Бактериологический метод диагностики острых кишечных инфекций

Бактериологическая диагностика.

1. Забор материала. Характер материала
зависит от первичной или вторичной
локализации микроба-возбудителя. Если
материалом служат испражнения, что чаще
всего бывает, то их берут до начала или
после суточного перерыва в антибактериальной
терапии. Материал лучше забирать
ректальной трубкой, тампоном со стерильной
пеленки или стерильной пергаментной
бумаги, специальным устройством для
забора фекалий (ни в коем случае не
допуская его контакта с дезинфектантами).
Если материалом служит кровь, то забирают
10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.

2. Транспортировка материала
осуществляется медицинским работником
в системе «стекло, металл» в течение
не более трех часов после его забора
или в консерванте с сопровождающими
документами.

3. Питательные среды

4. Идентификация выделенных культур
основана на определении:

• общего для семейства признака — грам-
  палочки;

• наличия капсулы (у клебсиелл);

• цвета колоний на чашечных средах;

• подвижности (сальмонеллы и эшерихии
  подвижны, шигеллы и клебсиеллы

• неподвижны);

• биохимических свойств;

• антигенной структуры;

• чувствительности к антибактериальным
  препаратам;

• чувствительности к бактериофагам.

Антигенную структуру
определяют по предварительному
установлению серогруппы, чаще с
монорецепторными адсорбированными
сыворотками, а затем серовара тоже с
адсорбированными сыворотками.

Общие принципы серологической диагностики оки.

Серологическая диагностика:
начинается с получения сывороток от
больных. В них обнаруживаются антитела
в реакции агглютинации, гемагглютинации,
латекс-агглютинации или РСК. Диагноз
основан на обнаружении антител в
диагностическом титре или нарастании
титра антител в динамике болезни.

Кишечная палочка, общая характеристика. Биологическая роль кишечной палочки. Заболевания, вызываемые эшерихиями.

1. Классификация:
домен — Bacteria,
тип — Proteobacteria,
класс — Gammaproteobacterias,
порядок Enterobacteriales,
семейство Enterobacteriaceae,
род — Escherichia,
вид — E.coli

2. Морфология:
Гр-, палочка, иногда капсула или
микрокапсула, иногда есть перитрихии,
подвижна или неподвижна, спор нет.

3. Тип
питания: хемоорганотроф.

4. Биологические
свойства:

а) хорошо растут на простых питательных
средах

б) ферментируют глюкозу и
лактозу до кислоты и газа

5. АГ
структура: О-антиген,
К-антиген и Н-антиген.

6. Факторы
патогенности и патогенез:

а) адгезины (капсула – также угнетает
фагоцитоз, пили)

б) третья секреторная система

в) ферменты инвазии

г) эндотоксин (ЛПС)

д) энтеротоксин — активирует
аденилатциклазу, приводит к водянистой
диарее.

е) экзотоксины (шигоподобный, холероподобный)

ж)нуклеопротеиды – вызывают
повышенную чувствительность к МБ.

Адгезия на энтероцитах 
активный захват энтероцитами и их
колонизация, фагоцитоз пейеровыми
бляшками и разрушение лимфоцитов 
изменению функции энтероцитов, продукция
гемолизинов, энтеротоксинов 
увеличение кол-ва цАМФ (водянистая
диарея), иногда развитие колитов.

7. Клинические
проявления:

а) эндогенные инфекции –
гнойно-воспалительные процессов
различных локализации (пиелиты, циститы,
холециститы).

б) ОКИ: ЭПКП – сальмонеллоподобные
инфекции, ЭТКП – холероподобные инфекции,
ЭИКП – дизентериеподобные инфекции,
ЭГКП – геморрагический колит.

8. Иммунитет:
ГИО (АТ не обладает протективным
действием).

9. Эпидемиология.
Источник – больные люди или бактерионосители.
ОПЗ – алиментарный. Используется как
санитарный показатель для оценки
загрязнений (коли-титр, коли-индекс).
Устойчивы во внешней среде, месяцами
сохраняются в почве, воде, испражнениях.

10. Профилактика:
специфической нет. Неспецифическая:
выявление больных и носителей, их
изоляция, лечение.

11. Лечение:
бифидобактерин, лактобактерин – для
детей раннего возраста, АБ (хлорамфеникол,
цефалоспорины, фторхинолон).

12. Диагностика:
Цель:
выделение чистой культуры и отличие ее
от УПН. Материал для
исследования: фекальные
массы.

Бактериологический метод:

1-й этап — посев на среду Эндо (Левина);

2-й этап:

а) обнаружение окрашенных колоний,
микроскопия их по Граму;

б) РА на стекле со смесью
сывороток к патогенным серогруппам
(предварительная дифференциация
патогенных эшерихии от условнопатогенных)

в) отсев положительно
реагирующей в РА колонии на среду
Олькеницкого;

3-й этап:

а) учет изменения среды Олькеницкого
(посинение и разрыв всей среды);

б) определение чистоты выделенной
культуры;

в) определение серовара
патогенной эшерихии (путем постановки
РА с отдельными ОК-сыворотками на стекле
и в пробирках с живой (определение
К-антигена) и убитой кипячением
(определение О-антигена) культурой;

г) проба на индол, подвижность и
чувствительность к антибиотикам.

Серологический метод— постановка
РА с сывороткой больного (на 2-ой неделе
заболевания).

Вопросы
для самоподготовки:

1.
Энтеропатогенные ки­шечные
палочки. Диагностика колиэнтеритов.

2.
Сальмонеллы — возбудители брюшного
тифа и паратифов, их свойства Патогенез
брюшного
тифа. Микробиологическая диагностика
брюшного тифа и пара­тифов.
Лечение и профилактика.

3.
Сальмонеллы — возбудители гастроэнтероколитов.
Микробиологиче­ская
диагностика гастроэнтероколитов.

4.
Шигеллы. Свойства и классификация
возбудителей дизентерии. Микро­биологическая
диагностика дизентерии.

5.

Холерный вибрион и его свойства. Патогенез
и клиника холеры. Этапы микробиологичекой
диагностики холеры.

6.
Характеристика возбудителей ботулизма.
Микробиологическая диагности­ка
ботулизма.

Теоретический материал для самоподготовки

Вопрос 1. Эшерихии (род Escherichia)

Типовой
вид — E.coli, имеет наибольшее значение в
медицине. Заболевания, вызываемые
E.coli, называются эшерихиозами.

Морфологические
признаки: E.coli
— мелкие палочки с закругленными концами,
грамотрицательные, спор не образуют,
перитрихи. Некоторые штаммы имеют
микрокапсулу.

Чистая
культура E.coli.
Колонии кишечной палочки
на среде Эндо.

Окраска
по Граму.

Культуральные
признаки: E.coli
– факультутативный анаэроб, хорошо
растет на простых питательных средах,
давая на жидких – помутнение, на плотных
– выпуклые колонии серого цвета S-
или R-типа.
Элективной средой является среда Эндо,
на которой E.coli
образует красные
колонии с металлическим блеском.

Антигенная
структура: E.coli
имеет:

—
соматический О-антиген (имеет более 170
вариантов), который определяет серогруппу,

—
поверхностный К-антиген, который по
чувствительности к температуре
подразделяется на А, В и L-
фракции (чаще преобладает В-фракция),
К-антиген имеет более 100 вариантов,

—
Н-антиген имеет более 50 вариантов,
определяет серовар.

Штаммы
E.coli, отличающиеся по антигенам (антигенной
формуле), называются сероварами
(серотипами). Например, штамм О55:К5:H21
относится к серогруппе О55.

Биохимические
признаки. Наиболее
важным признаком E.coli является ее
способность ферментировать лактозу.
Дифференциально-диагностические
признаки E.coli:

—
ферментация глюкозы с образованием
кислоты и газа,

—продукция
индола и неспособность образовывать
сероводород.

По
антигенным и токсигенным свойствам
возбудителей разделяют на условно-патогенные
и патогенные кишечные палочки:

—
условно-патогенные
кишечные палочки
— комменсалы (представители нормальной
микрофлоры кишки), возбудители
оппортунистических инфекций (парентеральных
эшерихиозов) в виде сепсиса, перитонита,
цистита т.д.; —

—
патогенные,
или диареегенные кишечные палочки
— вызывают энтеральные эшерихиозы
(гастроэнтериты, колиты и др.).

Заболевания,
вызываемые диареегенными Escherichia coli:

1.
Энтеротоксигенные кишечные палочки
(ЭТКП)
– факторы
патогенности: пили, факторы колонизации
(CF),
термолабильный (LT
= аналог холерного токсина) и термостабильный
(ST)
токсины.
Поражается тонкая кишка . Заболевания
— диарея путешественников, холероподобная
диарея у детей и взрослых.

2.
Энтероинвазивные кишечные палочки
(ЭИКП)
–
факторы
патогенности
:
факторы инвазии — поверхностные белки,
кодируемые большой плазмидой, определяющие
ивазию ЭИКП в клетки эпителия толстой
кишки с последующим разрушением
эпителия. Вызывают дизентериеподобное
заболевание (стул с небольшой примесью
крови).

3.
Энтеропатогенные кишечные палочки
(ЭПКП),
разрушающие микроворсинки и повреждающие
апикальную часть эпителия тонкой кишки.
Факторы
патогенности — белок-адгезин
наружной мембраны,
кодируемый плазмидой, и белок
наружной мембраны интимин,
кодируемый хромосомным геном. Вызывают
диарею у детей 1 года жизни.

4.
Энтерогеморрагические кишечные палочки
(ЭГКП,
например, E. coli О157:Н7) с преобладанием
геморрагического фактора, вызывающего
гемолитический уремический синдром.
Поражается толстая кишка . Факторы
патогенности: пили, шигаподобные токсины
(SLT
I,SLT II; веротоксины), разрушающие эндотелий
мелких кровеносных сосудов; белок
наружной мембраны интимин,
кодируемый хромосомным геном. Вызывают
геморрагический колит(диарея с примесью
крови); гемолитико-уремический синдром.

5.
Энтероаггрегирующие кишечные палочки
(ЭАГКП)
с персистенцией, вызывают тяжелое
обезвоживание детей. Аггрегируют на
культуре клеток Нер-2. Поражается тонкая
кишка . Механизм поражения:
плазмидоопосредованное аггрегативное
прикрепление, предупреждающее абсорбцию
жидкости . Вызывают диарею у детей.

Микробиологическая
диагностика.

Основной
метод — бактериологический. Материал
засевают на среду Эндо. Выбирают не
менее 10 колоний красного цвета с
металлическим блеском и ставят реакцию
агглютинации на стекле с О-сыворотками.
Определяют вид чистой культуры
(грамотрицательные палочки,
оксидазоотрицательные, ферментирующие
глюкозу и лактозу до кислоты и газа,
образующие индол, не образующие H2
S) и принадлежность к серогруппе, что
позволяет отличить условно-патогенные
кишечные палочки от диареегенных.
Внутривидовая идентификация, имеющая
эпидемиологическое значение, заключается
в определении серовара с помощью
диагностических адсорбированных
иммунных сывороток.

Лечение.

Для
лечения применяют антибиотики
тетрациклинового ряда, цефалоспорины
последних поколений, фторхинолон,
хлорамфеникол, для предупреждения
развития грибков в ЖКТ параллельно
назначают антимикотики, например,
нистатин; при непереносимости антибиотиков
или детям до года назначают коли-протейный
бактериофаг. Для восстановления
нормальной микрофлоры ЖКТ после
применения антибиотиков или одновременно
с ними рекомендуется назначать эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.

Профилактика.

Специфической
профилактики нет. В экстренных случаях
всем контактировавшим с больным назначают
коли-протейный бактериофаг и эубиотики:
бифидумбактерин, лактобактерин,
колибактерин и др.