Вирусы гепатита днк или рнк

Вирусные гепатиты — группа инфекционных заболеваний печени, вызванных гепатотропными вирусами, принадлежащими к разным семействам. В зависимости от ведущего пути передачи, вирусы гепатитов подразделяют на энтеральные (HAV и HEV) и парентеральные (HBV, HCV и HDV)

наверх

Вирусный гепатит А – одна из наиболее распространенных в мире кишечных инфекций. Это острое заболевание печени, передающееся фекально-оральным путем. Возбудителем является вирус гепатита А (HAV), относящийся к семейству Picornaviridae. Эпидемиологическая обстановка по ВГА в России остается неблагоприятной — в последние годы отмечается увеличение числа вспышек.

Решение диагностических и эпидемиологических аспектов проблемы гепатита А во многом определяется возможностями используемых методических подходов.

Выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительные преимущества по сравнению с ИФА и биохимическими тестами при выявлении вируса в крови контактных лиц, т.к. РНК возбудителя появляется в крови на третьей неделе от момента заражения и является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента (Рис.1). В то время как Аnti-HAV IgM появляются в крови от нескольких дней до нескольких недель после появления РНК вируса гепатита А, АЛТ — через две недели.

Также выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительное преимущество в чувствительности (как минимум в 1000 раз) по сравнению с детекцией антигена вируса в объектах окружающей среды (питьевые и сточные воды, воды из поверхностных водоемов и т.д.).

Информация для заказа:

наверх

Вирусный гепатит В – широко распространенная инфекция человека, вызываемая ДНК-содержащим вирусом гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae.

Вирусный гепатит В представляет собой серьезную проблему здравоохранения. В настоящее время по данным ВОЗ в мире насчитывается около 500 миллионов человек, инфицированных вирусом гепатита В. Общее количество больных хроническим гепатитом В достигает 50 млн. человек. 

Результаты лабораторных исследований играют ведущую роль для подтверждения диагноза вирусного гепатита В, установления диагноза хронического вирусного гепатита В, мониторинга активности вирусной репликации у носителей HBsAg, мониторинга эффективности противовирусной терапии.

Выявление ДНК вируса гепатита В c помощью ПЦР используется с целью:

— ранней диагностики острого вирусного гепатита В. Выявление ДНК HBV c помощью ПЦР позволяет эффективно обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, так как ДНК HBV появляется в крови в среднем на 3 недели раньше маркера HBsAg.

— выявления скрытых форм вирусного гепатита В (“оccult” hepatitis B). HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, в то время как ДНК HBV выявляется в плазме крови и ткани печени;

— выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В.

Определение вирусной нагрузки с помощью ПЦР используется для:

— установления диагноза хронического вирусного гепатита В;

— мониторинга эффективности противовирусной терапии;

— мониторинга активности вирусной репликации у носителей HbsAg.

Генотипирование вируса гепатита B целесообразно:

— в рамках эпидемиологического надзора за вирусом гепатита B, для мониторинга циркулирующих генотипов и прогноза развития эпидемиологической ситуации;

— для индивидуализации терапии и более точного прогноза ее эффективности.

Выявление мутаций устойчивости вируса гепатита B (HBV) к противоретровирусным препаратам позволяет проводить антивирусную терапию максимально экономично и эффективно.

Информация для заказа:

наверх

Вирус гепатита С — РНК содержащий вирус, относящимся к семейству Flaviviridae. Заражение вирусом гепатита С происходит преимущественно при попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях). Хронический вирусный гепатит С – одно из наиболее распространенных заболеваний печени, ведущих к развитию цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ведущую позицию в лабораторной диагностике ВГС занимают молекулярно-биологические методы, позволяющие: 1) установить факт инфицированности; 2) установить наличие показаний к противовирусному лечению; 3) выбрать оптимальную схему лечения; 4) своевременно оценить эффективность проводимого лечения и 5) оценить устойчивый ответ на лечение.

Выявление РНК HСV в качественном формате применяется для ранней диагностики острого вирусного гепатита С. РНК ВГС обнаруживается в плазме крови в среднем к 11 дню после заражения. Это позволяет диагностировать острый гепатит С задолго до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики и проверки донорской крови.

Количественная оценка уровня РНК HСV (вирусная нагрузка) в плазме крови применяется для мониторинга эффективности лечения, что отражено в консенсусном мнении международных экспертов по лечению ХГС и в рекомендациях по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года. Низкой вирусной нагрузкой принято считать значения менее 400 000 — 800 000 МЕ/мл.

Генотип вируса гепатита С — наиболее важный фактор, от которого зависит эффективность противовирусного лечения. Согласно современной классификации, выделяют 6 генотипов ВГС, из которых в России присутствует только 1, 2 и 3. Согласно Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года, «генотипирование ВГС должно выполняться всем пациентам до начала противовирусной терапии в целях планирования ее продолжительности, эффективности, в отдельных случаях – расчета дозы противовирусных препаратов».

Выявление полиморфизмов в гене IL28B — единственный рекомендованный фармакогенетический тест для инфицированных вирусом гепатита С. Согласно Рекомендациям по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года, «определение генотипа пациента по совокупности аллельных вариантов однонуклеотидных полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 в гене интерлейкина 28 В (IL28В) по данным исследований для пациентов с генотипом 1 ВГС служит надежным предиктором достижения устойчивого вирусологического ответа на фоне проведения двойной и тройной противовирусной терапии».

Информация для заказа:

наверх

Вирус гепатита D — РНК-содержащий вироид (несовершенный вирус), относящийся к семейству Deltavirus. HDV нуждается в хелперной функции вируса гепатита В, который обеспечивает вирус гепатита Дельта белками поверхностной оболочки (HBsAg). Поэтому HDV способен к эффективной репликации только в присутствии HBV.

HDV-инфекция может протекать в двух формах: коинфекции и суперинфекции. Коинфекцией называется инфекционный процесс, когда происходит одновременное заражение вирусами гепатита B и D. Суперинфекция – это инфекционный процесс, который развивается при заражении вирусом гепатита D больного хроническим гепатитом В или носителя вируса гепатита В. Коинфекция носит характер острого тяжелого заболевания с высоким риском развития фульминантного гепатита (до 20%). При суперинфекции, когда заболевание наслаивается на уже измененную ткань печени, в 70-80% случаев инфекция ведет к быстрому развитию цирроза.

РНК HDV является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента, антитела к D-Ag появляются на 2-3 недели позже. Выявление РНК HDV c помощью ПЦР позволяет обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики.

Распознавание HDV-инфекции на фоне гепатита В весьма важно, поскольку течение болезни, терапевтические подходы и прогноз при гепатите Дельта отличаются от таковых при гепатите В без гепатита Дельта. Количественное определение РНК вируса гепатита D в плазме крови необходимо проводить в процессе интерферонотерапии для оценки ее эффективности.

Информация для заказа:

наверх

Вирус гепатита G – РНК-содержащий, лимфотропный вирус, относящийся к семейству Flaviviridae, к которому относится и вирус гепатита С (HCV). Инфицирование HGV происходит при непосредственном попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях) или через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова (при половых контактах, вертикальной передаче).

HGV был впервые изолирован в 1995 году из крови пациента с хроническим гепатитом, у которого отсутствовали маркеры других вирусных гепатитов, из-за чего и был изначально отнесен к вирусам, вызывающим заболевания печени. Основным диагностическим маркером вируса гепатита G является определение РНК HGV методом ПЦР.

Информация для заказа:

наверх

Нормативные документы и публикации о вирусных гепатитах>> 

«Выявление генов вируса гепатита С (HVC) в крови пациента является вторым этапом лабораторной диагностики этой инфекционной патологии. Чтобы обнаружить возбудителя, который не имеет клеточной мембраны и, соответственно, поверхностных антигенов, используют метод полимеразной цепной реакции. С помощью этого метода определяют непосредственно молекулу, в которой закодирована вся его генетическая информация — РНК.

Содержание
Что это значит?
Анализ на РНК вируса гепатита С
РНК вируса гепатита С: метод ПЦР
РНК гепатита С: качественный анализ
РНК гепатита С: количественный анализ
Гепатит С: анализы и расшифровка

                                                                                                          РНК – Рибонуклеиновая кислота, наряду с ДНК входит в состав клеток всех живых организмов. Вирус гепатита С содержит молекулу РНК и имеет способность к ее мутациям.

Исследование на наличие генома HVC назначают обычно после того, как проводят общий, биохимический анализ крови и получают положительный ответ на антитела (anti-HVC).

Что это значит?

Исследование на антитела к HVC является скрининговым, то есть с его помощью можно обследовать большие контингенты населения (медиков, беременных, пациентов стационаров, доноров, инъекционных наркоманов, ВИЧ-инфицированных). Отрицательный результат лабораторного анализа anti-HVC говорит о том, что в крови обследуемого не обнаружено иммунной реакции на вирус. Отрицательный результат может быть получен в таких случаях:

Если человек никогда не заражался гепатитом С.

Если чувствительность лабораторной тест-системы оказалась ниже, чем концентрация anti-HVC.

Если инфицирование произошло менее 2 месяцев назад и anti-HVC в крови еще недостаточно для определения. При ложноотрицательном ответе по причине человеческого фактора.

Если же получен результат, что антитела к HVC у больного обнаружены, это значит, что вирус гепатита С находился в организме обследуемого на момент проведения исследования или был в крови некоторое время назад. При положительном результате на anti-HVC возникает необходимость проведения дополнительных лабораторных исследований, которые обнаружат генетический материал самого возбудителя, определят концентрацию его генов (вирусную нагрузку, виремию) и установят генотип.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Геном HVC в лабораторных условиях можно обнаружить с помощью нескольких исследований:

• разветвленной ДНК (р-ДНК);
• транскрипционной амплификации (ТМА);
• полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод р-ДНК — недорогой и простой способ обнаружения вирусного генома у большого количества обследуемых людей. Его главным недостатком является низкая чувствительность: выявляет HVC только при его концентрации свыше 500 МЕ/мл.

Метод транскрипционной амплификации обнаруживает в сыворотке крови нуклеиновые кислоты вируса. Анализ имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл), но он еще недостаточно внедрен в повсеместную лабораторную практику.

Метод ПЦР в России является самым распространенным и доступным лабораторным обследованием с высокой чувствительностью (от 50-60 МЕ/мл).

Исследование ПЦР выполняется в любой клинической лаборатории, имеющей соответствующую аккредитацию. Очень важным нюансом этого метода диагностики, который влияет на результат анализа, является чувствительность используемой в лаборатории тест-системы. Например, чувствительность диагностикума 60 МЕ/мл, как в лабораториях «Инвитро», позволяет обнаруживать вирусную РНК спустя 3 месяца после заражения. При низкой чувствительности тест-системы гены возбудителя могут не обнаруживаться даже спустя 4 месяца после инфицирования.

РНК вируса гепатита С: метод ПЦР

Метод ПЦР имеет множество преимуществ перед другими лабораторными исследованиями для обнаружения генов HVC:

• высокая чувствительность. Метод позволяет определять генетический материал возбудителя даже при его минимальной концентрации в образце;
• большая специфичность. Выявляет гены вируса определенного генотипа среди множества ДНК и РНК других возбудителей, что позволяет проводить генотипирование возбудителя;
• быстрота проведения. Отсутствие длительного процесса культивирования возбудителя сокращает время получения результата до нескольких часов; универсальность анализа.

Универсальная процедура проведения исследования позволяет одновременно использовать один образец крови человека для обнаружения генетического материала разных возбудителей. Эти преимущества позволяют считать ПЦР «золотым стандартом» лабораторной диагностики вирусного гепатита С вместе с иммуноферментным анализом на anti-HVC.

ПЦР — это исследование, используемое для определения генов HVC в крови обследуемого человека. Исследование состоит из нескольких этапов:

• Отбора образца биоматериала.
• Многократного увеличения концентрации копий РНК в отобранном образце.
• Обнаружения генетического материала с помощью специальных тест-систем.

После забора венозной крови у пациента проводят искусственное инициирование процесса множественного реплицирования (амплификации, копирования) генов HVC.

Для этого определенным способом несколько раз изменяют температуру внутри пробирки с биоматериалом. Когда количество копий РНК в пробирке достигает необходимого значения, проводят обнаружение возбудителя с помощью специальных тест-диагностикумов.

ПЦР-диагностика бывает

• качественной (обнаруживает присутствие вируса),
• количественной (определяет концентрацию вирусных генов в единице объема)
• генотипической (устанавливает генотип возбудителя).

РНК гепатита С: качественный анализ

Задача качественного ПЦР — определение наличия HVC в представленном биоматериале. Это исследование проводится обычно для скрининговой диагностики заболевания или выявления носительства. Назначают его после того, как выявят anti-HVC методом ИФА.

Чтобы поставить диагноз гепатита С, достаточно обнаружить генетический материал HCV качественно, то есть без подсчета его концентрации в объеме крови. Результатом качественного ПЦР может быть: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено».

Точность метода соответствует 95%. При этом точность самих тест-диагностикумов достигает 100%, а 5% — это человеческий фактор, который всегда присутствует в лабораторных исследованиях. Чтобы избежать ложноотрицательного анализа, особенно у людей с низкой виремией, необходима высокая чувствительность применяемой в исследовании диагностической системы. Чувствительность тест-системы должна быть не меньшей, чем 60 МЕ/мл.

РНК гепатита С: количественный анализ

Количественный анализ назначают тогда, когда нужно знать уровень виремии в организме человека. Показаниями для проведения этого исследования являются:

• положительный результат качественного ПЦР при условии обнаружения антител к вирусу;
• установление стадии патологии;
• определение вирусной нагрузки при гепатитах;
• выбор комбинации противовирусных препаратов;
• мониторинг вирулогического ответа на проводимую противовирусную терапию;
• оценка вероятности перехода острого гепатита С в хронический.

Результат анализа выражается в МЕ/мл (международных единицах в 1 мл сыворотки) или в копиях/мл (количестве копий генов вируса в 1 мл сыворотки). Количественный ПЦР не имеет нормы: в норме ген HVC в крови человека обнаруживаться не должен. Полученные результаты обследования сравнивают с референсными значениями, установленными для той или иной степени вирусной нагрузки.

Так, показатели (в МЕ/мл):

• ниже 4×10*5 считаются низкой виремией;
• от 4×10*5 до 8×10*5 — средней;
• свыше 8×10*5 — высокой.

Чем больше копий вирусной РНК в крови, тем агрессивнее протекает заболевание и больше риск передачи вируса окружающим. Но уровень вирусной нагрузки — не единственный показатель, влияющий на тяжесть течения патологии и дальнейший прогноз для пациента: важен также генотип возбудителя.

Установление генотипа необходимо для назначения правильной схемы лечения. От него также зависит прогноз для здоровья и жизни пациента. Например, вирус 3 генотипа чаще приводит к фиброзу или циррозу печени, в сравнении с пациентами носителями 1 генотипа.

Гепатит С: анализы и расшифровка

РНК Диагноз гепатита С невозможно поставить только по результатам только качественного и/или количественного анализа ПЦР: определения HVC и уровня вирусной нагрузки недостаточно для назначения адекватной противовирусной терапии. Потенциального больного нужно обследовать комплексно (клинически, лабораторно, инструментально), чтобы иметь объективную картину патологии. Правильно назначить комплекс обследований для установления диагноза гепатита С, а затем грамотно расшифровать полученные результаты может только врач.