Анализ пцр на гепатит обнаружено
Для постановки диагноза “хронический вирусный гепатит С (ХВГС)” требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.
Содержание
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Три вида ПЦР анализов
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Результат анализа ПЦР на гепатит С
Что показывает этот анализ и зачем он нужен?
Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.
Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.
Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.
Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.
Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.
ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:
- высокая чувствительность – 97-98%;
- гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
- быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).
Три вида ПЦР анализов
Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.
Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.
Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.
Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:
- в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
- часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
- вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.
Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.
Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?
Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:
- исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
- разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
- накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
- за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
- до момента забора крови не рекомендуется курить.
Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.
Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).
Результат анализа ПЦР на гепатит С
Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.
Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.
Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.
Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.
Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.
Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.
Источник
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это лабораторный метод определения ДНК и РНК. Впервые он был опробован почти полвека назад американцем Кэри Муллисом. Этот сверхчувствительный анализ способен определить носителя генома по одной исходной молекуле, содержащейся в крови, слюне или коже.
Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают
Суть анализа ПЦР заключается в том, что часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР на вирусы гепатита позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам.
Применяется два типа ПЦР:
- качественный;
- количественный.
Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.
Качественный и количественный ПЦР
ПЦР качественный на гепатит дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.
При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.
Подготовка к ПЦР анализу на гепатит
Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.
Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:
- За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
- Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
- Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
- За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.
ПЦР анализ на гепатит С
Если ПЦР анализ на гепатит С дает положительный результат, это говорит о том, что патогенный микроорганизм непрерывно делится и поражает печеночные клетки.
Последующий ПЦР количественный на гепатит С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.
Ниже в таблице представлена расшифровка количественного исследования на гепатит С методом ПЦР:
| Вирусная нагрузка, копий/мл | Оценка нагрузки | Характер репликации возбудителя |
| 103 и меньше | Очень низкая | Неактивная |
| 104 – 105 | Низкая | Чаще неактивная |
| 106 | Умеренная | Активная |
| 107 | Большая | Высокоактивная |
- Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.
- Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.
- Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.
Количественный ПЦР анализ при гепатите С проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.
По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.
ПЦР анализ на гепатит B
ПЦР анализ на гепатит B (В) производится для обнаружения инфекции (ДНК НВV).
Концентрацию ДНК ВГВ измеряют в копий/мл или me/мл. В оценке результатов исследования ориентируются на следующие показатели:
- < 2х10, что означает при расшифровке, что острая стадия не станет хронической;
- от 2х10^4 до 2х10^6 – в тридцати процентах случаев станет хроническим;
- >2х10^6 – в девяноста пяти процентах случаев станет хроническим.
Количественный ПЦР – главный метод диагностирования обострений гепатита В, выявления скрытого носителя инфекции с высокой виремией НВV.
Расшифровка ПЦР анализа на гепатит
Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:
- отрицательный;
- положительный.
ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
Положительный анализ ПЦР свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса гепатита.
Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:
- правил хранения реактивов;
- соответствующей квалификации медперсонала;
- чистоты биоматериала.
Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.
Количественный ПЦР на гепатит позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:
- уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
- определяется эффективность противовирусного лечения;
- выясняется необходимость биопсии печени.
В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.
Стоимость ПЦР диагностики
Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.
Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.
- Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.
- Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для гепатита B (Б) цена количественного исследования: 1200-10000 руб.
Достоинства и недостатки метода ПЦР
В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?
- Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
- Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
- Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
- Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
- Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.
Недостатки ПЦР анализа являются следствием ее достоинств:
- для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты , в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
- высокие требования к персоналу , осуществляющему забор и анализ биоматериала.
Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).
Автор статьи врач-инфекционист, гепатолог
© 2019 – 2020. Все права защищены.
Источник
ПЦР-диагностика гепатита С – это исследование биологических образцов с применением полимеразной цепной реакции. Способ заключается в многократном копировании фрагментов РНК вируса. Благодаря такой методике всего нескольких молекул возбудителя достаточно для того, чтобы тест отреагировал на присутствие вируса. Результат можно получить уже в первые 5-7 дней после контакта с зараженным человеком. ПЦР позволяет выявить факт инфицирования, а также приблизительную концентрацию HCV и его генотип.
Когда назначается анализ ПЦР
Самая очевидная причина для назначения ПЦР на гепатит С в крови – это наличие признаков заболеваний печени:
- хроническая усталость;
- боли в области печени;
- желтизна кожи и белков глаз;
- гипертрофия печени;
- тошнота.
Анализ на ПЦР целесообразно сделать в условиях повышенного риска заражения:
- сексуальный контакт с предполагаемым носителем гепатита;
- повышенная активность АЛТ и АСТ, выявленные по результатам биохимического анализа крови;
- если результат ИФА на антитела к вирусу гепатита положительный.
Другие показания к сдаче крови:
- Врачи-гепатологи назначают ПЦР на гепатит С в профилактических целях перед операциями.
- Медработники и сотрудники детских садов и школ сдают анализ в ходе плановых проверок.
- Метод показан при проведении вакцинации против вируса гепатита В.
- Анализ проводится несколько раз в ходе терапии гепатита С, чтобы оценить ее эффективность.
- ПЦР нужен для исключения смешанного поражения печени, что иногда бывает при гепатите В.
Как подготовиться и сдавать кровь
В течение дня у человека меняется соотношение эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, а также активность некоторых гормонов. Прием пищи влияет на наличие жирных кислот в крови. Этот фактор мешает точности анализа. По этим причинам анализ ПЦР на гепатит С проводится утром натощак. В качестве исследуемого образца берется кровь из вены.
Перед сдачей анализа требуется подготовка:
- за 2-3 дня – ограничить нагрузку на печень (исключить алкогольные напитки, не употреблять жирную и жареную пищу);
- за сутки – исключить стресс, поднятие тяжестей, посещение спортзала и бассейна;
- за 8 часов – прекратить употребление любой пищи, так как глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь, изменяют качество ферментной реакции;
- с утра до момента сдачи крови – не курить.
На результат анализа может повлиять повышение концентрации адреналина в крови. Чтобы исключить эту погрешность, нужно прийти на 20 минут раньше, отдышаться и успокоиться.
На эффективность анализа крови могут влиять разные препараты – БАДы, средства с кофеином, этанолом, глюкозой, леводопой, пероральные контрацептивы, антибиотики. Даже если человек принимает обычные витамины, об этом нужно предупредить врача.
Расшифровка ПЦР на гепатит С
В настоящее время используются три метода ПЦР:
- качественный (тест на наличие или отсутствие вируса);
- количественный (тест на концентрацию вируса в крови);
- с генотипированием (определяет принадлежность HVC к конкретному генотипу и субтипу).
Качественный анализ
Качественный анализ – это метод диагностики гепатита С, который позволяет подтвердить или опровергнуть присутствие вируса в крови. Выявляет наличие в определенной концентрации – в пределах 10-500 МЕ/мл. Выполняется в течение 1-4 дней и дает следующие результаты:
- «Не обнаружено» – вирус отсутствует либо его концентрация так мала, что реагент его не распознает.
- «Обнаружено» – вирус HCV присутствует, и его концентрация выше минимального порога чувствительности. Анализ выдает такой результат уже на 3-4 день после заражения.
Количественный анализ
Этот метод оценивает вирусную нагрузку, которая меняется в зависимости от стадии заболевания или этапа излечения. Метод не только показывает наличие флавивируса, но и его концентрацию в МЕ (международных единицах) на 1 мл крови. Это играет решающую роль при выборе тактики лечения гепатита С. Результаты количественной ПЦР-диагностики записываются следующим образом:
| Количество вируса (МЕ/мл) | Расшифровка |
| Нет | Вирус отсутствует или количество HCV недостаточно для того, чтобы тест на него среагировал. |
| Менее 1,8х10^2 | Концентрация вируса ниже линии границы. |
| Менее 8х10^5 | Количество незначительное, соответствует началу заболевания. Прогноз благоприятный. |
| Более 8х10^5 | Количество высокое, требуется лечение. |
| Более 2.4х10^7 | Концентрация вируса выше линейного диапазона. |
В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.
Для упрощения подсчетов:
10^2 = 100
10^3 = 1000
10^4 = 10 000
10^5 = 100 000
10^6 = 1 000 000
Просто подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите результат. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).
Если затрудняетесь или есть вопросы по другим переменным анализов, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы.
Количественный анализ ПЦР на гепатит С необходим для оптимального выбора препарата. С его помощью можно прогнозировать осложнения и эффективность терапии. Он позволяет оценить степень заразности носителя гепатита для окружающих: чем большее число вирусов насчитывается в крови, тем больше риск заражения.
Генотипирование
Сегодня известно, что у гепатита С имеется 11 генотипов и огромное количество субтипов. В разных странах есть свои приоритетные разновидности. В России в основном встречается 1 генотип (1b чаще, чем 1а), на втором месте по распространенности – 3 генотип (субтип 3а), на третьем – 2.
У каждого генотипа свои особенности. Зная их, можно спрогнозировать характер течения инфекции, риск перехода в хроническую форму и вероятность ответа на противовирусную терапию. Например, 3 генотип HCV провоцирует стеатоз, а 1 генотип требует лечения в течение 48 недель. По рекомендациям Минздрава генотипирование должно предшествовать противовирусной терапии.
Исходя из результатов, врач определяет противовирусный препарат, его дозировку, курс приема.
Преимущества и недостатки ПЦР
ПЦР-диагностика на вирусный гепатит С опережает иные методы по чувствительности, низкой вероятности ошибок и другим показателям:
- Позволяет выявить вирус на самых ранних стадиях, когда концентрация его в крови ничтожно мала. Для сравнения, иммунофлюоресцентный анализ (ИФА) реагирует только на иммуноглобулины, а они вырабатываются лишь через несколько недель в ответ на инфекцию. В то же время ПЦР реагирует на сам антиген и показывает присутствие вируса уже через 5 дней после заражения.
- Ложные результаты возникают гораздо реже, чем у других методов. Так, у ИФА возможны ложные результаты на гепатит при появлении перекрестных антител, но ПЦР реагирует непосредственно на патогены и такой погрешности не имеет.
- ПЦР – высокочувствительный метод. Анализ реагирует на присутствие РНК вируса гепатита уже 10-100 клеток в пробе и дает результат еще задолго до появления первых симптомов.
- В отличие от культуральных методов исследования, ПЦР проводится методом высокотехнологичной автоматизированной амплификации, что позволяет проводить тестирование в день забора.
Тест универсален и позволяет обнаружить несколько типов возбудителей гепатита в одной биологической пробе.
ПЦР-диагностика гепатита имеет и свои недостатки. Главный из них связан со способностью микроорганизмов к мутации. Вирусы гепатита приспосабливаются к условиям окружающей среды, и их генотип меняется. Когда это происходит, диагностическая система не может уловить гибрид. Второй недостаток ПЦР связан с возможностью получения ложноположительного и ложноотрицательного результата. Чтобы избежать ошибки, нужно соблюдать правила забора материала. Чаще всего погрешности возможны после уже проведенного лечения, поэтому принимать решение об отмене терапии может только лечащий врач.
Источник
