Антитела к гепатиту с планшета

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

острых и хронических заболеваниях печени;

желтухе неясного генеза;

обследовании перед хирургическими вмешательствами;

стандартном обследовании доноров крови;

постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

прохождении гемодиализа;

профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

незащищенном сомнительном половом контакте;

рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
a) конкурентный;
b) неконкурентный;

По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
a) гомогенные;
b) гетерогенные;

3) По принципу определения исследуемого вещества:
a) прямой;
b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

выполненной накануне вакцинации;

при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

опухолевом процессе;

инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.

Источник

Гепатит С (ВГС, HCV) – серьезная болезнь вирусной природы, характеризующаяся поражением печеночных клеток, тканей. Поставить диагноз на основании клинической картины невозможно, поскольку клиника проявляется редко. Чтобы обнаружить и идентифицировать вирус пациенту нужно сдать анализ крови.

В условиях лаборатории осуществляются высокоспецифичные исследования, благодаря которым определяют антитела к гепатиту С. Они продуцируются иммунной системой, выступают ответной реакцией на внедрение в организм патогена.

Если были обнаружены антитела к гепатиту С, это значит, что иммунитет самостоятельно пытался бороться с возбудителем. С помощью исследования можно определить наличие/отсутствие патологии, предположить стадию патологического процесса.

При обнаружении антител паниковать не стоит, поскольку могут быть получены ложноположительные результаты. Для уточнения диагноза врачи всегда рекомендуют дополнительные методы. Рассмотрим подробно, какими анализами определяют антитела, их преимущества и недостатки с точки зрения достоверности, а также расшифруем уже полученные результаты.

Что такое антитела?

Под антителами подразумевают белковые микроэлементы, которые входят в класс глобулинов, синтезируемых иммунной системой. У каждой молекулы иммуноглобулинов существует своя последовательность аминокислот.

Благодаря этому антитела способны взаимодействовать только с теми антигенами, которые спровоцировали их формирование. Другие молекулы агенты иммунной системы не уничтожают.

Функциональность антител состоит в распознавании антигенов, после они с ними связываются, уничтожают. На синтез влияет инкубационный период.

Разновидности антител

Когда обнаружены антитела к гепатиту С, что это означает? Данный факт свидетельствует о борьбе иммунитета с патогенным агентом. Выявлять его наличие/отсутствие можно с помощью высокоспецифичных исследований.

Обнаруживать в крови больного могут такие антитела:

Их можно диагностировать в биологической жидкости взрослых и детей спустя 1 месяц после заражения. Сохраняются они в течение длительного времени – 6 месяцев. Если их нашли, то это говорит об остром течении патологии либо ухудшении иммунного статуса в совокупности с вялотекущей формой гепатита. Когда IgM достигает максимального значения, концентрация идет на спад.
Их можно обнаружить в крови через 3 месяца после инфицирования. Эти маркеры вторичны, требуются для уничтожения белковых компонентов патогенного вируса. Формирование IgG говорит о трансформации недуга в хроническую форму. Антитела сохраняются на определенном уровне в течение всего периода заболевания, и даже некоторое время после выздоровления.
Обнаружение суммарных антител к вирусу гепатита С (IgG + IgM) – совокупности глобулинов, которые представлены двумя классами, говорит о предполагаемом заражении. Такая совокупность выявляется спустя 2,5 месяца после проникновения вируса. Анализ считается универсальным.

Перечисленные антитела предстают структурированными. Кроме них также проводится исследование на выявление глобулинов, но не к вирусу, а белковым элементам. И эти антитела неструктурированные:

Anti-NS3. Диагностируют на ранней стадии, они говорят о высокой вирусной нагрузке.
Anti-NS4. Обнаруживают при затяжном воспалительном процессе, хроническом поражении печени.
Anti-NS5 говорят о том, что в крови имеется РНК возбудителя, то есть идет стадия обострения либо болезнь переходит из острой в хроническую форму.

Значения антител позволяют правильно поставить диагноз. С помощью исследований можно выявить возбудителя до появления симптоматики, осложнений.

Различия между антителами и антигенами

Антигенами называют чужеродные частички, которые провоцируют иммунный ответ. Это бактерии, вирусы и другие патогены. Антитела же являются белковыми соединениями, которые вырабатываются иммунитетом. Синтез оных происходит при внедрении чужеродной бактерии или вируса.

В лабораторных условиях можно определить антиген вируса В. Выявить же антиген ВГС не представляется возможным. Сам патоген обнаружен не был, а только мельчайшие фрагменты РНК, причем в минимальной концентрации. Поэтому ВГС так сложно диагностировать.

Основное отличие антигенов от антител состоит в том, что последние вырабатываются иммунной системой в ответ на появление первых. И на это не влияет способ заражения.

Вирус может передаваться парентеральным (через кровь), через половой контакт и вертикальным путем (от мамы ребенку).

Механизм формирования антител в крови

В здоровом организме антитела к вирусу гепатита С отсутствуют. Процесс запускается только в ответ на проникновение вируса. Образуются антитела в плазмоцитах, являются производными В-лимфоцитов.

Антитела начинают появляться в несколько этапов. Сначала в организм внедряется возбудитель, макрофаги определяют антигены. Макрофаги – это «полицейские», которые ищут чужеродное, уничтожают его. Макрофаги захватывают антигенов, изолируют, а после выводят из человеческого организма. Далее антигенная информация передается лимфоцитам. Они получают сведения от макрофагов.

После происходит синтез различных тел плазмоцитами. Они синтезируют молекулы, проводят подготовку для борьбы именно с ними. Универсальных антител для борьбы с различными патологиями не бывает. Антитела – это целенаправленное воздействие на чужеродные «объекты».

Антитела – это не всегда подтверждение заболевания, поскольку хорошая работа иммунитета может подавить активность вируса. Тогда маркеры показывают, что вирус в организме был, но последний справился с ним самостоятельно.

Пациент может быть носителем антител на фоне отсутствия клинических проявлений. Такое происходит в период ремиссии либо после выздоровления.

Значение антител при диагностике гепатита С

Исследуют венозную кровь пациента для определения маркеров. Полученную биологическую жидкость очищают от форменных соединений, чтобы облегчить диагностический процесс, исключить отрицательный результат, являющийся ложным.

Если с помощью метода ИФА был получен положительный результат. То проводится дополнительное исследование. Только один анализ не может подтверждать наличие возбудителя, требуется несколько исследований. После положительного ИФА проводят ПЦР.

Главная проблема в том, что тест ИФА не может найти возбудителя, он определяет только реакцию иммунной системы. А это значит, что положительного результата мало для назначения лечения. Сдать анализ можно в поликлинике по назначению своего доктора или в платной лаборатории, например, Гемотест.

С помощью методики ПЦР выявляют РНК возбудителя. Сомнительный результат возможен только при нарушении исследования. Так, если метод ПЦР выдает положительный результат, то требуется лечить больного.

ПЦР бывает:

Качественный метод – определяют наличие материала возбудителя, устанавливают его концентрацию либо выявляют вирусную нагрузку. Можно определить инфицирование до формирования антител, когда срок инкубационного периода только начался.
Количественный способ применяется уже во время терапевтического курса, цель – оценка проводимой терапии и эффективности используемых медикаментозных препаратов.

Взаимосвязи между концентрацией вируса в крови и тяжестью патологии нет. Количество копий влияет только на вероятность передачи ВГС, эффективность лечения.

Сроки обнаружения

Опасный недуг – гепатит С чреват тем, что долгое время протекает без симптомов, и в 80% случаев переходит в хроническое течение, которое чревато функциональными нарушениями печени, диффузными изменениями, циррозом, комой.

Аутоиммунные антитела разных видов появляются не одновременно. Благодаря этому можно предположить время заражения, стадию и риски. Все эти сведения нужны для составления схемы терапии. IgM (через месяц после заражения), IgG (через 3 месяца), IgG + IgM (2,53 месяца)

График и правила сдачи анализа

Анализ рекомендуется сдавать при наличии подозрений на гепатит, а также всем людям, которые попадают в группу риска. Это медицинские работники, беременные женщины, лица с наркотической зависимостью, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Чтобы выявить антитела в организме, применяется метод ИФА. Для его проведения исследуется кровь пациента, взятая утром на голодный желудок. За 48 часов до исследования нужно скорректировать питание – отказаться от жирной, жареной, пряной, консервированной, копченой еды. Нельзя употреблять алкогольные напитки, курить.

За 24 часа до исследования надо выбирать только легкую пищу. Последний прием пищи должен быть за восемь часов до забора биологической жидкости. Для получения точных результатов рекомендуется исключить стрессы, чрезмерные психические и физические нагрузки. За 24 прекращают принимать лекарства. Если это невозможно, сказать врачу.

Расшифровка результатов

В норме суммарное значение в крови не регистрируется. Для количественной оценки используется показатель позитивности R. Он обозначает плотность исследуемого антитела в крови больного.

Его референтные показатели до 0,8. Колебание от 0,8 до 1 свидетельствует о сомнительном результате диагностики, требуется дальнейшее обследование. Положительный результат, когда R более единицы.

Таблица расшифровки:

Анти-HCV total (суммарные антитела)	РНК	Расшифровка
Отсутствуют	Отрицательный	Пациент здоров, при необходимости анализ можно повторить через 30 дней
Присутствуют	Нет	Присутствуют антитела к гепатиту С, а вируса нет, что указывает на перенесенное заболевание либо эффективное лечение.
+	+	Острая стадия патологии

Если результаты указывают на перенесенную патологию, это значит, что в некоторых ситуациях вирус может сам исчезать под натиском иммунной системы. Однако вторичное инфицирование не исключено, иммунитет не вырабатывается.

При развернутом исследовании результаты могут быть такие:

Анти-HCVIgM	Анти-HCVcoreIgG	Анти-HCVNSIgG	РНК	Что значит
+	+	—	+	Острая форма
+	+	+	+	Обострение хронической формы
—	+	+	—	Период ремиссии
—	+	+/-	—	Выздоровление либо хроническая форма

Верно расшифровать результаты исследования может только медицинский специалист. При постановке диагноза также учитывают клиническую картину, данные инструментальной диагностики, результаты исследований с помощью ИФА и ПЦР.

Если были выявлены ложноположительные, ложноотрицательные результаты, требуется провести повторное обследование. Последний анализ проводят в конце терапии, что подтвердить факт выздоровления.

Источник