Вирус гепатита с в лимфоцитах

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЬЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА

На правах рукописи

НИКОЛАЕНКО Светлана Леонидовна

ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ В И С

14. 00. 10 — инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Санкт-Петербургском Государственном медицинском университете имени академика И.П. Павлова

Научный руководитель

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Е.П. Шувалова

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук профессор Т.В. Сологуб

доктор медицинских наук С.Л. Мукомолов

Ведущее учреждение Научно-исследовательский институт детских инфекций

Актуальность темы. Вирусные гепатиты, несмотря на определенные успехи в изучении этиологии, патогенеза, клиники и терапии, остаются проблемой, далекой от своего решения (Дунаевский О.А., 1993. Подымова С Д, 1993, Учайкин В Ф и др, 1994; Соринсон С Н, 1996, Alberti A et al, 1991; Barbara J A, 1994)

Необходимость дальнейшего изучения различных сторон патогенеза вирусных гепатитов возникает вследствие разработки новых методов ис­следования и возможности верификации гепатитов, ранее расцениваемых. как «ни А. ни В» (Мукомолов С Л и др, 1992, Рахманова А Г и др, 1995, Хазанов А И , 1996; Krogsgaard К et al. 1990, Chang W Y et al, 1992 )

Наряду с моноинфекциями, в результате общих путей и механизмов заражения, а также строго типоспецифического характера иммунитета, в последнее время наблюдается увеличение частоты ко- и суперинфицирования несколькими вирусами с развитием микст-гепатитов В большей мере это относится к вирусным гепатитам с парентеральным механизмом заражения (Соболевская О Л . 1995. Румянцев О.Н. и др., 1996, Шувалова ЕП. Антонова Т.В. 1996, Zeidis Y.B. et al, 1992, Liaw G.-F., 1995, Goranova Q et all, 1996)

Одной из причин развития затяжного течения вирусного гепатита счи­тают неполноценность ответной реакции организма в связи с нарушением функционирования иммунной системы (Соринсон С Н. и др . 1992. Шамшура О Л , Фролов А. В. , 1994. Баширова Д К. 1996, Собчак Д. М., Деречинская Е Л, 1996, Popper Н., Paronetto F . 1984: Paterlim P et al. 1993, Manns M P,1996).

Большое значение в патогенезе различных заболеваний придается структурно-метаболическом; состоянию иммунокомпетентных клеток (ИКК), от которого зависит функционирование иммунной системы в целом (Ляшенко ЮИ, 1988, 1992, Paronetto F, 1986. Bianchi FB, 1992. Schirmacher P et al. 1993) и, как следствие, течение инфекционного про­цесса. Одной из возможных причин несостоятельности лимфоцитов может явиться усиление процессов свободнорадикального окисления в их мем­бранах и нарушение его регуляции (Афонина Г Б , Бордонос В Г, 1990, Пастушенков В Л и др, 1993, Матвейков Г П и др. 1994, Devi M A . Das N P , 1994, Cardier YE et al, 1995), а также изменение внутриклеточного метаболизма, приводящего к нарушению созревания, дифференцировки и функционирования ИКК (Робинсон М.В , 1986, 1994, Николаев А И и др , 1989. Габрилович Д И и др . 1991, Гольтяпин Д Б . 1995, Huang С M et al, 1988,LosaGA., 1989)

Вышеизложенное послужило основанием для выбора направления наших исследований

Цель исследования: Оценить патогенетическое значение функционально-метаболического состояния лимфоцитов и их мембран при вирусных гепатитах различной этиологии, разработать на этой основе дополнительные критерии оценки тяжести и прогнозирования течения заболевания.

Задачи исследования:

1. Изучить состояние процессов липопероксидации в мембранах лимфоцитов и в плазме крови по уровню малонового диальдегида в динамике вирусных гепатитов различной этиологии.

2. Изучить состояние антиоксидантной защиты в лимфоцитах по уров­ню активности ее основного фермента — супероксиддисмутазы и биосинте­тическую активность клеток при вирусных гепатитах.

3. Определить состояние внутриклеточного метаболизма лимфоцитов по изменению активности ведущих ферментов основных обменных циклов (СДГ, ЛДГ, альфа-ГФДГ, НАД- и НАДФ-оксидазы) при остром вирусном гепатите В (ОВГВ) и гепатите В+С.

4. Определить характер иммунологических сдвигов при ОВГВ по состоянию Т-, В-клеточного звена иммунитета и неспецифической резистентности.

5. Оценить клиническое и патогенетическое значение состояния лимфоцитов в периферической крови и разработать дополнительные критерии оценки тяжести и прогнозирования течения вирусных гепатитов.

Основные положения, выносимые на защиту. В работе обосновывается положение о закономерном усилении перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран лимфоцитов, соответствующее периоду и форме тяжести вирусных гепатитов. Изменение уровня малонового диальдегида (МДА) в лимфоцитах имеет количественные различия и разнонаправленный характер в динамике заболевания при гепатитах различной этиологии.

Обсуждается положение о том, что дополнительным фактором. влияющим на функционирование иммунокомпетентных клеток (ИКК) при вирусных гепатитах, является измененное внутриклеточное метаболическое состояние лимфоцитов, оцениваемое по активности ключевых ферментов основных обменных циклов и содержанию РНК. ДНК и ПДН,

Состояние процессов ПОЛ и метаболизм лимфоцитов имеют важное патогенетическое значение, что обосновывает значение их показателей для оценки тяжести и прогнозирования течения вирусных гепатитов.

Научная новизна работы. Впервые выявлены преимущественно однотипные изменения метаболических процессов и функционирования иммунокомпетентных клеток при ОВГВ и ВГВ+С.

Получены новые данные о зависимости интенсивности ПОЛ в мембра­нах лимфоцитов и активности СОД от этиологии гепатита. Так, при лег­кой форме ВГС уровень МДА лимфоцитов в разгар заболевания не повышался и был существенно ниже, чем при ОВГВ и ВГВ+С. Если при циклической форме ОВГВ наблюдалось компенсаторное усиление активности СОД к периоду реконвалесценции, то у больных гепатитом В+С показатель оставался стабильным на протяжении заболевания.

Интенсивность ПОЛ и активность СОД лимфоцитов соответствовали тяжести и периоду вирусного гепатита.

Впервые выявлено достоверное увеличение эндонуклеолиза хроматина лимфоцитов при ОВГВ и усиление биосинтетической активности клеток независимо от тяжести и периода заболевания.

Практическая ценность работы. Выявленные закономерности изме­нения показателей МДА, активности СОД лимфоцитов при вирусных гепатитах в зависимости от тяжести и периода заболевания, обосновывают их прогностическое значение, а также возможность использования их определения для оценки тяжести заболевания и полноты выздоровления.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на заседании Санкт-Петербургского отделения Всероссийского научного общества инфекционистов (1997). представлены на 1. 2 и 3 Всероссийской неделе гастроэнтерологов(1995, 1996. 1997).

По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Пути реализации работы. Результаты исследования внедрены в практику работы Научно-исследовательского института детских инфекций (г. Санкт-Петербург) и инфекционного отделения в/ч 22412 ЛенВО, а также в учебном процессе на кафедре инфекционных болезней и эпидемиологии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 167 страницах машинописи, из них 132 страницы основного текста, содержит 23 таблицы и 12 рисунков, снабжена указателем литературы, включающим 182 отечественных и 139 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Под наблюдением находились 166 больныхвирусными гепатитами: 137 мужчин и 29 женщин. Возраст 86,2% обследованных не превышал 30 лет. В результате серологической верификации ВГ у 99 больных установ­лен диагноз ОВГВ, у 11 — ВГС, 56 больных имели одновременно маркеры ОВГВ и антитела к HCV (ВГВ+С).

Оценка формы тяжести вирусных гепатитов проводилась по общепри­нятым критериям. Легкая форма заболевания диагностирована у 23 больных ОВГВ, в том числе в 4 случаях — безжелтушная, средней тяжести — у 58. тяжелая — у 18 больных. В 4 случаях заболевание осложнилось разви­тием острой печеночной недостаточности (ОПН). У 3 из этих больных наблюдалось прогрессирующее течение заболевания, развитие печеночной комы с летальным исходом.

Гепатит В+С в легкой форме переносили 29 больных, в том числе в 3 случаях — безжелтушную, средней тяжести — 21 больной, тяжелую — 6 больных. В 3 случаях тяжелое течение заболевания осложнилось развитием ОПН, в одном из них — печеночной комой и легальным исходом.

Все 11 больных ВГС переносили заболевание в легкой форме, безжелтушную — в 4 случаях.

Одновременно с общепринятым клинико-лабораторным обследованием в динамике заболевания у 94 больных изучали состояние процессов ПОЛ мембран по уровню малонового диальдегида (МДА) в лимфоцитах и в плазме крови в тесте с тиобарбитуровой кислотой (Андреева Л.И, и др., 1988; Пастушенков В. Л. и др., 1993). Состояние системы антиоксидантной защиты в лимфоцитах оценивали по степени активности супероксиддисмутазы (СОД) методом Fndovich J. (1989). Функционально-метаболическую активность лимфоцитов изучали по активности ключевых ферментов основных обменных циклов, сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), альфа-глицерофосфатдегидрогеназа (альфа-ГФДГ) в цитозольной и митохондриальной изоформах. НАД-оксидаза и НАДФ-оксидаза методом С.Loida(1982).

Биосинтетическую активность лимфоцитов оценивали по величине коэффициента (альфа (К-альфа,), отражающего соотношение РНК/ДНК в методе люминесцентного микроспектрального анализа (Карнаухов В Н., 1978) Выраженность эндонуклеолиза ядерного хроматина характеризовали по уровню продуктов деградации нуклеотидов (ПДН), являющихся маркером данного процесса методом Иванника В П. и др.(198б).

Для оценки иммунного статуса 30 больных ОВГВ исследовали показатели клеточного, гуморального иммунитета и неспецифической резистентности. Иммунологические исследования проводились на базе НИЛ СПИД и инфекционных заболеваний в ВС РФ (ВМА) под руководством д.м.н Е.И. Змушко — начальника лаборатории.

ВИЧ и гепатит С возникают и развиваются параллельно более чем у 35 % пациентов. Вирусный гепатит существенно влияет на лечение ВИЧ, поэтому больным требуется особый уход, изменение своего образа жизни и проведение качественной терапии.

Внимание! Одновременное присутствие гепатита и ВИЧ в организме человека именуется коинфекцией.

Гепатит С (флавивирус) – это воспаление печени, протекающее практически бессимптомно. Отказ от его лечения может спровоцировать развитие цирроза, рака печени, печеночной недостаточности.

Среди чаще проявляющихся симптомов гепатита С можно выделить:

• астению,
• слабость,
• быструю утомляемость,
• появление сосудистых звездочек,
• асцит,
• тошноту и рвоту,
• боль в суставах,
• отсутствие аппетита.

Предлагаем прямо сейчас узнать, что опаснее – гепатит С или ВИЧ, какая продолжительность жизни у пациента с коинфекцией и что необходимо для получения результатов количественного анализа.

Содержание

Как передается инфекция?

Случаи, когда ВИЧ и гепатит С одновременно диагностируются у пациентов, распространены в России.

Причина заключается в схожих механизмах передачи вирусов:

• «кровь через кровь»,
• при незащищенной половой связи.

Способы передачи гепатита С включают роды – от матери к ребенку. Однако заражение происходит не во время беременности, а при контакте крови во время (либо сразу после) рождения малыша.

2–3 % случаев (крайне редко) заражения вирусом гепатита происходит бытовым путем – при использовании одной бритвы (если инфицированный человек ранее при её использовании поранился), при соприкосновении порезов и др.

Нагрузка на печень

Гепатит С – это не ВИЧ, важно не путать два разных заболевания, отличающихся по симптоматике и механизму развития. Однако их наличие в организме крайне отрицательно сказывается на состоянии печени.

Если вирус гепатита поражает непосредственно печеночную ткань, то ВИЧ-инфекция не атакует клетки печени (вирус иммунодефицита «интересуют» лимфоциты). Однако препараты, назначаемые при ВИЧ, способствуют интенсивному прогрессированию вируса гепатита С.

При коинфекции эффект на печень усиливается – здоровая печеночная ткань стремительно превращается в цирротическую, что затем влечет печеночную недостаточность. ВИЧ и гепатит С приводят к циррозу печени и жировому гепатозу.

Сколько живут с наличием двух инфекций?

Одновременное выявление ВИЧ и гепатита – сколько живут с этим диагнозом? Точного ответа дать невозможно, но при своевременном и правильном лечении гепатита пациент может продолжить долгое время.

Гепатит изначально протекает бессимптомно, но через некоторое время начинает развиваться и его можно диагностировать. Пациенты проживут с гепатитом С и ВИЧ полноценную жизнь, соблюдая все указания врача и не нарушая график приема препаратов.

Факторы, влияющие на качество жизни людей с коинфекцией:

• возраст пациента,
• наличие (отсутствие) инвалидности,
• состояние иммунной системы,
• сопутствующие заболевания.

Помните, никто не даст точного прогноза жизни при одновременном гепатите С и ВИЧ в организме – он прежде всего зависит от самого пациента, его образа жизни и уровня лечения.

Влияние ВИЧ на течение ВГС

ВИЧ ускоряет развитие ВГС при высокоактивной антиретровирусной терапии (обусловлено воздействием препаратов). Уровень виремии (присутствия различных вирусов в кровеносном русле) выше в 2 раза у пациентов при коинфекции.

В среднем гепатит С вместе с ВИЧ приводит к циррозу печени через 7 лет, но у моноинфицированных ВГС этот период больше в 3 раза.

Влияние вируса иммунодефицита на гепатит С:

• ускоренное развитие фиброза печени,
• повышение риска гепатоцеллюрной карциномы,
• рост смертности.

Особенности течения заболеваний, когда ВИЧ и гепатит С одновременно

ВИЧ и гепатит С образуют редкое звено синдрома иммунодефицита, провоцирующего рост сывороточной аминотрансферазы. Исследования иммунологов и гепатологов сводятся к тому, что снижение уровня сопротивления организма внешним факторам приводит к дисфункции печени.

Другой особенностью заболеваний являются одинаковые группы риска:

• маргиналы (бомжи, наркоманы и др.),
• медработники,
• доноры,
• пациенты, которым переливали кровь,
• гомосексуалисты,
• дети инфицированных родителей.

Внимание! Существует, но не подтверждено мнение о том, что присутствие коинфекции ускоряет переход ВИЧ в стадию СПИД.

При одновременном ВИЧ и гепатит людьми хуже переносятся обычные заболевания, продолжительность и качество жизни без эффективного лечения ухудшаются.

Течение гепатита С на фоне ВИЧ-инфекции

Развитие гепатита С ускоряют препараты, назначаемые при антиретровирусной терапии ВИЧ. Защитные реакции организма ухудшаются, что влечет приобретение гепатитом хронической формы.

Если ВИЧ диагностирован у родителей ребенка, он не только более подвержен передаче этого вируса, но и приобретению новых – гепатита, герпеса.

Диагностика

Начальные стадии ВИЧ и гепатита протекают бессимптомно – первые признаки проявляются через 6 мес.-1 год (в зависимости от состояния иммунной системы). При коинфекции симптоматика проявляется ранее, но для установления точного диагноза необходимо сдать анализы.

Для диагностики гепатита врач выписывает направления на анализы:

• крови и мочи,
• биохимию,
• диагностику вирусов типа В и С через ПЦР,
• УЗИ внутренних органов.

Диагностика ВИЧ осуществляется при сдаче венозной крови. Основные методы – ИФА (проверка биоматериала на антитела) и ПЦР (определение вирусной нагрузки, подтверждение положительного результата ИФА).

Преимуществом ПЦР является высокая чувствительность анализа и возможность выявить сразу несколько возбудителей. Отрицательный анализ ПЦР на гепатит С означает, что следы инфекции отсутствуют.

Лечение

Одновременное выявление ВИЧ и гепатита С требует грамотно составленной терапии. Перед началом её применения врачи определяют, какое заболевание лечить первым. В 6 из 10 случаев первым лечат гепатит С.

Группы пациентов с ВИЧ и гепатитом С, особенности и условия назначения лечения приведены в таблице:

Внимание! Современные исследования предполагают, что перед антиретровирусной терапией лучше вылечить гепатит С, чтобы создать благоприятную основу для ААРВ.

Помните, самостоятельно диагностировать ВИЧ и гепатит С и выбирать препараты для лечения – недопустимо!

Медицинские манипуляции

Наличие гепатита С и одновременно ВИЧ приводит к усложнению лечения, однако единственный способ борьбы с этими инфекциями – прием антиретровирусных препаратов. Никакие медицинские манипуляции не помогут снизить вирусную нагрузку и восстановить состояние печени.

Однако при стремительном развитии гепатита С на фоне ВИЧ рекомендуется сделать прививку от гепатита А и В. Они абсолютно безопасны для ВИЧ-положительных пациентов, но позволяют предотвратить риск передачи вируса.

Кроме того, при лечении важно:

• Соблюдать диету. Количество приемов пищи – не менее 2–3 раз в сутки, небольшие порции, сбалансированный рацион.
• Легкая нагрузка. Улучшить общее самочувствие позволит ходьба, занятия йогой, плавание или езда на велосипеде.
• Отказ от алкоголя и курения. Позволяет снизить риск прогрессирования заболеваний печени.

Антиретровирусные препараты

Интерферон и рибавирин являются основными препаратами для лечения гепатита С (в том числе в хронической форме). Только при одновременном приеме они способны уничтожить вирус и повысить защитные свойства организма.

Интерферон – это белок, образуемый в организме для борьбы с инфекциями. Попадая в ЖКТ, он разрушается, поэтому его введение осуществляется подкожным методом. Рибавирин направлен на усиление действия интерферона.

Среди назначаемых антиретровирусных препаратов:

• Зидовудин. При одновременном лечении гепатита С его рекомендуется заменить другим препаратом из группы НИОТ (например, фосфазидом).
• Диданозин. Однако при циррозе печени его назначение запрещено. Противопоказан препарат к приему со ставудином + рибавирином.
• Эфавиренз. Способен вызвать психические расстройства, поэтому принимать с Пег-ИФН необходимо осторожно.
• Ингибиторы протеазы.

Особенности лечения гепатита С при СПИДе

Даже при СПИДе лечение гепатита С осуществляется с применением препаратов интерферона (подкожно 3 раза в неделю) и рибавирина (2 раза в день в форме таблеток).

Необходим постоянный контроль над состоянием пациента, поскольку препараты вызывают сильные побочные эффекты:

• общая слабость,
• депрессия,
• повышенная раздражительность,
• анемия.

Обычно лечение гепатита С занимает от 6 до 12 месяцев.

Особенности лечения острого гепатита у больных ВИЧ-инфекцией

Лечить гепатит С в острой форме необходимо с назначением Пег-ИФН, продолжительность курса составляет 6 месяцев. Реализация комбинированной терапии при остром гепатите возможна, но на данный момент подобная тактика полностью не изучена.

Критерии эффективности проводимой противовирусной терапии

О высоком уровне эффективности терапии можно судить по ответу организма, выражающемуся в следующих критериях:

• снижение вирусной нагрузки,
• уменьшение активности АлАТ,
• снижение репликации РНК HСV,
• улучшенная гистологическая картина в печени.

Оценка вирусологического ответа

Через месяц после назначения лечения проводится качественный тест (анализ крови на ВИЧ и гепатит) на определение РНК HCV. Её отсутствие – отличный признак, свидетельствующий о достижении УВО и определяющий длительность терапии.

Уровень РНК HCV устанавливается перед началом лечения и спустя 12 недель. Используется единый метод, порог чувствительности которого составляет не менее 50 МЕ/мл. Если через 3 месяца после начала терапии РНК HCV упала на 2log10, лечение будет продолжено.

Оценка вирусологического ответа производится через 24, 48, 72 недели после начала терапии и 12 месяцев после его окончания. Расшифровка отрицательного и положительного результата осуществляется только врачом.

Оценка гистологического ответа

Повторная биопсия печени или эластография (методы диагностики) производится не ранее чем по истечении полугода после завершения терапии. Без достижения УВО их назначение показано для определения дальнейшей тактики ведения пациента.

Наблюдение за переносимостью лечения

Контроль над состоянием пациента осуществляется через 1, 2 и 4 недель после назначения терапии, затем ежемесячно.

Исследуется:

• активность аминотрансфераз,
• уровень билирубина,
• содержание клеток CD4.

Внимание! По усмотрению специалиста могут назначаться дополнительные анализы, включая установление уровня у-ГТП.

Наблюдение за переносимостью лечения производится с целью своевременного выявления побочных эффектов (нейтропении, анемии и др.). Их обнаружение необходимо для коррекции терапии и изменения дозировок препаратов.

Коррекция доз Пег-ИФН и рибавирина

Корректировка доз Пег-ИНФ и рибавирина:

Коррекция доз АРВ-препаратов у пациентов с циррозом печени

Цирроз печени приводит к ухудшению метаболизма АРВ-препаратов, что влияет на снижение эффективности их приема.

Методы коррекции:

• При декомпенсированном циррозе вирусный препарат группы ИП и ННИОТ должен употребляться в меньшей дозе.
• При компенсированном циррозе антиретровирусные средства назначаются в полной дозе (при отсутствии особых медицинских рекомендаций).
• При декомпенсированном циррозе + отсутствии возможности контролировать сывороточную концентрацию средств не назначаются препараты ННИОТ и уменьшается доза ИП.

Профилактика коинфекции

Пациенты с диагнозом ВИЧ могут обезопасить себя от заражения гепатитом С.

Для профилактики коинфекции людям рекомендуется:

• Содержать предметы личной гигиены, которые могут контактировать с кровью, в чистоте.
• Отказаться от алкоголя, принимать лекарства и травы только после консультации с врачом.
• Постоянно контролировать состояние печени, своевременно и регулярно сдавать анализы.
• Исключить любые возможные контакты с кровью человека, больного гепатитом С.

Внимание! Основная профилактическая мера коинфекции для пациентов, страдающих ВИЧ, – «перекрыть» основной канал инфицирования (инъекционные наркотики).

Помните, что в настоящее время проводится лечение гепатита С даже у наркоманов, поскольку наркотики не оказывают воздействия на антиретровирусные препараты.

Осложнения при одновременном носительстве ВИЧ и гепатита С

Опасное осложнение при коинфекции – стремительный переход ВИЧ в стадию СПИД. В настоящее время вопрос о выступлении гепатита С в качестве провоцирующего фактора изучается, но данные имеющихся исследований позволяют выдвинуть это утверждение.

Другие осложнения:

• Высокая подверженность депрессиям, что приводит к пропуску приема антивирусных препаратов.
• Могут наблюдаться сильные и необратимые повреждения печени, отказ её функционирования.
• Пациенты с ВИЧ с большей вероятностью инфицируют других людей гепатитом С, что обусловлено их высокой вирусной нагрузкой.

Выводы

Итак, что страшнее – ВИЧ или гепатит С? Любые рассуждения по этому вопросы субъективны и зависят от индивидуальных особенностей организма. Однако если гепатит С можно вылечить полностью, то лечения ВИЧ на данный момент не разработано.

Сколько может прожить пациент с ВИЧ и гепатитом С? Это полностью зависит от того, на какой стадии выявлено заболевание и какое лечение назначено. При адекватной терапии удастся избавиться от воспалительного процесса в гепатоцитах и замедлить прогрессирование СПИДа.

Помните, одновременное диагностирование ВИЧ и гепатита С – не приговор. Успешное лечение позволит повысить качество и увеличить продолжительность жизни, но в ближайшие месяцы потребуется изменить образ жизни и следовать всем рекомендациям специалиста!