Рнк гепатита с количественное исследование

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

Анализ ПЦР

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно. 

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Проводимое исследованиеЦели выполнения
Биохимический анализ крови и печеночные пробыПозволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания
Клинические анализы крови, мочи и калаДанные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени
Иммуноферментный анализ (ИФА)Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов
Полимеразная цепная реакцияДорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV
Инструментальные обследования печениНеобходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Что такое ПЦР

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

  1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
  2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
  3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков. 

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.). 

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Проведение анализа на гепатит С

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл. 

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл. 

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови. 

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C. 

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

  1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
  2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
  3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV. 
Читайте также:  Как подготовиться к сдаче анализов на гепатиты

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР. 

Особенности количественного анализа

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Забор крови

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

  • вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
  • эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
  • риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
  • риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

Показания

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

  • положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
  • положительный результат качественной ПЦР;
  • контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным. 

Нам каких этапах заболевания проводится

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

  • до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
  • 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
  • последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
  • 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление. 

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Как подготовиться к исследованию

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

Анализ крови

Необходимо:

  • сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
  • процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
  • в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
  • за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
  • если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные. 

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя. 

Расшифровка количественного анализа на гепатит С

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами. 

Читайте также:  Гепатит с современное лечение и разработки

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Значение показателяУровень вирусной нагрузки
РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы)Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии
1,8×102–7,9×105 МЕ/млНизкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов
8×102–2,3×107 МЕ/млУмеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача
2,4×107 МЕ/мл и вышеВысокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени)

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Норма

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

  • самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
  • раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
  • при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Как проводится ПЦР

Какие показатели крови указывают на гепатит С

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

  • позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
  • позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
  • определение количества копий вируса при количественной ПЦР. 

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче. 

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV. 

Бывает ли ложный тест

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования. 

Преимущества количественного исследования методом ПЦР

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов. 

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

Источник

Рнк гепатита с количественное исследование

РНК гепатита С – это молекула, содержащая наследственную информацию вируса. Именно ее определяет анализ методом ПЦР (полимеразной цепной реакции). Это ключевой этап диагностики, подтверждающий инфицирование гепатитом. Также по строению РНК определяют генотип HCV. Эти данные нужны для выбора терапии, поскольку некоторые подтипы (3а, 3б) не поддаются традиционному лечению интерфероном. Для достоверного результата потребуется соблюдать правила подготовки к исследованию.

Что такое РНК вируса

РНК, или рибонуклеиновая кислота, – это уникальный генетический материал организма. У вирусных гепатитов С от конструкции РНК зависит устойчивость вируса к разным типам лечения и особенности протекания болезни. Появление в крови фрагментов вирусной РНК значит, что болезнь вступила в острую фазу.

У хронических больных в состоянии ремиссии кровь также содержит РНК гепатита С и антитела к ней, но в меньшем объеме, чем при обострениях. Тем не менее, этого количества вируса все равно достаточно для заражения здоровых людей.

Читайте также:  Гепатит с больной в семье

Кому назначают диагностику

Обследование крови на РНК HCV нужно в таких случаях:

  1. При обнаружении антител или повышения печеночных ферментов у человека, считающегося здоровым. Анализы на разные виды гепатита проводят для выявления болезни или ее исключения из списка возможных причин разрушения клеток печени.
  2. Когда лечат уже обнаруженный гепатит для отслеживания эффективности терапии. Контроль за уровнем вирусной РНК в крови своевременно выявит резистентность (устойчивость) к принимаемым лекарствам.
  3. После выздоровления на протяжении года – чтобы вовремя заметить рецидив.

Техника проведения анализа

Методом ПЦР обнаруживают нуклеиновые элементы, входящие в состав белковой оболочки вируса. Полимеразная цепная реакция выявляет:

  • присутствие фрагментов HCV в крови;
  • уровень вирусной нагрузки – количество частиц в миллилитре крови;
  • генотип гепатита.

Важно правильно подготовиться к забору крови из вены для полимеразной реакции, чтобы не было искажений в результате теста. Для этого:

  1. Не употреблять алкоголь, энергетики, жирную и жареную пищу в течение 3 дней до сдачи теста.
  2. Избегать физических и нервных нагрузок за 2-3 дня до анализа.
  3. Отказаться от приема лекарств, а если это невозможно – уведомить врача о принимаемых препаратах.
  4. Не сдавать анализ во время обострения хронических вирусных болезней, а также при ОРВИ.
  5. При беременности и во время менструации предупредить врача о своем состоянии, поскольку гормональные нарушения в этот период вызывают искажения результатов.

Расшифровка

Обработка крови состоит из трех этапов:

  1. Определение РНК вируса гепатита в крови (качественный анализ).
  2. Оценка вирусной нагрузки (количественный анализ). Применяется только при положительном результате первого (когда в материале обнаружено присутствие вируса).
  3. Генотипирование. Его проводят при первом обращении по подозрению на гепатит, а также при низкой эффективности терапии – чтобы выявить мутацию вируса.

При подозрении на ложный результат потребуется повторно пройти обследование через 2 недели.

Качественный анализ

На оборудовании большинства лабораторий гепатит С будет выявлен, если количество частиц больше 50 МЕ/мл (международных единиц на миллилитр крови). Редкие диагностические аппараты способны выявить гепатит при уровне 10 МЕ/мл. При меньшем количестве частиц вируса будет получен ложноотрицательный результат (гепатита C не обнаружено).

Присутствие в крови антител с одновременным отрицательным результатом на тестирование по вирусу – причина пройти повторное обследование через 2 недели. Также можно обратиться в другую лабораторию с более современным оборудованием для диагностики.

Количественный анализ

По результатам количественного теста можно определить, насколько эффективно организм борется с гепатитом С. Этим тестом определяют прогресс болезни, а также действенность терапевтической программы. Уровень вируса в крови определяют в МЕ/мл. В зависимости от результатов пациента относят к одной из пяти групп:

  1. Здоров (вируса не обнаружено).
  2. Минимальный уровень вируса в крови (меньше 180 МЕ/мл. Условно здоров. Иногда может означать ложноположительный результат или скрытое носительство без болезни.
  3. Болен с низкой вирусной нагрузкой (менее 800 тыс. МЕ/мл)
  4. Болен с высокой вирусной нагрузкой (от 800 тыс. до 2.5 млн. МЕ/мл)
  5. Терминальная вирусная нагрузка (более 2,5 млн. МЕ/мл).

От регресса вирусной нагрузки зависит длительность терапии. При слишком медленном падении активности вируса (плохой эффективности терапии) лечение растягивается на полгода и более. Если вирус удастся уничтожить быстрей, срок лечения не превышает 3 месяцев.

Генотипирование

Существует 11 генотипов вируса с различными подтипами. Некоторые из них вводят больных в группу риска по онкологии и фиброзу сильней остальных, другие не поддаются стандартной терапии интерфероном. В идеале генотипирование нужно провести при первичном обнаружении гепатита. Но из-за ограниченности ресурсов к этому анализу прибегают только при отсутствии результатов терапии.

Если есть возможность сделать генотипирование платно, обязательно нужно ею воспользоваться. Этот анализ предотвратит потерю времени на терапию, которая может быть неэффективна при редком субтипе гепатита С.

Как часто нужно сдавать кровь на диагностику

Регулярное обследование на гепатит показано:

  • Людям, которые входят в группу риска из-за профессии или вредных привычек. К первым относятся врачи, ко вторым – наркоманы и люди, практикующие беспорядочные половые связи без использования презервативов.
  • Проходящим терапию – для отслеживания эффективности лечения.
  • Излечившимся от гепатита с целью предотвращения рецидивов.

Кровь на профилактическое обследование у группы риска берут раз 3-6 месяцев. Во время лечения потребуется сдавать анализы чаще – раз в 4-6 недель. При сомнениях в эффективности оборудования той лаборатории, где проводятся анализы, лучше сдать тест в нескольких клиниках одновременно.

Источник