Вирус гепатита в hbv качественно

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Виды ПЦР на вирусный гепатит В

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Качественный ПЦР и его трактовка

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

• отрицательный результат — вируса нет;
• положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Количественный ПЦР

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

1. Перед назначением лечения.
2. Для оценки эффективности терапии.
3. Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
4. Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

1 МЕ/мл = 5 копий/мл

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

Трактовка количественного ПЦР

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

• < 10^3 — нагрузка очень низкая, вирус ведет себя неактивно;
• от 10^4 до 10^5 — нагрузка низкая, вирус обычно неактивен;
• 10^6 — нагрузка умеренная, вирус ведет себя активно;
• 10^7 — виремия большая, вирус высокоактивен.

Зная количественно, как ведет себя вирус в организме, можно определить форму заболевания (хроническая, острая или носительство), необходимость проведения дополнительных исследований, реакцию организма и вируса на лечение:

1. Хронический гепатит В диагностируется, если значение трансаминазы будет выше нормы, активность вируса — больше 4, а концентрация ДНК-копий в миллилитре крови составит 10^5 копий.
2. Носительство определяется по следующей картине, которую дают результаты — концентрация < 10^5 копий/мл, а уровень трансаминазы равен стандартному значению.
3. Резистентность (устойчивость) при HBV постоянно контролируется во время лечения. Анализы сдаются каждые 3 месяца. Если в один из моментов виремия при гепатите увеличится в 10 раз, то это означает, что ВГВ приспособился к используемым лекарственным препаратам — стал устойчивым.
4. Благоприятный ход лечения покажет снижение виремии на 85% через 3 дня после начала терапии.
5. Направление на биопсию печени больной получает лишь тогда, когда показатель АЛТ (аланинаминотрансферазы) превышает нормальное значение не более 2 раз за 6 месяцев, а расшифровка ПЦР на гепатит В показывает виремию > 10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

• ДНК ВГВ < 2 х 10^4 копий/мл означает, что острая стадия не перейдет в хроническую форму;
• ДНК ВГВ лежит в пределах от 2 х 10^4 до 2 х 10^6 копий/мл означает, что у каждого 4-ого больного ВГВ станет хроническим, то есть хронизация составляет 25-30%;
• ДНК ВГВ > 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Подводя итоги

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

Определение ДНК вируса гепатита В необходимо преимущественно в диагностике хронической формы болезни. Проводится качественный и количественный анализ ДНК гепатита для установления активности репликации возбудителя (вирусная нагрузка) и принятия решения о необходимости начала специфической противовирусной терапии.

В процессе лечения хронического гепатита В и после завершения полного курса эти анализы проводятся повторно для оценки эффективности проведенной терапии.

Что такое ДНК вируса гепатита B

HBV DNA – это главная составляющая возбудителя гепатита В, в которой хранится генетическая информация о вирусе. В клинической практике определение ДНК HBV вместе с HBsAg и другими маркерами вирусного гепатита используется в диагностике хронической формы болезни, реже – острой.

Если в крови пациента не обнаружено следов ДНК HBV (качественный анализ отрицательный), то это позволяет полностью исключить диагноз острого и хронического гепатита В. Именно этот анализ помогает в сложных диагностических случаях, когда серологические маркеры вирусного гепатита В вызывают сомнения у лечащего врача.

Если позволяют технические возможности, то в крови пациента выявляют только ДНК HBV методом ПЦР без определения серологических маркеров вирусного гепатита В. Этот метод может быть использован в качестве скринингового как самый надежный, но не всегда доступный из-за своей высокой стоимости.

Показания к проведению исследования

В отечественной клинической практике традиционно принято не начинать обследование пациента с ДНК HBV, а стартовать с более доступных с финансовой и технической точек зрения серологических маркеров вирусного гепатита Б.

Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях:

• длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации);
• при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg);
• перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка);
• через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться);
• после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными).

Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии.

Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая.

Правила подготовки к анализу

Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо:

• на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов;
• исключить жирную пищу;
• выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови;
• запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня;
• приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая.

Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови.

Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов.

Читайте также: Анализ на гепатит В – расшифровка результата и норма показателей

Определение ДНК HBV методом ПЦР

ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов.

Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат.

ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность.

Качественное исследование

Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше.

Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны.

В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую.

Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии.

Количественное исследование

Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента.

Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения.

Расшифровка результатов

Нужно не просто найти вирус гепатита В в биологическом материале пациента, но и знать, как трактовать полученные результаты. Пациенту следует понимать, что анализировать сделанные самостоятельно выводы – далеко не всегда правильно. Оценивать весь комплекс анализов на основании клинического осмотра больного может только лечащий доктор.

Предварительно расшифровать полученный ответ можно с помощью таблицы:

Заключение

Бланки ПЦР-анализа на ДНК вируса гепатита В не являются диагнозом и основанием для назначения терапии противовирусными лекарственными средствами. Все выводы и необходимые дальнейшие рекомендации делает лечащий доктор.