).

При отсутствии цирроза и коинфекций прописывают стандартную схему терапии (комбинации с софосбувиром). Если виремия снижается недостаточно быстро либо остается на прежнем уровне, принимают решение о смене тактики лечения. 

Высокая виремия в сочетании с фиброзом и циррозом, требует серьезного подхода. Назначают длительный курс терапии, иногда показана трансплантация органа. В таком случае (если до пересадки остается полгода и менее) лечение не начинают, а проводят уже после хирургического вмешательства.

Прием у инфекциониста

Низкая

Если виремия составляет ниже 8×105 МЕ/мл, говорят о низкой вирусной нагрузке. Что означает такой показатель? Цифры служат предиктором выздоровления. При минимальном содержании патогена возможно носительство, когда HCV не прогрессирует, но это не означает пожизненного латентного течения болезни. Часто активизация процесса происходит спонтанно и незаметно для пациента.

Читайте также:  Лечение гепатита с за два месяца

К причинам сниженной виремии относят:

  • хорошую работу иммунной системы;
  • правильное питание с ограничением (в идеале, исключением) тяжелой для печени пищи;
  • строгое ограничение алкоголя;
  • отсутствие лекарственного гепатотоксического воздействия;
  • отсутствие коинфекций.

Иногда невысокое число виремии отмечают на фоне недавнего заражения. В таком случае доктора оценивают состояние пациента. При благоприятном прогнозе лечение не начинают, предоставляя иммунитету «возможность» самостоятельно побороть инфекцию. 

При хроническом течении патологии на фоне низкой ВН лечение начинают незамедлительно. Однако отсутствие яркой активности HCV предполагает 100% положительный результат терапии практически у всех пациентов. Но минимальная виремия уже после проведенного курса приема противовирусных средств служит признаков возможного рецидива либо повторного заражения. 

Как снизить высокую виремию

Когда проведен анализ на количественное определение HCV и выполнена расшифровка результатов теста, доктора принимают решение о тактике проводимой терапии.

Лечение заключается в назначении следующих препаратов:

  1. Противовирусные препараты прямого действия (Мавирет, софосбувир, даклатасвир, Викейра Пак, велпатасвир, ледипасвир и т.д.). Отличаются высокой эффективностью (85–95% благоприятных исходов), безопасностью, коротким перечнем противопоказаний.
  2. Комбинация интерферона с рибавирином. В настоящее время применяет редко из-за низкой эффективности (по сравнению с препаратами последнего поколения) и высокого риска противопоказаний. Но назначают при непереносимости противовирусных средств либо наличии других ограничений.
  3. Гепатопротекторы (Эссенциале Форте, Гепа-Мерц, Карсил, Легалон и др.) Назначают всем пациентам уже при первом посещении врача по поводу жалоб на состояние печени. Принимают на протяжении длительного периода, как правило, до полного (или максимально возможного для данного пациента) восстановления печени.
  4. Поливитаминные комплексы. Также принимают длительными курсами. В составе препаратов обязательно содержание витаминов группы В, антиоксидантов (витаминов А и Е, аскорбиновой кислоты), основных макро- и микроэлементов, незаменимых аминокислот.

Одним из немногих способов снизить вирусную нагрузку является правильно подобранное комплексное лечение. 

Также для быстрого снижения виремии необходимо придерживаться строгой диеты. Во время консультации доктор подробно разъясняет особенности питания в соответствии со столом №5, при тяжелом состоянии пациента – №5а. Категорически противопоказан алкоголь (вне зависимости от крепости и количества). Рекомендуют отказаться от вредных привычек, особенно наркотической и никотиновой зависимостей.

Назначение лечения

Влияние показателя на лечение и прогноз

В настоящее время лечение гепатита С мало зависит от параметров виремии. Ключевую роль играет разновидность HCV. Если выявлен I генотип патогена и показатели виремии слишком высоки, предпочтение отдают препаратам последнего поколения. К примеру, вместо софосбувира с даклатасвиром или другими лекарствами прямого действия, прописывают Викейру Пак. 

Темпы снижения виремии характеризуются термином «вирусологический ответ» (или сокращенно ВО).

В зависимости от сроков уменьшения концентрации HCV в крови различают:

  • ранний ВО – снижение виремии до неопределяемых концентраций на 12 неделе терапии;
  • очень ранний ВО – отсутствие показателей на 4 неделе терапии;
  • устойчивый ВО – сохранение негативного результата на протяжении полугода после окончания лечения;
  • возврат вирусной инфекции – повышение виремии после кратковременного снижения;
  • рецидив HCV – повторное появление вируса после успешного лечения. 

Задача врача – добиться устойчивого вирусологического ответа, предикторами которого служит отсутствие виремии на 4 или 12 неделе лечения. 

В целом, при нормальном состоянии печени (без цирроза) благоприятный прогноз вероятен и при высоком содержании HCV. Хотя гепатит С часто протекает без каких-либо клинических признаков, вполне реально вовремя диагностировать патологию. Для этого рекомендовано ежегодное проведение anti-HCV, а после перенесенного заболевания – качественное определение вируса методом ПЦР.

Источник

Вирусный гепатит С – это антропонозная инфекция, передающаяся парентеральным путем. Инкубационный период от 2 до 26 недель. Во время скрытого периода вирус адаптируется в организме и активно размножается.

Инфекция поражает гепатоциты, часто протекает бессимптомно или с малыми проявлениями и приводит к циррозу или раку печени. На начальных стадиях гепатит С имеет неспецифические симптомы, которые свойственны ряду других заболеваний (снижение аппетита, астенический синдром).

Нередко болезнь выявляется случайно, или когда развиваются необратимые процессы в печени. Чтобы подтвердить или исключить факт инфицирования проводят ИФА. Исследованию подвергается кровь пациента на антитела(иммуноглобулины) к вирусу гепатита С.

При положительном ответе, перед врачом стоит задача выявить причину наличия иммуноглобулинов в крови и назначить адекватную терапию, с учетом стадии и активности процесса. Поэтому, следующим этапом проводится количественный анализ на вирусную нагрузку при гепатите С. Это исследование крови, с целью качественного и количественного определения генетического материала возбудителя в единице объема.

Что такое вирусная нагрузка при гепатите С?

Вирус гепатита С примитивное существо, генетический материал которого это рибонуклеиновая кислота (РНК), представляющая собой длинную цепочку из нуклеотидов. При гепатите С вирусная нагрузка определяется в качественном варианте (по присутствию иммуноглобулинов (антител) к вирусу гепатита С) и количественном (по количеству вирусного генетического материала в 1 мл исследуемой крови).

Качественная оценка выдается в виде положительного или отрицательного ответа. Присутствие иммуноглобулинов в крови может говорить, как о заболевании, так и о перенесенной инфекции, поэтому при положительном результате надо приступить к количественному анализу.

Читайте также:  Брянск анализы на гепатит с

В количественном анализе измеряется сколько копий РНК в 1 мл, либо оценка дается в международных единицах (МЕ). Обе единицы измерения легко конвертируются друг в друга. 1МЕ = 4 копии РНК.

Способы количественной оценки вирусной нагрузки

Вирус гепатита С непрерывно мутирует. Статистически выявлено 9 разновидностей, и у каждой 3-4 подтипа. Благодаря генетическому разнообразию вируса, организму крайне сложно выработать иммунитет. Каждый генетический вариант имеет особенности в лечении.

Уровень виремии важный показатель. Регулярный контроль вирусной нагрузки дает возможность врачу оценить активность и агрессивность процесса, длительность предстоящей терапии, результативность проводимого лечения, прогноз для здоровья и жизни пациента.

Какими методами определяется вирусная нагрузка?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Популярный метод исследования, позволяющий выявить вирусную РНК даже в малых количествах. Минусом является только дороговизна анализа. На исследуемый биоматериал воздействуют теплом, добиваясь активного размножения вирусной РНК и увеличения массы исследуемого субстрата.

Затем добавляется специальный краситель, который вступает в реакцию с РНК, и по специальной шкале оценивается интенсивность окрашивания, после чего делается вывод о вирусной нагрузке. В зависимости от цели исследования, ПЦР бывает трех видов: качественная, количественная и генотипирование. Чувствительность метода от 50 МЕ в 1 мл.

Разветвленной ДНК

Недостаток этого метода в малой чувствительности (от 500 МЕ в 1мл), невозможности генотипирования, высокой частоте ложноотрицательных результатов. Преимущества в небольшой стоимости и возможности исследования сразу нескольких образцов. Врачи применяют метод разветвленной ДНК у пациентов с уже подтвержденным диагнозом, для оценки качества лечения.

Основан на использовании двух нуклеотидных зондов. Первый одним концом связывается с молекулой РНК вируса, а другим с молекулой-усилителем. Затем вносят второй зонд, помеченный красящим веществом, и по структуре подходящий к молекуле-усилителю. Образующийся сигнал фиксируется с помощью хемилюминесценции.

Транскрипционная амплификация (ТМА).

Обладает высокой чувствительностью (от 5-10 МЕ/мл). Анализ проводится при относительно низких температурах. Процедуре амплификации подвергаются РНК вируса, результат фиксируется с помощью люминометра.

Расшифровка показателей вирусной нагрузки

В норме РНК вируса в крови не определяется. В таблице показаны общепринятые оценочные значения.

Низкая нагрузкаВысокая нагрузка
Менее 800 000 МЕ/мл Более 800 000 МЕ/мл

Результаты тестов вирусной нагрузки при гепатите С расшифровывает врач. Кроме цифровых значений, учитывается еще динамика изменений показателей вирусной нагрузки. Низкая нагрузка говорит о положительной динамике лечения, низкой заразности.

Высокая вирусная нагрузка означает, что болезнь находится активной фазе. Вирус реплицируется, поражая новые клетки, и пациент активно инфицирует контактные лица. Прогноз заболевания неблагоприятный, необходимо срочно начинать противовирусную терапию, либо менять текущую схему лечения.

Для чего определяется вирусная нагрузка при гепатите С?

Маловероятно вылечить гепатит С без проведения тестов на вирусную нагрузку. Анализы сдаются перед началом терапии, затем на 4, 12 и 24 неделях терапии. Исходя из динамики показателей на этих сроках, врач делает выводы о результативности терапии и возможной ее коррекции.

В случае, если на 12 неделе отсутствует снижение виремии в 2 раза, терапия неэффективна. Если на фоне проводимого лечения вирусная нагрузка увеличилась, то речь идет о вирусном прорыве. Это говорит об ухудшении состояния пациента и необходимости срочно менять терапию. Когда на 24 неделе РНК вируса не обнаруживается в крови – это устойчивый вирусологический ответ, схема лечения подобрана правильно и прогноз благоприятный.

Кому необходимо исследовать вирусную нагрузку?

Существуют категории граждан, которые подвержены высокому риску заражения гепатитом С. Этим людям предложено ежегодно в плановом порядке обследоваться на предмет заражения.

В группу риска входят:

  • Работники системы здравоохранения.
  • Близкие родственники и лица, контактирующие с больными.
  • Инъекционные наркоманы.
  • Лица, ведущие беспорядочную половую жизнь без использования барьерных методов контрацепции.
  • Имеющие в анамнезе гепатит С, проходившие лечение.
  • Любители татуажа и пирсинга.
  • Пациенты, перенесшие множественные хирургические вмешательства и переливания крови и ее компонентов.
  • Дети, рожденные от инфицированных матерей.

Важно знать, что возможные результаты и их расшифровка могут иметь погрешности. Вероятные причины неточных результатов:

  • Попадание в биоматериал посторонних примесей.
  • Неправильное хранение образцов.
  • Погрешности работы медицинского персонала при проведении исследования.
  • Несоблюдение пациентом режима перед сдачей анализа.

Что необходимо соблюдать перед проведением тестов на вирусную нагрузку?

  • Голодный период не менее 8 часов. Перед сдачей анализа разрешается пить воду.
  • За двое суток отказаться от употребления алкоголя, жирной, жаренной пищи, крепкого кофе, чая.
  • За сутки отказаться от приема лекарственных препаратов.
  • За час до исследования не курить.
  • Рекомендовано избегать силовых нагрузок накануне исследования.
  • Перед анализом нельзя проходить физиотерапевтические процедуры, массаж.

Для наиболее точных результатов гепатологи рекомендуют сдавать анализы в одной и той же лаборатории. Результаты разных лабораторий часто отличаются друг от друга. Это мешает лечащему врачу объективно оценить состояние пациента, динамику процесса и выбрать верную тактику лечения.

Источник