Рнк пцр отрицательный при гепатите с

Гепатит С отрицательно – запись, которую ожидает увидеть каждый человек, сдающий анализ на наличие вируса. Но коварство вирусного гепатита в том, что у пациентов с сильным иммунитетом после заражения может пройти длительное время, прежде чем анализ покажет наличие инфекции и появятся симптомы. Поэтому после получения отрицательного результата нельзя быть уверенным в полном здоровье, особенно если человек находится в группе риска по заражению. 

Какие бывают анализы на гепатит

Основные анализы крови – качественная и количественная ПЦР, выявляющие наличие частиц вирусов, их концентрацию и генотип. Данное исследование наиболее информативно для отслеживания стадии болезни и эффективности противовирусной терапии, что позволяет корректировать схему лечения. 

Иммуноферментное исследование, или ИФА, показывает количество иммуноглобулинов IgM и IgG, вырабатывающихся в организме после инфицирования. Часто при отрицательной полимеразной цепной реакции на гепатит в крови обнаруживаются антитела, свидетельствующие о выздоровлении или переходе инфекции в хроническую (вялотекущую) форму. 

Что значит отрицательный результат анализа на гепатит С

Иммуно-ферментный метод выявляет наличие иммуноглобулинов к вирусным частицам. По их виду и количеству можно определить давность заражения и стадию, на которой заболевание сейчас. Присутствие антител класса М свидетельствует о недавнем заражении и острой форме патологии. Через полгода после инфицирования и при переходе гепатита в хроническую форму обнаруживаются иммуноглобулины класса G.

Если иммунитет человека когда-либо контактировал с вирусом, результат будет положительным. Отрицательный ИФА на гепатит С регистрируется при отсутствии болезни и если иммунная система никогда не сталкивался с вирусом. Ложноотрицательный результат ИФА получают на ранних стадиях гепатита, пока иммуноглобулины не успели выработаться. Это период называют диагностическим (серологическим) окном и он длится не более 6 месяцев.

Исследование HCV RNA, или РНК вируса гепатита С, является высокоточным диагностическим методом. Полимеразная цепная реакция выявляет количество вирионов в 1 мл крови, а также их генотип. Эти данные очень важны, так как позволяют подобрать наиболее подходящие противовирусные препараты.

В расшифровке анализов крови на гепатит при отрицательном итоге будут указаны следующие данные: «не найдено» или «не обнаружено». Даже незначительное присутствие вирусных частиц – подтверждение заражения. 

Отрицательный качественный ПЦР на гепатит С не всегда свидетельствует об отсутствии патологии. Иногда исследование показывает ложноотрицательный результат, если:

1. анализ проводился в первые дни после заражения;
2. были совершены ошибки при заборе и хранении биоматериала;
3. пациент проходил длительное лечение уколами Гепарина. 

Чтобы исключить инфекцию, проводится количественный подсчет вирусов в крови (вирусная нагрузка, или виремия).

Если анализ ПЦР на гепатит С отрицательный, то с вероятностью в 99% можно утверждать, что заболевание отсутствует. Человеку, не входящему в группу риска заражения, не стоит беспокоиться. Но если существует вероятность инфицирования, необходимо пройти более тщательное обследование через несколько недель.

Что делать с полученными данными

Отрицательный анализ на РНК вируса гепатита и вирусную нагрузку у человека, не имеющего симптомов поражения печени, не увлекающегося наркотическими веществами, не ведущего беспорядочной половой жизни, является нормой. Нет необходимости проводить повторное исследование. 

Но если существует вероятность заражения, человек близко контактировал с носителем инфекции, присутствуют признаки заболевания или обнаружены антитела, требуется повторное обследование через две недели, месяц и через полгода. 

Расшифровка анализов должна проводиться квалифицированным специалистом – гепатологом или инфекционистом. При этом важно учитывать референсные значения лаборатории, в которой проводилось исследование. Все диагностические центры используют различные реагенты, оборудование и анализаторы, что может сказаться на интерпретации результатов. Врач, расшифровывающий полученные данные, должен в первую очередь руководствоваться референсными значениями лаборатории, и только потом сравнивать их с общепринятыми стандартами. 

Почему ИФА положительный, а ПЦР отрицательный

Человек начинает паниковать, если ПЦР отрицательный, но есть антитела к гепатиту С. Но выявление иммуноглобулинов в плазме крови не повод отчаиваться. Наличие антител часто показатель того, что иммунитет человека когда-либо сталкивался с вирусом, но смог его побороть, болезнь не развилась или прошла в легкой форме. Даже если инфекция не распространилась, вырабатывается иммунная память. Она проявляется в виде постоянной циркуляции в крови антител, защищающих организм от заражения той же инфекцией. Иммуноглобулины могут сохраняться до 8-10 лет после болезни.

У переболевшего человека при отрицательном ПЦР на гепатит С обнаруживают антитела класса G, свидетельствующие о ранее перенесенной инфекции. Они могут годами присутствовать в организме. Если после трех последовательных ПЦР-исследований РНК не были обнаружены, врачи делают запись: «здоров, постинфекционный иммунитет». После выздоровления важно обследоваться дважды в год, чтобы своевременно отследить, если болезнь снова начнет развиваться. 

Если обнаружены антитела класса М, но ПЦР отрицательный, это может свидетельствовать о раннем этапе развития болезни (первые 4-6 недель) и низкой вирусной нагрузке. Чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз, необходимо пройти повторное обследование. Если и вторая сдача анализа не выявила РНК вирусов, пациент считается здоровым. 

Другие причины положительного ИФА при негативном ПЦР:

1. Наличие аутоиммунных заболеваний.
2. Присутствие других инфекций в организме. 
3. Недавно поставлена вакцина от гепатита Б, гриппа или столбняка.
4. Наличие опухолевидных образований.
5. Несоблюдение требований к взятию и транспортировке материала.

У беременных женщин часто регистрируются ложноположительные результаты из-за изменений гормонального фона, приводящими к модификации свойств крови и повышенному содержанию цитокинов. 

Если у женщины во время беременности впервые обнаружены антитела, ей необходимо пройти всестороннее обследование. После рождения ребенка уровень иммуноглобулинов снижается или они полностью исчезают из крови женщины. 

ПЦР на гепатит С – обязательный анализ при обследовании пациента с симптомами поражения печени. Исследование назначают для подтверждения диагноза и получения максимально полной информации о возбудителе болезни, активности вирусной инфекции. Результаты служат основанием для назначения противовирусной терапии, определения ее продолжительности и оценки эффективности.

Диагностика с применением методики полимеразной цепной реакции получила распространение сравнительно недавно. Исследования на эту тему велись с середины 1970-х годов. Но первые публикации относительно возможности использования ПЦР в практической медицине появились только в середине 1980-х гг. 

При объяснении, что такое ПЦР, врачи подчеркивают, что это самый надежный и достоверный анализ при гепатите С. Данный тест позволяет не только выявить частицы РНК вируса, но и установить его концентрацию (указывает на активность инфекционного процесса) и генотип. Полученные результаты играют ключевую роль для определения тактики и схемы дальнейшей терапии.

В чем состоит суть постановки реакции? При помощи определенных биологически активных веществ добиваются увеличения количество частиц РНК вируса в небольшом объеме крови. Впоследствии участки генома определяются разнообразными физико-химическими методами. 

Постановка ПЦР осуществляется при помощи нескольких компонентов:

• Праймер. Это искусственно синтезированное соединение, в котором последовательность нуклеотидов полностью идентична конкретному участку РНК вируса, не подвергающегося мутациям и изменением в зависимости от генотипа. Определение РНК вируса гепатита С выполняется с использованием строго специфичного праймера.
• РНК-полимераза. Фермент, отличающийся устойчивостью и структурной стабильностью на фоне изменений температуры, необходимых для правильного протекания химической реакции. Обеспечивает построение цепочки РНК на одном из этапов ПЦР. 
• Смесь протеинов. Для построения дополнительных участков РНК необходим «строительный материал», для чего к биологическому образцу добавляют определенные соединения белковой структуры. 
• Буфер. Смесь, поддерживающая оптимальный уровень рН для обеспечения протекания полимеразной цепной реакции. 
• Образец биологического материала, предположительно содержащий образец РНК HCV (Hepatitis C Virus). 

При некоторых способах постановки ПЦР дополнительно используются РНК-зонды и другие внутренние контроли, используемые в качестве контрольных образцов при выявлении результатов. 

Сам процесс увеличения участков вирусной РНК при помощи матрицы именуют амплификацией. Реакция протекает в несколько этапов:

1. Денатурирование. Процесс «раскручивания» нитей РНК обеспечивается повышением температуры до определенного уровня. 
2. Отжиг. После снижения температуры до необходимых показателей происходит присоединение праймеров к РНК. Данная стадия возможна только при наличии в образце крови искомых вирусных частиц. 
3. Непосредственный синтез участков вирусной РНК с участием ферментов. 

Перечисленные циклы постановки ПЦР повторяются несколько десятков раз, что обеспечивает многократное увеличение количества участков РНК возбудителя гепатита С уровня, определяемого лабораторными способами. 

Перед проведением анализа образец забора крови соответствующим образом подготавливается. Содержащиеся РНК адсорбируются на буфере-носителе, затем смываются и используется для постановки полимеразной цепной реакции. 

Детекция результатов проводится либо методом электрофореза (горизонтального или вертикального), либо способом гибридизации. Способ расшифровки результатов реакции выбирается исходя из целей проведения исследования (просто выявление РНК, либо определение ее ориентировочного количества).

ПЦР – самый точный анализ крови на гепатит С

Перечень предлагаемых исследований на HCV включает несколько пунктов, отличающихся по стоимости, срокам готовности и способу выполнения. 

Если обратиться к протоколам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), порядок диагностики инфекции включает несколько последовательных этапов.

Для начала сдают:

• общий анализ крови и мочи;
• биохимия крови;
• исследование на содержание глюкозы (строго натощак);
• анализ на ВИЧ;
• флюорография;
• иммунограмма (при подозрении на наличие аутоиммунных патологий). 

При отклонении показателей биохимического анализа крови от физиологической нормы пациенту назначают тест, основанный на обнаружении специфических антител, вырабатываемых при контакте вируса с кровью (ИФА).

Но подобный анализ крови на гепатит С имеет существенный недостаток. Процесс синтеза антител зависит от функционирования и выработки иммунокомпетентных клеток. Индивидуальные особенности организма могут стать причиной как ложноотрицательного, так и ложноположительного ответа. 

Перед назначением теста ИФА врач рассказывает пациенту о возможной ошибке, что вызывает ответный вопрос: «Какой анализ крови показывает гепатит С с минимальным риском получения неверных результатов?» Для подтверждения или опровержения диагноза самым точным лабораторным тестом является проведение ПЦР методом real time. 

Дальнейшая тактика действий зависит от того, что покажет исследование. В случае подтверждения диагноза, пациенту сразу же назначают гепатопротекторы, предупреждают о важности правильного питания и здорового образа жизни. Но таргетная терапия невозможна без определения уровня вирусной нагрузки и генотипа гепатита С. 

Некоторые лекарственные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В. Поэтому для исключения осложнений, дополнительно назначают анализы на HBsAg. HCV лечат только после получения отрицательного результата исследования. 

Виды: качественный, количественный и генотипирование

При первичной диагностике гепатита С серологическим методом определяется титр вырабатываемых антител. Такой результат приблизительно показывает активность патологического процесса. Но максимально точную информацию доктор может получить только после изучения данных ПЦР.

В настоящее время практически во всех лабораториях анализ выполняют ультрачувствительным методом. Таким образом диагностика HCV возможно уже через 10–14 дней после заражения, реже – спустя 2,5–3 недели. В зависимости от целей, преследуемых в ходе исследования, доктор назначает конкретный тип теста.

Существуют следующие разновидности ПЦР:

1. Качественный. При назначении диагностических тестов, у пациентов возникает вопрос, что показывает подобный метод исследования. Качественный анализ способом ПЦР – высокочувствительный тест, определяющий наличие РНК вируса в крови в минимальной концентрации. Обычно подобная разновидность полимеразной цепной реакции ставится по технологии обратной транскрипции. Это один из немногих способов ПЦР, в ходе которого в качестве мишени можно использовать РНК. 
2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С позволяет определить точный уровень РНК HCV в крови. Проведение исследования возможно только одним способом – методом real-time. В ходе подготовки материала к постановке ПЦР в образец добавляют краситель. После каждого цикла амплификации проводится автоматизированное количественное исследование в режиме реального времени. Нередко методику проводят в сочетании с обратной транскрипцией. Таким образом возможно качественное определение малого количества копий РНК вируса. Устанавливать уровень РНК HCV количественно имеет смысл, если получен положительный результат качественной ПЦР. 
3. Генотипирование. Анализ сдается проводится на конечной стадии диагностического процесса. Принцип исследования построен на разнице в последовательности нуклеотидов, что отличает один генотип вируса гепатита С от другого. Обычно анализ делают методом мультипраймерной (мультиплексной) ПЦР. 

При подозрении на носительство вируса, необходимо выполнить качественную ПЦР. Если результат отрицательный, человек скорее всего здоров. Но для полного исключения заражения рекомендуют повторить исследование через 7–10 дней. Если же РНК вируса обнаружена, проводят дальнейшие тесты (количественный и генотипирование). 

Показания к проведению лабораторного теста

Основным показанием к сдаче крови на гепатит С методом полимеразной цепной реакции является положительный результат иммуноферментного анализа (вне зависимости от разновидности: Total, дифференцированный тест на IgG и IgM).

Кроме того, провериться нужно:

• в период беременности (тест делают дважды – в первом триместре и за 7–10 недель до родов);
• при работе, связанной с повышенным риском инфицирования (медсестры, лаборанты, работники донорских центров, косметологи и т.д.);
• при беспорядочных половых связях и незащищенном контакте с малознакомым человеком;
• на фоне ВИЧ, онкологических заболеваний, приема определенных медикаментозных средств и т.д.;
• пациентам, зависимым от внутривенных наркотиков;
• при постоянном проведении инвазивных диагностических или лечебных процедур;
• при проведенном до 1992 года переливании крови (ранее не существовало достоверных способов проверки донорского биологического материала на наличие вируса).
• при соприкосновении открытой раны с чужой кровью, нестерилизованным медицинским инструментарием. 

Рост заболеваемости растет с каждым годом. Поэтому для раннего выявления инфекции лабораторные тесты на HCV рекомендуют сдавать один раз в год.

Где сдать анализ

При обращении в поликлинику, пациент имеет право на бесплатные анализы. Но сначала сдают тест ИФА. И только при положительном либо сомнительном результате показано исследование методом ПЦР. Поэтому провести срочную диагностику можно обратившись в платную лабораторию, где сдать кровь на ПЦР можно в удобное для пациента время. Одновременно рекомендуют сразу проверить показатели печеночных ферментов, стандартные клинические параметры крови. 

Как правило, изучение крови методом ПЦР доступно практически в любой лаборатории. Если пункт забора крови не оснащен должным оборудованием, биологический материал транспортируют для проведения исследования с соблюдением температурного режима и других условий. Проведение ПЦР в поликлинике возможно только после других обследований, результаты которых косвенно укажут на наличие гепатита С.

Как правильно сдавать кровь

Перед тем, как сдавать кровь на обнаружения возможного вируса, следует соблюсти ряд правил подготовки к анализу.

Основные аспекты указаны в памятке:

1. За 5–7 дней отказаться от потребления жирной, жареной пищи, алкоголя. В целом, доктора рекомендуют придерживаться правил питания по диете №5.
2. За 12–14 часов до проведения исследования не есть. Пить можно только воду.
3. Сдать кровь лучше в первой половине дня.
4. До процедуры не курить.

Также следует предупредить доктора о принимаемых лекарственных препаратах, возможных проблемах со здоровьем, хронических заболеваниях. 

Забор крови выполняется из вены. После окончания процедуры место прокола медсестра заклеивает стерильным пластырем, предупреждает о необходимости согнуть руку и держать ее в таком положении 10–15 минут. В противном случае высока вероятность появления болезненной гематомы. 

Сколько по времени делается исследование?

Сколько делается анализ, зависит от лаборатории. Средний срок выполнения колеблется в пределах 1–3 дней. Некоторые клиники предоставляют платную услугу быстрой постановки ПЦР, однако время проведения ограничивается возможностями медицинской аппаратуры. 

В поликлинике результаты могут передаваться врачу в течение 7–10 дней. Это связывают с большим наплывом пациентов. При этом биологический материал хранится в соответствии со всеми требованиями. 

Расшифровка результатов

Как правило, расшифровка качественной ПЦР не представляет сложности. Но во избежание ошибочной трактовки, с полученным из лаборатории бланком следует обратиться к врачу. Варианты, что означает та или иная разновидность ПЦР, приведены в таблице.

Но нередко возникает ситуация, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Расшифровать такие результаты анализов может только врач.

Однако подобные данные возможны в следующих случаях:

• беременность;
• перенесенный в острой форме гепатит С;
• пройденный курс лечения от HCV;
• наличие инфекций, повышающих вероятность ложноположительного результата ИФА.

Только полимеразная цепная реакция показывает точное наличие вирусной инфекции в организме. На фоне отрицательной ПЦР положительный ИФА в большинстве случаев говорит о том, что человек не инфицирован. Но врачу следует точно установить причину ложноположительного результата.

Качественный анализ

Анализ ПЦР качественный на гепатит С подтверждает присутствие возбудителя заболевания в крови. Если РНК вируса не обнаружена, человек здоров. Но при подозрении на инфицирование рекомендуют повторно пройти исследование. Положительный результат свидетельствует об инфицировании. Но этот анализ не позволяет дифференцировать хронический гепатит С от острого, и не может показать, насколько активен патологический процесс. 

Количественный тест

Количественный анализ методом ПЦР проводится после подтверждения диагноза и его расшифровка важна для определения тактики лечения. В зависимости от концентрации частиц возбудителя гепатита С выделяют несколько степеней вирусной нагрузки: средняя, высокая и низкая. Чем больше показатель, тем тяжелее протекает инфекция и сложнее терапия. В норме вирусная РНК отсутствует в крови.

Генотипирование

Многие лаборатории проводят генотипирование в комплексе с количественной ПЦР, что позволяет сэкономить. Подобное исследование делают только один раз, перед началом лечения. Обычно выполняют анализ на один из четырех наиболее распространенных генотипов (1, 2, 3 или 4). Одновременно определяют и подтип HCV. Генотипирование на 5 и 6 подвид гепатита С возможно не в каждой лаборатории. 

Плюсы ПЦР диагностики

Диагностика методом ПЦР получила широкое распространение благодаря:

• высокой точности (при условии использования тест-систем последнего поколения);
• простоте забора биоматериала;
• быстроте получения результатов (максимум 5 дней).

Но основное преимущество состоит в широких диагностических возможностях исследования. Анализ позволяет не только выявить вирус, но и точно определить его концентрацию в организме и установить генотип инфекции. Кроме того, количественное исследование необходимо для оценки эффективности противовирусной терапии. Основная цель лечения – достижение нормы анализов (т. е. неопределяемого уровня РНК HCV) на 4, 12 или 24 неделе противовирусного курса и сохранение этого результата. 

Стоимость

Стоимость анализа ПЦР колеблется в зависимости от региона. Так, в Москве цены выше. Качественная ПЦР обойдется в 600–800 рублей, количественная – в 2200–3000 рублей, генотипирование – от 1000 рублей. Узнать точно, сколько стоит конкретное исследование, можно непосредственно в лаборатории, на сайте медицинской организации или по телефону.