Антитела к гепатиту с к структурным белкам вируса гепатита с

Антитела к NS и core гепатита С – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются к структурным и неструктурным белкам вируса. Антигены вируса и антитела к нему обнаруживаются в рамках серологического исследования, которое называется иммуноферментным анализом (ИФА). Его выполняют при подозрении на гепатит С, во время противовирусной терапии и после нее. Снижение уровня антител (anti-HCV) отдельных классов указывает на полное уничтожение возбудителя инфекции.

Структурные и неструктурные белки гепатовируса

HCV – вирус рода Hepacivirus из семейства Flaviviridae, провоцирующий инфекционное воспаление печени. Когда антиген (чужеродное вещество) проникает в организм, возникает иммунный ответ, который характеризуется выработкой антител. При заражении гепатитом С специфические иммуноглобулины синтезируются к разным частям вируса:

• Ядро – содержит структурный белок core. При инфицировании он встраивается в геном клеток печени. В результате они превращаются в фабрику по производству дочерних вирионов. В 1 зараженной клетке ежедневно синтезируется от 30 до 50 вирусов.
• Оболочка – нуклеотидные протеины типа Е1 и Е2. Участвуют во взаимодействии возбудителя с иммунными клетками крови. Они помогают вирусу гепатита С (ВГС) защищаться от Т-лимфоцитов, гранулоцитов, фагоцитов и других клеток, борющихся с антигенами.
• Фрагменты генома – неструктурные белки типа NS2, NS3, NS4, NS5. Выполняют регуляторные функции, участвуют в репликации, то есть образовании копий вируса.

Структурные и неструктурные белки ВГС – антигены, к которым иммунная система вырабатывает антитела. Поэтому анализ на anti-HCV назначается всем людям с подозрением на гепатит С.

В рамках иммуноферментного анализа определяют только три неструктурных белка – NS3, NS4 и NS5. В действительности их больше и каждый выполняет определенные функции. Одни участвуют в расщеплении ферментов и белков, а другие – в сборке скопированного генетического материала. Учеными обнаружено 11 неструктурных белков, но функции некоторых из них до сих пор неизвестны.

Как проводят анализ на антигены и антитела к вирусу гепатита

Анализ на антитела к ВГС (anti HCV) – молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление иммуноглобулинов к гепатиту С. В его основе лежит реакция антиген-антитело, при которой формируются устойчивые комплексы из белков возбудителя и плазмы крови.

Чтобы обнаружить anti-HCV, во время анализа используют специальные ферменты. Они выполняют функцию меток, позволяющих регистрировать соответствующие сигналы. Главное преимущество серологического анализа – высокая специфичность. Полученные результаты дают информацию о:

1. типе возбудителя;
2. стадии заболевания;
3. форме гепатита (острый или хронический).

Для анализа берут венозную кровь из локтевой вены. Подготовка к исследованию не занимает много времени. Пациентам рекомендуют выполнять процедуру натощак в утренние часы, не курить за полчаса до сдачи крови.

Для чего назначается анализ на anti-HCV:

• первичная диагностика HCV-инфекции;

• дифференциальная диагностика гепатитов;

• выявление ранее перенесенного заболевания.

В случае раннего заражения (период до 4 недель) возрастает риск ложноотрицательного результата анализа. Поэтому даже при отсутствии в крови иммуноглобулинов дополнительно выполняется ПЦР на гепатит С. Если РНК возбудителя обнаруживается, диагноз подтверждают.

Анализ на anti-HCV выполняется при:

1. обследовании лиц из группы риска (хирургов, прооперированных пациентов, реципиентов крови);
2. признаках инфекционного поражения печени;
3. повышенном содержании печеночных ферментов;
4. планировании беременности;
5. мониторинге эффективности антивирусной терапии.

Сразу после забора крови лаборант подписывает образец и отправляет его в лабораторию для анализа. На исследование уходит не более 2-3 рабочих дней.

Расшифровка результатов

Если в крови обнаруживают иммуноглобулины к ВГС, это еще не свидетельствует о заражении. По статистике, до 30% пациентов излечиваются самостоятельно. Все они даже не догадываются, что переболели опасным заболеванием, исходом которого нередко становится фиброз, цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

Виды антител, которые выявляются при иммуноферментном анализе:

• Anti-HCV core IgM – иммуноглобулины, которые синтезируются к ядру возбудителя. Они начинают циркулировать в крови раньше других антител. При хронической форме гепатита их концентрация сильно уменьшается.
• Anti-HCV NS – антитела, синтезированные к неструктурным белкам ВГС. Если при анализе выявляются anti-NS3, это свидетельствует об острой форме гепатита. Белковые комплексы anti-NS4 и anti-NS5 обнаруживаются преимущественно при переходе гепатита в вялотекущую форму.
• Anti-HCV total – суммарные антитела, которые возникают к возбудителю. Если они выявляются во время анализа, это значит, что человек либо заражен гепатитом, либо перенес инфекцию.

Во время диагностики вирусной болезни учитываются результаты качественной ПЦР. При выявлении HCV RNA, то есть РНК возбудителя, диагноз подтверждается.

Пример иммуноферментного анализа с расшифровкой данных

Во время иммуноферментного анализа обязательно определяют позитивность пробы на структурный белок ВГС – КП (core-Ag). Коэффициент позитивности применяется для оценки уровня иммуноглобулинов в крови. В мировой практике он измеряется в МЕ/мл. Результаты анализа считаются положительными, если этот коэффициент превышает 1. Иными словами, чем выше КП, тем больше содержание иммуноглобулинов в образце.

Если данные иммуноферментного анализа указывают на инфицирование, выполняют ПЦ.

После подтверждения диагноза проводят дополнительные инструментально-лабораторные исследования, посредством которых определяются:

1. структурные изменения – фиброз, цирроз печени, печеночно-клеточный рак;
2. вирусная нагрузка – концентрация РНК возбудителя в 1 мл крови;
3. активность воспаления – стадия гепатита С;
4. генотип ВГС – тип и подтип возбудителя.

С учетом результатов анализов составляют схему противовирусной терапии. При курсовом приеме ингибиторов неструктурных белков ВГС – Софосбувира, Нарлапревира, Ледипасвира Омбитасвира, Даклатасвира – выздоровления достигают 96-100% пациентов. Поэтому если вы подозреваете гепатит, запишитесь на прием к врачу.

В ответ на внедрение чужеродного агента иммунная система человека вырабатывает иммуноглобулины (Ig). Эти специфические вещества предназначены для связывания с чужеродным агентом и его обезвреживания. Определение противовирусных антител имеет большое значение для диагностики при хроническом вирусном гепатите С (ХВГС).

Содержание
Как выявить антитела?
Суммарные антитела к гепатиту С
Расшифровка анализа на антитела к гепатиту С
ПЦР: обнаружение антигенов гепатита С
Носитель антител к вирусу гепатита С
После лечения гепатита С антитела остаются

Как выявить антитела?

Антитела к вирусу в крови человека выявляет метод ИФА (иммуноферментный анализ). Эта методика основана на реакции между антигеном (вирусом) и иммуноглобулинами (antiHVC). Суть метода состоит в том, что в специальные планшеты вносят чистые вирусные антигены, антитела к которому ищут в крови. Затем в каждую лунку добавляют кровь больного. Если в ней есть антитела к вирусу гепатита С определенного генотипа, в лунках происходит образование иммунных комплексов «антиген-антитело».

Спустя некоторое количество времени в лунки добавляют специальное красящее вещество, которое вступает в цветную ферментную реакцию с иммунным комплексом. По плотности окраски проводят количественное определение титра антител. Метод имеет высокую чувствительность – до 90%.

К преимуществам метода ИФА можно отнести:

• высокую чувствительность;
• простоту и быстроту проведения анализа;
• возможность проведения исследования при малом количестве биологического материала;
• невысокую себестоимость;
• возможность ранней диагностики;
• пригодность для скрининга большого количества людей;
• возможность отслеживать показатели в динамике.

Единственным недостатком ИФА является то, что он определяет не сам возбудитель, а лишь реакцию иммунной системы на него. Поэтому при всех преимуществах метода для постановки диагноза ХВГС его недостаточно: требуется проведение дополнительных анализов, выявляющих генетический материал возбудителя.

Суммарные антитела к гепатиту С

Современная диагностика с помощью метода ИФА позволяет обнаружить в крови пациента как отдельные фракции антител (IgM и IgG), так и их общее количество — antiHVC total. Эти иммуноглобулины с диагностической точки зрения являются маркерами ХВГС. Что означает их обнаружение? Иммуноглобулины класса М определяются при остром процессе. Они могут выявляться уже спустя 4-6 недель после заражения. G-иммуноглобулины являются признаком хронизации процесса. Их можно обнаружить в крови спустя 11-12 недель после инфицирования, а после лечения они могут сохраняться до 8 и более лет. При этом их титр постепенно снижается.

Бывают случаи, когда у здорового человека при проведении ИФА на antiHVC total обнаруживают противовирусные антитела. Это может быть как признаком хронической патологии, так и следствием самопроизвольного излечения пациента. Такие сомнения не позволяют врачу установить диагноз ХВГС, руководствуясь только ИФА.

Различают антитела к структурным (ядерным, core) и неструктурным (nonstructural, NS) белкам вируса. Целью их количественного определения является установление:

• активности вируса;
• вирусной нагрузки;
• вероятности хронизации процесса;
• степени повреждения печени.

AntiHVC core IgG – это антитела, которые появляются при хронизации процесса, поэтому для определения острой фазы ХВГС не используются. Своей максимальной концентрации эти иммуноглобулины достигают к пятому-шестому месяцу болезни, а у длительно болеющих и не получающих лечения пациентов они определяются в течение всей жизни.

AntiHVC IgМ являются антителами острого периода и говорят об уровне виремии. Их концентрация нарастает в течение первых 4-6 недель болезни, а после перехода процесса в хронический – уменьшается вплоть до исчезновения. Повторно в крови больного иммуноглобулины класса М могут появляться при обострении заболевания.

Антитела к неструктурным белкам (AntiHVC NS) выявляются в разные сроки болезни. Диагностически значимыми из них являются NS3, NS4 и NS5. AntiHVC NS3 – самые ранние антитела к вирусу ХВГС. Они являются маркерами острого периода болезни. По титру (количеству) этих антител определяют вирусную нагрузку на организм пациента.

AntiHVC NS4 и NS5 – антитела хронической фазы. Считается, что их появление связано с поражением ткани печени. Высокий титр AntiHVC NS5 указывает на наличие в крови вирусной РНК, а его постепенное снижение – на начало фазы ремиссии. Эти антитела длительное время после выздоровления присутствуют в организме.

Расшифровка анализа на антитела к гепатиту С

В зависимости от клинической симптоматики и результатов анализа на РНК вируса гепатита С данные, полученные после ИФА, могут трактоваться по-разному:

• положительные результаты на AntiHVC IgМ, AntiHVC IgG и вирусную РНК говорят об остром процессе или об обострении хронического;
• если в крови обнаружены только антитела класса G без генов вируса, это указывает на перенесенное, но излеченное заболевание. При этом РНК вируса в крови нет;
• отсутствие в крови и AntiHVC и РНК вируса считается нормой, или отрицательным анализом на антитела.

Если выявлены специфические антитела, а самого вируса в крови нет, это не означает, что человек болен, но и не отрицает этого. Такой анализ считается сомнительным и требует повторного исследования через 2-3 недели. Таким образом, если в крови найдены иммуноглобулины к вирусу ХВГС, необходима комплексная диагностика: клинические, инструментальные, серологические и биохимические исследования.

Для постановки диагноза важен не только положительный ИФА, что означает наличие вируса в крови в настоящее время или ранее, но и обнаружение вирусного генетического материала.

ПЦР: обнаружение антигенов гепатита С

Вирусный антиген, а точнее его РНК, определяют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод, наряду с ИФА, является одним из ключевых лабораторных анализов, позволяющих врачу поставить диагноз ХВГС. Назначается он тогда, когда получен положительный результат анализа на антитела.

Анализ на антитела является более дешевым, чем ПЦР, поэтому именно он используется для скрининга некоторых категорий населения (беременных, доноров, медиков, детей из группы риска). Вместе с исследованием на гепатит С чаще всего проводят и определение австралийского антигена (гепатит В).

Носитель антител к вирусу гепатита С

Если методом ИФА в крови пациента обнаружены AntiHVC к вирусу, но никаких клинических признаков гепатита С при этом нет, это может быть трактовано, как носительство возбудителя. Вирусоноситель может сам не болеть, но при этом активно заражать контактирующих с ним людей, например, через кровь носителя. В таком случае нужна дифференциальная диагностика: расширенный анализ антител и проведение ПЦР. Если анализ ПЦР окажется отрицательным, человек, возможно, перенес заболевание латентно, то есть бессимптомно, и самостоятельно излечился. При положительном ПЦР вероятность носительства очень высока. Как быть, если антитела к гепатиту С есть, а ПЦР отрицательный?

Важно правильно трактовать анализы не только для постановки диагноза ХВГС, но и для контроля эффективности его лечения:

• если на фоне проводимого лечения антитела к гепатиту С не пропадают, это указывает на его неэффективность;
• если после противовирусной терапии вновь выявлены AntiHVC IgМ, это означает, что процесс снова активировался.

В любом случае, если по результатам анализов РНК вирус не обнаружен, но антитела к нему обнаружены, следует провести повторное обследование, чтобы убедиться в точности результата.

После лечения гепатита С антитела остаются

Остаются ли антитела в крови после курса лечения и почему? После эффективной противовирусной терапии в норме могут выявляться только IgG. Время их циркуляции в организме переболевшего человека может составлять несколько лет. Главным признаком излеченного ХВГС является постепенное уменьшение титра IgG при отсутствии вирусной РНК и IgМ. Если пациент вылечил гепатит С уже давно, а суммарные антитела у него остались, нужно провести идентификацию антител: остаточные титры IgG – это норма, а вот IgМ – это неблагоприятный признак.

Не стоит также забывать, что бывают ложные результаты анализов на антитела: как положительные, так и отрицательные. Так, например, если в крови есть РНК вируса (качественной или количественной ПЦР), а антител к нему нет, это можно трактовать как ложноотрицательный или сомнительный анализ.

Причин появления ложных результатов несколько:

• аутоиммунные заболевания;
• доброкачественные и злокачественные опухоли в организме;
• тяжелые инфекционные процессы; после прививки (от гепатитов А и В, гриппа, столбняка);
• лечение интерфероном-альфа или иммунодепрессантами;
• значительное повышение печеночных показателей (АСТ, АЛТ);
• беременность;
• неправильная подготовка к сдаче анализа (прием алкоголя, употребление жирной пищи накануне).

При беременности процент ложных анализов достигает 10-15%, что связано со значительным изменением реактивности организма женщины и физиологическим угнетением ее иммунной системы. Нельзя игнорировать также человеческий фактор и нарушение условий проведения анализа. Анализы проводятся «инвитро», то есть вне живых организмов, поэтому лабораторные ошибки имеют место быть. К индивидуальным особенностям организма, которые могут влиять на результаты исследования, относятся гипер- или гипореактивность организма.

Анализ на антитела, несмотря на все свои преимущества, не является 100%-ным поводом для постановки диагноза. Риск ошибок есть всегда, поэтому, чтобы избежать возможных ошибок, нужно комплексное обследование пациента.