Вирусы возбудители кишечных инфекций микробиология

Вирусыполиомиелита

Возбудители
полиомиелита относятся к РНК-содержащим
вирусам, семейству пикорнавирусов, роду
энтеровирусов. Это мелкие вирусы, имеющие
форму икосаэдра (многогранника) и
про­стое строение. Содержат однонитчатую
РНК, не обладают гемагглютинирующими
свойствами. Культивируют их на культурах
ткани, где они проявляют цитопатическое
действие. По антигенной структуре
различают 3 типа вируса полиомиелита.

Возбудитель устойчив
во внешней среде, особенно при низких
температурах, к действию многих
дезинфектантов, кислот, щелочей.
Чувствителен
к окислителям, действию высокой
темпе­ратуры.

Источник инфекции
— человек (больной или вирусоноситель).
Заражение
— алиментарным пу­тем (реже —
воздушно-капельным). Вирус первоначально
размножается в эпителии глотки, тонкого
кишечника, лимфоидной ткани кишечника.
Затем он попадает в кровь и, обладая
тропизмом к мо­тонейронам, проникает
в нервную систему. Наиболее чувствительны
к вирусу мотонейроны пе­редних рогов
спинного мозга, повреждение которых (в
результате размножения полиовируса)
при­водит к
развитию
параличей конечностей. Иногда болезнь
протекает по типу ОРЗ, легких кишечных
расстройств, сопровождается симптомами
раздражения мозговых оболочек. Иммунитет
продолжительный,
типоспецифический. Вирусологическая
диагностика
основана на выделении и типировании
вируса на культурах ткани, а также на
выявлении вируснейтратизуюших антител
в сыворотках крови.

Специфическое
лечение: в
начале заболевания вводят человеческий
иммуноглобулин.

Специфическая
профилактика:
экстренная проводится человеческим
иммуноглобулином; плановая — живой и
убитой вакцинами. Убитая вакцина Солка
достаточно эффективна, но не обес­печивает
местный иммунитет (на слизистой оболочке
желудочно-кишечного тракта), поэтому
при­витые люди могут быть носителями
вирулентного вируса живая вакцина
Себина более эффектив­на; она вводится
не парентерально, как убитая, а перорально,
что способствует созданию местного
иммунитета за счет образования секреторных
иммуноглобулинов А.

ВирусгепатитаА

Возбудитель гепатита
А относится к семейству Пикорнавирусов,
роду Энтеровирусов. Это РНК-содержащий
мелкий вирус с кубическим типом симметрии,
без суперкаисида. Не обладает
гемагглютинирующими свойствами.
Культивируется плохо (на культуре
печеночных клеток после заражения и
многочисленных пассажей в организме
обезьян мармозетов).

Вирус устойчив во
внешней среде, в широком диапазоне рН,
к прогреванию при 60 градусах.

Источник инфекции
— больной человек, который наиболее
заразен в инкубационном и про­дромальном
периодах (до появления желтухи). Заражение
— алиментарным путем (через пищу, по­суду
и другие инфицированные предметы).
Болеют в основном, дети и подростки от
1 года до 19 лет. Вспышки заболевания
наблюдаются в осенний и зимне-весенний
период. Инкубационный пе­риод — 2-6
недель. Заболевание
связано с вирусным поражением печёночной
ткани (отмечается ли­хорадка, желтуха,
боли в области печени); возможны стертые
формы заболевания. Исход болезни
благоприятный. Иммунитет стойкий,
продолжительный.

Микробиологическая
диагностика
включает: обнаружение антигена вируса
в фекалиях мето­дом ИФА; выявление
сывороточных антител (IgM)
к вирусу также методом ИФА.

Специфическое
лечение не
разработано.

Специфическая
профилактика:
для экстренной
профилактики вводят человеческий
иммуног­лобулин, что позволяет
уменьшить тяжесть течения и снизить
заболеваемость.

Тема 10. Возбудители бактериальных кишечных инфекций.

10.1. Сальмонеллы

Относятся к семейству Enterobacteriaceae,
родуSalmonella, который
состоит из двух видов: S.
enterica— возбудители
заболеваний человека и животных, включает
6 подвидов, которые подразделены на
серовары иS.bongori– изолированные от холоднокровных
животных, которые подразделены на 10
сероваров.

Сальмонеллы– грамотрицательные
палочки средней величины, большинство
из них подвижны, спор и капсул не образуют.
Факультативные анаэробы. На
дифференциально-диагностических
питательных средах Плоскирева, Левина
образуют бесцветные колонии, на висмут
сульфит агаре – черно-коричневые с
металлическим блеском, на среде Эндо
– бесцветные или бледно-розовые
прозрачные колонии. В качестве сред
обогащения используют селенитовую и
магниевые среды.

Биохимические свойства:к основным
биохимическим особенностям относятся:
ферментация глюкозы до кислоты и газа
за искл.S.typhi,
отсутствие ферментации лактозы, продукция
сероводорода, отсутствие индолообразования.

Антигенная структура. Сальмонеллы
обладают соматическим термостабильным
О-антигеном, по которому сальмонеллы
разделяют на серологические группы (А,
В, С, Д, Е), жгутиковым термолабильным Н
– антигеном – разделение сальмонелл
на серовары. Выделяют АГIспецифической фазы, обозначаемый
строчными латинскими буквами и АГIIнеспецифической фазы, который обозначают
арабскими цифрами. Некоторые сальмонеллы
обладают капсульным поверхностным
термолабильным К-АГ, а сальмонеллыS.typhiимеют полисахаридныйViантиген, являющийся
разновидностью К-антигена.

Факторы патогенности.

1. белок наружной мембраны инвазин –
   обеспечивает резистентность к фагоцитозу;

2. фермент супероксиддисмутаза –
   антифагоцитарная активность сальмонелл;

3. эндотоксин – развитие лихорадки;

4. энтеротоксин – обладает гомологией с
   холерным энтеротоксином.

У человека сальмонеллы могут вызывать
две группы заболеваний: 1) антропонозные
– брюшной тиф и паратиф А и В; 2)
зооантропонозные – сальмонеллезы.

Возбудителями брюшного тифа являются
S.typhi,
паратифа А –S.paratyphiA, а паратифа В -S.paratyphiB.

Основные клинические проявления:
циклическое течение, поражение
лимфатического аппарата тонкого
кишечника, лихорадка (повышение
температуры к 4-7 суткам), интоксикация,
появление розеолезной сыпи, живот вздут
вследствие накопления в кишках большого
количества газов, бред, галлюцинации,
падение кровяного давления, коллапс,
язык на спинке обложен грязновато-белым
налетом, по краям и с кончика чистый, по
боковой поверхности на языке заметны
отпечатки зубов. Осложнение – перфорация
тонкой кишки и кишечное кровотечение.
Иммунитет после перенесенного заболевания
напряженный и длительный.

Источник инфекции: больной человек
и бактерионоситель, которые выделяют
возбудителя во внешнюю среду с
испражнениями, мочой, слюной. Пути
передачи: водный, контактный, пищевой
(молоко, сметана, творог, мясной фарш).

Лабораторная диагностика. Материал для
исследованияопределяется характером
инфекционного процесса:

1. кровь

2. испражнения

3. рвотные массы и промывные воды желудка

4. дуоденальное содержимое

5. моча

6. труп (кусочки паренхиматозных органов
   кровь из сердца, желчь, содержимое и
   отрезок тонкой кишки).

Методы лабораторной диагностики.1
неделя заболевания и в течение всего
лихорадочного периода – метод гемокультуры
– посев крови в желчный бульон с
последующим пересевом на плотные
питательные среды. С конца второй недели
заболевания проводят бактериологический
метод исследования испражнений,
дуоденального содержимого. Бактериологическое
исследование желчи дает лучшие
результаты. Начиная со второй недели
заболевания проводятся серологические
исследования. В крови болных брюшным
тифом и паратифов с 8-10 дней болезни
появляются АТ к О- и Н- антигенам, которые
можно обнаружить с помощью реакции
агглютинации (РА) Видаля и реакции
пассивнойVi-гемагглютинации.
Диагностическим титром у непривитых
людей считают титр агглютинации 1: 100
при соответствующих клинических
показаниях. У ранее привитых больных
титр Н-АТ 1:200 не является надежным
диагностическим признаком. У таких
больных диагностический титр должен
быть не менее 1:400. Подтверждением активно
текущего инфекционного процесса является
нарастание титра О-АТ в период болезни.
К исходу болезни титр О-АТ понижается,
но накапливаются Н- агглютинины. Для
выявления хронического носительства
бактерий брюшного тифа используют РНГА
с эритроцитарнымViдиагностикумом. Диагностическое значение
имеет титр 1:40 и выше. Всех здоровых людей
с титром 1:80 относят к подозрительным
на носительство брюшного тифа.

Лечение. Этиотропная антибиотикотерапия
с учетом чувствительности возбудителя.

Профилактика. Для специфической
профилактики брюшного тифа используют
обогащенную Vi- антигеном
вакцину, по эпидемическим показаниям
назначают сухой брюшнотифозный
бактериофаг. Неспецифическая профилактика
включает: санитарно-бактериологический
контроль за системами водоснабжения,
соблюдение санитарно-гигиенических
правил при приготовлении пищи, выявление
бактерионосителей среди работников
пищеблоков, торговли, своевременное
выявление и изоляция больных.

Возбудителями сальмонеллезовявляются
многочисленные серовары сальмонелл
патогенные для человека и животных.
Чаще всего –
это S. typhimurium, S. enteritidis, S.
heidelberg, S. newport, S. dublin, S. choleraesuis. На
территории России доминирует в качестве
возбудителя сальмонеллезов -S.enteritidis.

Основной резервуар инфекции –
сельскохозяйственные животные, птица
(водоплавающая) и куры. Пути передачи:
водный, алиментарный. Факторы передачи:
мясо, молоко, яйца, субпродукты.

Сальмонеллезная инфекция обычно
протекает с клиникой ПТИ (гастроэнтерит).
Однако может протекать наряду с кишечной
формой и внекишечные: менингит, плеврит,
эндокардит, артрит, абсцессы печени,
селезенки, пиелонефрит. Это связано с
увеличением числа лиц с иммунодефицитом.
При снижении иммунного статуса сальмонеллы
могут прорывать лимфатический барьер
кишечника и проникать в кровь. Развивается
бактеремия и становятся возможными
внекишечные поражения.

За последние годы сформировались
госпитальные штаммы, в частности, S.typhimurium. Они отличаются
от остальных клиникой, эпидемиологией,
патогенезом. Госпитальные штаммы
вызывают вспышки внутрибольничных
инфекций, в основном, среди новорожденных
и ослабленных детей. Эти штаммы
характеризуются множественной
лекарственной устойчивостью,
детерминированнойRплазмидой.

Лабораторная диагностика. Материалом
для исследования являются:

1. кровь

2. испражнения

3. рвотные массы и промывные воды желудка

4. дуоденальное содержимое

5. моча

Методы лабораторной диагностики: 1)
бактериологический, 2) серологический
(РНГА).

Лечение.Применяется патогенетическая
терапия, направленная на нормализацию
водно-солевого обмена. При генерализованных
формах – этиотропная антибиотикотерапия.

Профилактика. Неспецифическая: проведение
ветеринарно-санитарных мероприятий,
направленных на предупреждение
распространения возбудителей среди
сельскохозяйственных животных и птицы,
а также соблюдение санитарно-гигиенических
правил при убое на мясоперерабатывающих
предприятиях, при хранении мяса и мясных
продуктов, приготовления пищи, достаточная
термическая обработка пищевых продуктов.

Специфическая профилактика сальмонеллеза
у сельскохозяйственных животных и
птицы.

Острые кишечные инфекции (ОКИ) широко
распространены во всем мире и
характеризуются фекально-оральным
(алиментарным, водным) или бытовым путем
распространения и первичной локализацией
возбудителя в кишечнике. Это полиэтиологичные
заболевания, возбудители которых
принадлежат различным группам
микроорганизмов (бактерии, грибы, вирусы,
простейшие).

К бактериальным
возбудителям ОКИ относятся представители
семейств:

1.Enterobacteriaceae:

Род
Shigella,
представители которого вызывают
антропонозную инфекцию- дизентерию.

Род
Salmonella,
представители которого вызывают
антропонозную инфекцию — брюшной тиф и
паратифы А и В и зооантропонозы —
сальмонеллезы.

Род
Esherichia

—
диареегенные E.coli,
вызывающие эшерихиозы.

Род
Iersinia,
вызывающие кишечные иерсиниозы и
псевдотуберкулез.

Бактерии
рода
Klebsiellaspp,
Proteusspp,
Entherobacterspp,
Citrobacter
spp-
вызывающие пищевые токсикоинфекции.

2.
Vibrionaceae

Род
Vibrio
— V.
cholerae
0,1 или 0139, вызывающие холеру и условно-
патогенные вибрионы, возбудители
вибрионогенных диарей.

3.
Camphylobacteriaceae

Род
Camphylobacter
(C.
jejuni,
C.
coli
и др.),
вызывающие зооантропонозы —
кампилобактериозы. Род Helicobacter
(H.pilori
, ассоциированный с язвой желудка и 12
перстной кишки).

4. Bacciillaceae.

Род
Bacillus(B
.cereus,
вызывающий пищевые токсикоинфекции).

5. Clostridiaceae

Род
Clostridium
(С. botulinum,
C.difficilaе)
— вызывающий антибиотикоиндуцированный
псевдомембранозный энтероколит.

6. Staphylococceae

Род
Staphylococcus
(S.
аureus),
продуцирующий энтеротоксин. При попадании
в организм с продуктами питания большого
количества энтеротоксина развивается
стафилококковый пищевой токсикоз.

Вирусы
— возбудители
острых кишечных инфекций- это ротавирусы,
вирус Норволка, некоторые серовары
аденовирусов, энтеровирусов в том числе
вирус гепатита А и вирус гепатита Е.

Нормальная микрофлора ЖКТ

В пищеварительной системе отмечается
своеобразное распределения микрофлоры.
На протяжении ЖКТ выделяют несколько
биотопов, существенно отличающихся по
составу микробиоценоза, что связано с
различными морфологическими,
функциональными и биохимическими
особенностями соответствующих отделов
ЖКТ.

Пищевод.Микрофлора пищевода
скудная. Проксимальный отдел контамирован
бактериями, типичными для микрофлоры
полости рта и глотки, в дистанных отделах
можно обнаружитьStaphylococcus spp,
дифтероиды,Sarcina spp, B.
subtilis, грибы родаCandida.

Желудок.
В желудке
бактерии практически отсутствуют, их
число не превышает 103
мл содержимого. Это обусловлено действиями
соляной кислоты, лизоцима, ферментов.
Большое количество бактерии выявляются
в пилорической его части. Видовой состав
представлен Lactobacillusspp
, Bifidobacterium spp, Bacteroides spp, Streptococcus spp,
дрожжеподобными грибами, Sarcina
spp, Enterococcus spp, Pseudomonas spp, Bacteroides spp.

Кишечник.
В
двенадцатиперстной кишке количество
бактерий составляет не более 104-
105
КОЕ 1 мл содержимого. Микрофлора
представлена
Lactobacillus
spp, Bifidobacterium spp, Bacteroides spp, Enterococcus spp.
Часть их
поступает с пищевыми массами, другие
из верхних отделов тонкой кишки.

В
верхних отделах тонкой кишки микроорганизмы
определятся в небольшом количестве 104
КОЕ/мл. Основным механизмом, препятствующим
росту бактерий в тонкой кишке, является
действие желчи, ферментов, кишечная
перистальтика, секреция в просвет кишки
иммуноглобулинов. По мере продвижения
и дистальному отделу тонкого кишечника
действиe бактерицидных и бактериостатических
факторов ослабевает и у входа в толстый
кишечник для бактерий создаются
благоприятные условия (определенный
рН, температура, много питательных
субстратов), что способствует их
интенсивному размножению. В связи с
этим и наличием большого количества
продуктов распада постоянная нормальная
микрофлора толстого кишечника у взрослых
занимает первое место по численности
(1011
– 1012
КОЕ / г фекалий) и многообразию ( более
100 различных видов микроорганизмов
постоянно)

Так
как в этом биотопе создаются анаэробные
условия у здорового человека в составе
нормальной микрофлоры в толстом кишечнике
преобладают (96-99%), анаэробные
бактерии-бактероиды,C.рerfringens,
Streptoccocusspp,
Fubacterium spp , Veilonella spp, Gemellaspp,
Peptostreptococcus
spp, Lactobacillusspp,
только до 4% микрофлоры составляют
аэробные факультативно- анаэробные
микроорганизмы E.coli,
Enterobacteriaceae spp,
в небольшом количестве Staphylococcus
spp, Proteus spp, Pseudomonas spp, грибы рода Сandidaspp,
отдельные
виды Treponemaspp,
Mycobacterium spp, Mycoplasma spp, Actinomyces spp, простейшие
и вирусы.

Желчные
протоки. Печень.
У здоровых людей микробы в желчных путях
обычно отсутствуют.

Неспецифические
заболевания ЖКТ

Неспецифические
заболевания ЖКТ — диарея, неспецифический
колит, синдром малой сорбции, дуоденит,
язвенная болезнь желудка, гастрит,
гастроэнтерит, холангит, холецистит,
эзофагит. Они часто ассоциируются с
энтеровирусами, ротавирусами, амебиазом,
балантидиозом, молочницей, кандидозом
кишечника.

Микробиология
гастроэнтероколита
— воспаление слизистых оболочек желудка
и тонкой кишки. Этиологическим фактором
являются Enterobacteriumspp,
Staphylococcus spp, Clostridium spp, Bacillus spp, Camphylobacteriumspp,
Iersiniaspp
,Vibrio spp, ротавирусы, энтеровирусы.

Микробиология
гастрита —
поражение слизистой оболочки желудка,
сопровождающееся нарушением функций.
Гастриты,
язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной
кишки ассоциируются с
H.
pilori.

Микробиология
эзофагита — воспаление
слизистой оболочки пищевода. Основной
возбудитель C.
albicans,
вирусы простого герпеса, цитомегаловирусы.

Микробиология
холецистита —
воспаление желчного пузыря, преимущественно
бактериального происхождения (E
.coli
, S.
aureus,
Enterococcusspp,
Streptococcus spp,
Proteus spp,
дрожжеподобные грибы, смешанная флора.).

Микробиологическая
диагностика. Основным
методом микробиологической диагностики
при ОКИ является бактериологическое
исследование.

Забор материала:

— фекалии собирают в стерильную посуду
соблюдая правила асептики. При естественной
дефекации сбор проводят с пеленок или
из горшка стерильным шпателем,
вмонтированным в ватную пробку пробирки;

— фекальные массы можно забирать из
прямой кишки с помощью ректальной
трубки, которую вводят на 8-10см;

—
при профилактическом обследовании
здоровых людей на тифо- паратифозное
носительство, обследуемому необходимо
давать за 3 часа до начала сбора материала
25-30гр сернокислой магнезии, которая
является желчегонным и слабительным;

— забор материала проводят при появлении
первых признаков заболевания, до начала
лечения антибиотиками. Забор и первичный
посев материала желательно проводить
в приемном покое, в лабораторию он должен
быть доставлен не позже 2-х часов после
взятия, в противном случае его необходимо
сохранять в холодильнике. При невозможности
немедленного посева собранный материал
помещают в пробирки с консервирующим
раствором;

— транспортировка должна проводиться
с соблюдение необходимых правил
осторожности — в биксах, пеналах;

— из пищевода и желудка материал берут
при эзофагоскопии и гастроскопии;

— забор содержимого тонкого отдела
кишечника проводят при использовании
зонда. Пробу исследуют не позже часа
после ее забора;

— при энтеральных эшерихиозах — это
фекалии, материал розеол, моча, желчь,
рвотные массы;

— при парентеральных’эшерихиозах —
гнойное отделяемое, моча, мокрота, кровь
при септических формах;

— тифо-паротифные инфекциивыбор
материала определяется фазой патогенеза:

— фаза бактериемии
(1 неделя) кровь,

— разгар заболевания (2,3 неделя): кровь,
пунктат костного мозга, соскоб с розеол;

— выделительно-аллергическая
фаза (4 неделя): кровь (при рецидиве),
фекалии, моча, желчь;

желчь
отбирают в
стерильные пробирки при зондировании
12 перстной кишки. При этом отдельно
собирают дуоденальное содержимое,
пузырную желчь и желчь из желчных
протоков (партии А, В, С);

—
розеолыскарифицируют, взятый
материал засевают на желчный бульон;

— забор мочи, СМЖ, биоптатов костного
мозга, мокроты — описано в соответствующих
разделах.

Микробиологическая
диагностика

Лабораторное
исследование фекалий начинается с
предварительного капрологического
исследования, для этого необходимо:

— приготовить мазки из фекалий, окрасить
их метиленовым синим для выявления
лейкоцитов, что свидетельствует о
поражении слизистой кишечника;

— провести
микроскопический анализ нативного
мазка из фекалий на яйцеглист, так как
гельминтозы могут протекать с клиникой
острых кишечных инфекций;

— провести микроскопический анализ на
простейших (амебы, лямблии, криптоспоридии).

Бактериологическое
исследование фекалий при подозрении
на ОКИ

Особенности
проведения 1-
ого этапа
бактериологического исследования при
подозрении на ОКИ состоят в следующем:

— первичная
микроскопия мазков из фекалии не
проводится;

— учитывая полиэтиологичность ОКИ для
выделения чистой культуры посев
разведений фекалий делают на
дифференциально-диагностические среды
( Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит
агар и среды обогащения).

На
2 этапе
бактериологического исследования

—
отбирают выросшие лактозонегативные
колонии (бесцветные). Их образуют
сальмонеллы, шигеллы;

— лактозоположительные (окрашенные)
колонии, которые дали эшерихии аккуратно
снимают петлей и с ними ставят реакцию
агглютинацию с комплексной поливалентной
эшерихиозной сывороткой к различным
патогенным серогруппам. Колонии, с
которыми был зарегистрирован положительный
результат, при реакции с соответствующей
сывороткой, отсеивают для накопления
на скошенный агар.

Накопленную культуру идентифицируют
до рода и вида по комплексу биохимических
свойств:

— в случае подозрения на иерсиниоз,
первичный посев проводится на среду
Серова с последующим холодовым обогащение
(посевы помещают в холодильник с
последующим высевом на плотные питательные
среды);

— в случае подозрения
на кампилобактериоз, первичный посев
проводится на специальные для них
питательные среды с добавление
антибиотиков. Посевы инкубируют в
анаэростатах;

— при бактериологической
диагностике холеры материал от больного
засевают на элективную среду (1%-ная
пептонная вода, щелочной агар);

—
для диагностики заболеваний, вызванных
C.
difficile
в фекалиях больных обнаруживают
экзотоксин. Используют ИФА или молекулярно
— генетические методы.

При подозрении
на пищевую токсикоинфекцию первичный
посев материала проводится на несколько
определенных сред:

— посев на среду
Эндо — для выделения энтеробактерий;

— посев по Щукевичу
— для выделения протея;

—
посев на ЖСА — для выделения S.
aureus,

— посев на кровяной агар — для выделения
стрептококков;

— посев на среду Китт – Тарроци — для
выделения анаэробов.

— посев на среду
Сабуро – для выделения грибов.

Для
микробиологической диагностики ОКИ
также используется: серодиагностика
— чаще
проводится ретроспективно.

Иммуноиндикация
— реакция
иммунофлюоресценции, латекс- агглютинация,
Ко-агглютинации.