Рнк вируса гепатита с количественное исследование менее
Гепатит С следует отнести к разряду коварных заболеваний, которые могут протекать бессимптомно, но угроза жизни пациента от этого не уменьшается. Для окружающих такой человек превращается в источник инфекции.
Чтобы добиться снижения темпов роста заболеваемости и улучшения здоровья людей, важно периодически контролировать состояние печени. Метод исследования крови на наличие РНК вируса гепатита С признан наиболее достоверным для диагностики и лечения заболевания.
Особенности вирусного гепатита С
Среди воспалительных заболеваний, поражающих печень, особую угрозу для жизни человека представляет гепатит С. Причиной заражения может стать нарушение правил стерильности во время процедуры переливания крови. Намного реже инфицирование происходит в результате полового контакта, а также во время родов, когда болеющая мать заражает новорожденного.
Коварство гепатита С в длительном отсутствии симптомов, которые могли бы помочь раньше начать лечение. Обычно признаки проявляются, когда болезнь переходит в самую тяжелую стадию, а цирроз или карциному уже сложно вылечить.
Течение гепатита С, наличие которого выявляют анализом на HCV, может быть острым или хроническим. Именно острая форма часто не сигнализирует явными симптомами, а обнаруживают патологию по результатам диагностики других заболеваний.
С переходом острого гепатита в стадию хронической патологии, возможны следующие варианты развития болезни:
- каждый пятый пациент выздоравливает после вовремя назначенного лечения;
- часть больных переходит в группу носителей вируса (неактивная форма хронического заболевания);
- у остальных заболевших прогресс хронической фазы подтверждают признаки поражения печени.
Момент перехода острого этапа в хроническую форму зафиксировать сложно. Причина в постепенном нарастании симптомов медленного поражения печени с отсутствием признаков желтухи.
Проявления HCV часто маскируются под симптоматику других заболеваний: повышенная температура, утомляемость, отсутствие аппетита. Потеря веса сопутствует скрытому прогрессированию болезни на протяжении десятков лет.
Популяция вируса скрытно поражает клеточную структуру крови, страдает также печень. Обнаружить фрагменты РНК возбудителя удается только при помощи ПЦР тестирования образцов крови на гепатит С.
Диагностика заболевания
Основной способ инфицирования гепатитом – через кровь. Вирусные агенты, оказавшись в здоровой клетке, вместе с кровотоком достигают печени, где активно размножаются.
Накопление вирионов в зараженных гепатоцитах приводит к разрушению печеночных клеток. Процесс стимулирует выработку антител, которые вступают в борьбу с неповрежденными гепатоцитами, утяжеляя последствия болезни.
Самым надежным способом, позволяющим обнаружить в крови следы вируса, специалисты называют ПЦР анализ. Суть революционного метода полимеразной цепной реакции состоит в обнаружении цепочек вирусных РНК при создании определенной среды, куда помещают взятую на анализ пробу крови. Этапы диагностического процесса:
- После получения отобранного биоматериала в нем тиражируют множество копий РНК, принадлежащих вирусу гепатита С.
- Использованием многофункциональных тестовых систем с нагреванием и очисткой раствора добиваются необходимого количества копий.
- При помощи тестовой диагностики определяют концентрацию в анализируемом образце сформировавшихся генов.
Под аббревиатурой РНК подразумевают рибонуклеиновую кислоту. Важная макромолекула вместе с ДНК присутствует в составе клеток любого живого организма. Молекула РНК, хранящая генетический код вируса гепатита С, склонна мутировать.
В процессе нескольких этапов диагностики происходит трансформация нуклеотидных цепочек с формированием РНК вируса гепатита С, если порция крови пациента содержала фрагменты возбудителя.
Безоговорочная достоверность ПЦР тестирования объясняется высоким уровнем чувствительности полимеразной реакции, обладающей следующими преимуществами:
- Для обнаружения HCV достаточно одного генома вируса на весь объем биоптата;
- Высокая способность к генотипированию для выявления определенного возбудителя;
- Возможность за одно тестирование обнаружить РНК различных типов вирусов.
Проведение лабораторного анализа вооружает специалиста информацией о наличии либо отсутствии РНК вируса в пробе крови. Благодаря тестированию можно определить концентрацию РНК различных типов вирусных частиц.
Показания для ПЦР-диагностики
ПЦР-диагностика показана пациентам:
- при подозрении на воспаление печени без проявления симптомов патологии;
- для проведения скрининга во время профилактических мероприятий;
- в ходе обследования людей после контакта с инфицированным человеком;
- при хроническом гепатите для оценки активности размножающегося вируса;
- для выяснения степени эффективности проведенной терапии.
Сдавать анализ на выявление вирусного РНК обязательно должны пациенты, болеющие циррозом. Диагностика ПЦР показана людям, имеющим инфицированных гепатитом С родственников или половых партнеров.
В группу риска также водят дети, рожденные от матерей, имеющих печеночную патологию. Анализ необходим при хронических болезнях печени неустановленной природы.
Разновидности тестирования и расшифровка результатов
Хроническую стадию заболевания печени сопровождают признаки фиброза с разрастанием соединительных тканей, что со временем нарушает структуру органа. Если вовремя начать лечение, повышается вероятность обратимости фиброза. Именно для выбора адекватной терапии важен учет результатов диагностики HCV, выполняемой поэтапно:
- Сначала методом качественного тестирования пытаются обнаружить следы вируса.
- Результаты количественного теста уточняют концентрацию в пробе вирусной РНК.
- Методом генотипирования устанавливают, к какому генотипу принадлежит возбудитель.
Ряд медиков считает диагностику на РНК вирусного гепатита обязательной для большинства пациентов, даже не имеющих характерных для патологии симптомов. Появление определенных жалоб уже свидетельствует о запущенном процессе с поражением печени циррозом, некрозом, онкологией.
В домашних условиях можно самостоятельно выполнить несложную диагностику гепатита, пользуясь экспресс-тестом ИФА. Тестовый комплект позволяет определить наличие антител к РНК вируса всего за 15 минут по капле крови. При выявлении антител потребуется дальнейшее обследование.
Задача начального этапа исследования – подтвердить наличие в тестируемом объеме генетических фрагментов HCV, если анализ крови показал наличие у пациента антител, готовых атаковать вирус гепатита С. Интерпретация результатов качественной диагностики имеет две позиции, с их особенностями важно ознакомиться:
- «РНК обнаружено». Положительный вариант результата указывает, что биологическая жидкость содержит фрагменты РНК возбудителя гепатита. Интерпретация показателя является подтверждением факта инфицирования: вирус размножается в крови носителя, печень подвергается разрушению.
- «РНК не обнаружено». При отрицательном варианте результата сохраняется вероятность малой концентрации вирусной РНК даже при явном отсутствии ее фрагментов. Тест не сможет выявить ничтожную концентрацию вирионов при недавнем заражении либо предшествовавшей противовирусной терапии.
Обнаружения РНК возбудителя по методике качественного тестирования, обеспечивающего 95% точности, достаточно для подтверждения гепатита С. Достоверность качественного этапа анализа ПЦР обеспечивает система с определенным порогом чувствительности (до 500 МЕ/мл).
При низкой виремии (концентрация вируса) потребуется помощь диагностической системы с показателем минимум 50 МЕ/мл. По результатам следующей части анализа определяют концентрацию вирионов в объеме исследуемого биоматериала.
Норма количественного этапа исследования
Следующая ступень тестирования биологического материала заключается в определении количественного состава популяции возбудителя. Тестирование вирусной нагрузки на единицу фиксированного объема крови способствует выяснению степени виремии, а также тяжести заболевания.
Таблица расшифровки числовых обозначений (норма) инфицирования по тесту HCV
| Спектр вирусной нагрузки, измеряемый в МЕ/мл | Интерпретация показателей, полученных методом полимеразной цепной реакции |
| Следы РНК вируса гепатита не обнаружены | Нулевой показатель признают нормой, а человека – здоровым |
| Значение 180 | РНК отсутствует или концентрация вируса ниже порогового диапазона |
| Меньше 800 тысяч | Обнаружена низкая степень виремии |
| Больше 800 тысяч | Обнаружена виремия высокого уровня |
| Значение выше 25 млн. | Виремия превышает допустимый диапазон измерений |
Если результаты качественного анализа с отсутствием следов РНК вируса гепатита подтверждаются количественно на следующем этапе тестирования, то человека действительно можно считать здоровым. В крови полностью отсутствует вирус опасной патологии.
Показатель количественной диагностики, не превышающий 400 тысяч МЕ/мл, указывает на минимальную концентрацию РНК опасного вируса, но не на отсутствие патологии. Нагрузку, превышающую значение 800 тысяч, считают высокой. Но среди медиков нет единого мнения в вопросе жестких рамок, ограничивающих минимальную и максимальную виремию.
Понятие генотипирования вируса HCV
Даже людям, не сталкивавшимся с гепатитом С, необходимо знать, что возбудитель смертельно опасного заболевания имеет несколько генотипов. Благодаря прогрессивным методикам исследований удалось обнаружить 11 генотипов вируса гепатита С, но наиболее распространенных всего 6 видов.
Каждому типу генома, имеющему определенные характеристики, дали буквенное наименование и присвоили статус квазивирусов.
Из-за постоянных мутаций, обеспечивающих способность вируса к выживанию в окружающей среде, иммунная система человека не успевает быстро распознать очередного мутанта, чтобы вырабатывать к нему антитела. Это объясняет высокую опасность заболеть гепатитом С, а вакцинация против печеночной патологии сегодня только на стадии разработки.
Жители Европы и Америки подвержены опасности инфицирования 1 и 2 генотипом HCV. Геном 3, имеющий два субтипа (3а и 3в), медики называют самым распространенным на планете. Жителям азиатских стран угрожает 4 и 6 тип генома возбудителя инфекционной болезни.
Особенности анализа на гепатит
Современные методики лечения новейшими препаратами позволяют не только вылечить патологию, но также избавить организм от вируса. Для этого необходимо установить его генотип и уровень концентрации в организме пациента.
Тест-системы некоторых лабораторий не оснащены соответствующими реагентами. Отсутствие возможности детерминирования субтипов генома приводит к выдаче результатов о невозможности типирования РНК.
В этом случае необходимо подтверждение диагноза методами дополнительных исследований с использованием основных маркеров гепатита. Обнаружение в крови человека иммуноглобулинов М и G сигнализирует о развитии в организме процесса, не характерного для здорового состояния.
Обозначенную ситуацию можно назвать первичным диагнозом, предупреждающим о необходимости комплексного обследования для получения объективной картины развивающегося процесса.
© 2018 – 2019, MedPechen.ru. Все права защищены.
Источник
Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.
HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.
Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:
| Проводимое исследование | Цели выполнения |
| Биохимический анализ крови и печеночные пробы | Позволяет оценить функциональную активность печени, уровень билирубина, показатели печеночных трансаминаз. Превышение нормы в 2 раза и более указывает на наличие заболевания |
| Клинические анализы крови, мочи и кала | Данные исследования неспецифичны, но по результатам можно установить наличие воспалительного процесса, оценить общее состояние пациента. Обнаружение билирубина в моче, изменение оттенка кала говорит в пользу поражения печени |
| Иммуноферментный анализ (ИФА) | Позволяет определить как наличие вирусной инфекции в организме, так и ее форму (острую или хроническую). Недостатком исследования является вероятность ложных результатов |
| Полимеразная цепная реакция | Дорогостоящий, сложный в проведении, но вместе с тем наиболее точный метод диагностики HCV. Позволяет подтвердить наличие вируса в организме человека, количественно установить уровень копий РНК, определить генотип HCV |
| Инструментальные обследования печени | Необходимо проведение УЗИ органов брюшной полости, установление стадии фиброза, оценка тяжести цирроза, исключение гепатоцеллюлярной карциномы |
Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.
Что такое ПЦР
Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.
В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:
- Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
- Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
- Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.
По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).
Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.
Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.
При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.
Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.
Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.
Виды исследования
Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.
Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):
- Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
- Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
- Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.
Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.
Особенности количественного анализа
Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.
Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:
- вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
- эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
- риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
- риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).
Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.
Показания
До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.
В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:
- положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
- положительный результат качественной ПЦР;
- контроль проводимого лечения.
При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.
Нам каких этапах заболевания проводится
Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:
- до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
- 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
- последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
- 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.
Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.
Как подготовиться к исследованию
Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.
Необходимо:
- сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
- процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
- в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
- за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
- если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.
Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.
Расшифровка количественного анализа на гепатит С
Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.
В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.
Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:
| Значение показателя | Уровень вирусной нагрузки |
| РНК вирус не обнаружены (либо количество копий меньше чувствительности тест-системы) | Норма, человек здоров либо анализ проведен в инкубационный период патологии |
| 1,8×102–7,9×105 МЕ/мл | Низкая вирусная нагрузка. Указывает на недавнее инфицирование, латентное течение либо эффективность противовирусных препаратов |
| 8×102–2,3×107 МЕ/мл | Умеренная вирусная нагрузка. Обычно отмечается при хронической форме HCV. Прогноз лечения благоприятный при условии соблюдения рекомендаций врача |
| 2,4×107 МЕ/мл и выше | Высокая виремия. Очень вероятны тяжелые осложнения (вплоть до рака печени) |
Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.
Норма
Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.
Получение отрицательного результата возможно при:
- самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
- раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
- при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).
Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.
Какие показатели крови указывают на гепатит С
Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.
Так, при гепатите С показательны такие данные:
- позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
- позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
- определение количества копий вируса при количественной ПЦР.
Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.
При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.
Бывает ли ложный тест
В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.
Преимущества количественного исследования методом ПЦР
Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.
Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.
Источник
