Бывают ли ошибки в анализах на гепатит

Специфические лабораторные методы применяются для диагностики гепатита С. К ним относятся иммунохимические, молекулярно-биологические анализы распознавания РНК-содержащего вируса (ВГС).

Интерпретация полученных данных зависит от:

Чувствительности применяемого метода. Это способ определения минимального компонента в величине разведения — антител, антигенов, нуклеиновых кислот. Выражается в количественных единицах — титрах.
Специфичности конкретного метода, способного выявить ВГС и антитела к нему

Цель работника лаборатории заключается в разграничении ложноположительных анализов на гепатит С и обнаружение вируса и антител к нему.

Вы знаете, кому нужно сдавать анализы на гепатит С?

ДаНет, расскажите

Анализы на гепатит С

Постановка диагноза HСV-инфекции происходит с помощью вирусологических (ПЦР) и серологических тестов (ИФА).Симптоматика острой фазы заболевания практически отсутствует, но уже в первые 7-14 дней после инфицирования диагностировать этот период гепатита С можно при обнаружении РНК методом ПЦР.

Применение ИФА в этой стадии не результативно, так как антитела вырабатываются через несколько недель. Изобретение тестовых систем 3 поколения способствует определению IgM в ранние сроки. Метод используют в лабораториях, но он не отвечает целям полной диагностики и оценки эффективности лечения.

ИФА

Метод иммуноферментного анализа разработан в трех вариантах: иммуноферментный, радиоиммунный, флюороиммунный. Востребован твердофазный ИФА. В постановке реакции он прост, высокочувствителен и относительно не дорог.

В зависимости от агента, который определяют – антиген или антитело, ИФА представляет разную ценность в диагностике. Верные результаты получаются при выявлении вирусных антигенов. Это также не является критерием постановки диагноза, так как часть антигенов расположена только в печеночной ткани и в крови обнаружить их не возможно. Поэтому нужно применять ИФА с определением сразу двух видов вирусных антигенов.

При обнаружении антител к ВГС нельзя говорить о присутствии вируса. Выявлены случаи когда анализ ИФА оказывается ложноположительным у обследуемого. Это указывает на иммунологическую память ранее присутствующего вируса в организме.

В проведенных исследованиях 957 проб с положительным ИФА потребовались другие арбитражные методы — ПЦР. В итоге у 36,6% РНК не обнаружилось, что свидетельствует о получении ложноположительного ответа.

Разработанные за последнее десятилетие новые тестовые системы способны одновременно определять антитела и антигены к вирусу гепатита С.

ПЦР

Этот метод детекции — полимеразная цепная реакция, создан для обнаружения вирусной РНК в образце сыворотки крови. Исследование заключается в многоцикловом процессе, который состоит из переходящих друг в друга этапов.

С помощью применения обратной транскриптазы (фермента) образуются молекулы ДНК вируса гепатита С. Итоговый результат — выделение вирусной рибонуклеиновой кислоты. Количественный вариант ПЦР используют для определения концентрации РНК. Исследуется количество копий в 1 мл. Выражается в логарифмических выражениях (log10).

Для прогнозирования эффективности лечения важным является выяснение принадлежности гепатита С к генотипу. В проведении генотипирования используют типоспецифические праймеры, в методах основанных на методике ПЦР.

Чувствительным методом определения нуклеиновых кислот считается «ПЦР в реальном времени». С помощью этого метода получают результат в ходе реакции даже при малом количестве нуклеиновых кислот. Полученные показатели с высокой точностью определяют уровень вирусной нагрузки.

Может ли анализ на гепатит С быть ошибочным?

На сегодня по-прежнему остается шанс получения ложноположительного результата на наличие анти-ВГС. При определенных обстоятельствах искаженные данные получаются при проведении ИФА и ПЦР.

Доля ошибочных ложноположительных результатов составляет 10-20%.

Для уточнения нахождения вируса в крови обследуемого человека применяют метод обнаружения РНК совместно с другими чувствительными методами. Однако получение отрицательного ответа не свидетельствует о ложноположительном ответе. В случаях полного выздоровления пациентов (10-15%) в крови возможно присутствие анти-ВГС.

Получение ложноположительного результата зависит от естественных причин:

появление мутантных штаммов;
репродукции антител и антигенов возбудителя.

Причины ложноположительного анализа

Ошибочный анализ регистрируется в виде ложнонегативных и ложнопозитивных результатов.

Ложноположительный ответ получается при:

смешении исследуемого образца с предыдущим через лабораторное оборудование или аэрозоли;
соединение между пробами при работе с реакционной смесью.

Ложноотрицательные ответы определения РНК получаются при:

нарушениях правил перевозки клинических образцов;
несоблюдении теплового режима образцов крови;
распад РНК при подготовке к пробе;
поэтапное прохождение ПЦР нарушает гепарин и высокий уровень криоглобулинов;
присутствие в сыворотке белковых, химических субстанций.

Распространенные причины ошибок анализов связаны с:

иммунодефицитными состояниями;
онкологией;
аутоиммунными заболеваниями (синдром Рейно, полинейропатия, узелковый периартериит и другие);
поражениями системы крови (тромбоцитопения, гемолитическая анемия);
глистными инвазиями;
сифилисом.

Человеческий фактор

Ошибка в анализе возможна с учетом действия работников, участвующих в процессе, с процедурного кабинета и до клинической лаборатории.

Человеческий фактор возможен при:

нарушении нумерации пробирок в момент забора крови;
указании ошибочного ответа;
неправильных действиях лаборанта в ходе подготовки образца;
проведении пробы в условиях повышенной комнатной температуры;
неопытности молодого специалиста;
изготовлении некачественных диагностических препаратов.

Моментом, который способен искажать данные исследований является алкоголь. Это своеобразный антидепрессант, который воздействует на диагностику гепатита С. У пьющих людей с хронической формой выявляться HCV РНК при отсутствии антител и наоборот.

Ложноположительный результат у беременных

Установленный гепатит С ложноположительный у беременной женщины может быть связан с физиологическими изменениями происходящими в организме в период вынашивания плода:

выработку характерных гестационному периоду белков;
полную перестройку гормональной системы;
повышение концентрации противовоспалительных цитокининов;
изменение биохимических показателей;
присоединение инфекций бактериального и вирусного генеза.

Инфекционные заболевания

Инфекционные заболевания протекают с выделением антител (защитные факторы крови) в ответ на антигены (болезнетворные возбудители). Работа иммунитета человека заключается в выработке иммуноглобулинов в ответ на проникновение чужеродных агентов.

Одновременное выделение иммуноглобулинов при инфекционном процессе в сочетании с гепатитом С искажает результаты анализов ИФА, что ведет к возрастанию количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Инфекции, которые приводят к ошибке:

токсоплазмоз;
цитомегаловирус;
передающиеся половым путем (уреаплазма, микоплазма, трихомоноз).

Лабораторная диагностика гепатита С при коинфекции с ВИЧ затруднена. Ложноотрицательный ИФА по выявлению анти-ВГС связан с формированием иммунодефицита у человека. Поэтому всегда проводится исследование РНК методом ПЦР.

Как избежать ложноположительного результата?

Ошибочный диагноз гепатита сводят к минимуму благодаря:

качественному обучению лабораторных работников и прохождению курсов повышения квалификации;
проведению этапов ПЦР в изолированных зонах;
применению автоматических пипеток для каждого этапа реакции;
проведение дополнительных анализов для уточнения.

Исключить ложноположительный результат возможно при проведении дополнительных (supplemental) тестов. Это препараты, созданные специально для определения антител к конкретным белкам, кодированных разными зонами вирусной РНК.

Внедрение новых методик лабораторного исследования вирусного гепатита С обеспечивает раннюю диагностику заболевания и сводит к минимуму появление ложных результатов. Это мера способствует своевременно начатому лечению, которое заканчивается выздоровлением.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )

Источник

В мире официально зарегистрировано более 350 миллионов людей с хронической инфекцией гепатита В и С. ВОЗ отнесла заболевание к категории опаснейших, поскольку оно трудно поддается лечению. Показатель смертности по причине гепатита в 2016 году достиг уровня гибели людей от туберкулеза и ВИЧ. Поэтому при обнаружении в результатах исследования значения «положительно», пациент воспринимает это как приговор. Важно знать при каких обстоятельствах может быть выявлен ложноположительный анализ на гепатит С и В.

Особенности вирусного гепатита

Вирус характеризует высокая степень устойчивости в окружающей среде: к химическому или физическому разрушающему воздействию. Вирусы гепатита В и С способны сохранять жизнеспособность в течение нескольких недель, находясь на различных предметах, а в крови – до полугода.

Наиболее частые пути заражения – через кровь, инфицирование половым путем и от матери к ребенку происходит в меньшем проценте случаев.

Гепатит С именуются «ласковым убийцей», поскольку вирус может длительное время нарушать работу клеток печени, при этом маскируясь под симптомы других патологий. Поэтому его выявление чаще происходит случайно при подготовке к операции, беременности или донорству. Более 40 лет человек может являться носителем вируса, не зная об этом.

Прогноз исхода во многом зависит от наличия или отсутствия сопутствующих болезней. Особую угрозу для жизни пациента представляет обстоятельство сочетанного инфицирования вирусом гепатита С и ВИЧ. Носительство вируса гепатита В менее опасно для жизни и реже заканчивается летальным исходом, при условии отсутствия сопутствующей инфекции.

Диагностические методы

Для диагностики гепатита применяют 2 метода исследования:

полимеразная цепная реакция (ПЦР) – выявление в биоматериале нуклеиновых кислот (ДНК или РНК) путем многократного копирования отдельных их специфических участков. Преимущество – специфичность и чувствительность методики достигает абсолютных значений. Риск получения ошибочных результатов сведен к минимуму;
иммуноферментный анализ (ИФА) – определение наличия специфических белковых иммуноглобулинов (антител) класса М и G.

Иммуноферментный анализ крови

После прохождения вирусом первых барьерных структур начинается ответная реакция иммунитета человека. Следует отметить, что достаточная концентрация для обнаружения иммуноглобулинов накапливается через 1–3 месяца после заражения. Известны случаи их отсутствия более чем 12 месяцев, у 5% инфицированных они не выявляются вообще.

Для острой стадии болезни характерны иммуноглобулины класса М и G к специфическому белку нуклеокапсида core. При хронизации инфекции выявляется преимущественно класс G к белкам core и NS. В случае необходимости проведения подтверждающего теста определяются оба класса иммуноглобулина к двум типам белка.

При необходимости определения конкретного генотипа вируса ставится полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени. В зависимости от генотипа подбирается лечение. Первый генотип наиболее трудно вылечить, для него характерны наиболее тяжелые последствия для здоровья человека. При этом 2 и 3 генотип излечиваются в 80% случаев за полгода.

Причины ложноположительного результата

Причиной ложноположительного результата является ошибки врачей

По статистике, результаты анализа ИФА в 15% случаев показывают ошибочно ложные данные, а среди беременных женщин процент ошибок достигает 20–30%.

Среди основных причин можно выделить недостаточную компетентность врача, который не проинформировал пациента о правилах подготовки к сдаче биоматериала и не учитывает возможность получения ложноположительных результатов. Увидев в строке результатов «положительно», врач выносит окончательный диагноз – гепатит и назначает лечение. Подобный подход в корне неверный, поскольку постановка диагноза по однократному анализу недопустима.

Не следует исключать и человеческий фактор в виде ошибки лаборантов. По неопытности или невнимательности сотрудник лаборатории может случайно перепутать пробирки, маркирующие штрих-коды или сами результаты анализов.

Данные статистики гласят, что 60% ошибок случается именно на преаналитическом этапе. Неправильное взятие или хранение взятых образцов крови – еще одна причина получения ложноположительного результата анализа.

Биоматериал в современных лабораториях собирается стерильной одноразовой иглой-бабочкой в вакуумную пробирку с консервантом. После чего кровь аккуратно перемешивается с консервантом, это необходимо для исключения ее гемолиза (разрушения красных кровяных клеток). После взятия кровь отстаивается 30–40 минут при комнатной температуре с целью формирования сгустка. Затем хранится или транспортируется (при необходимости) в температурном диапазоне от +2 до +8 С°. Нарушение стандартной методики недопустимо.

Следует отметить, что ложноположительный результат характерен для дам в положении. Ситуация объясняется масштабной перестройкой всего организма женщины после зачатия, одна из которых затрагивает синтез цитокинов. Кроме этого, изменяется концентрация макро- и микроэлементов, перестраивается эндокринная система и гормональный фон. Это делает невозможным однозначную интерпретацию результатов анализа, особенно методом ИФА.

Во время беременности анализ на гепатит может показать ложноположительный результат

Установлена прямая зависимость между сроком беременности и частотой получения ложноположительных результатов в анализе на гепатит В или С. Чем выше срок, тем более велика вероятность ошибочных данных.

Патологии, влияющие на результат анализа

Важно знать, что антитела к вирусу гепатита могут сохраняться в кровотоке человека от 8 до 10 лет, а у некоторых – до конца жизни. Их функциональная активность после успешной терапии инфекции до сих пор неизвестна. Они не способны защищать от повторного инфицирования человека ввиду того, что не проявляют противовирусной активности.

Данный факт обуславливает получение положительных результатов при использовании метода ИФА. Поэтому методика применяется для первичной диагностики и скринингового обследования, но ее проведение нецелесообразно для оценки эффективности лечения и выздоровления пациента.

Среди патологий, влияющих на результат анализа, следует выделить аутоиммунные заболевания, злокачественные новообразования и смешанную инфекцию.

Аутоиммунные заболевания

Аутоиммунные патологии сопровождаются выработкой защитных белковых антител против собственных нормальных клеток и тканей. В норме подобные механизмы запускаются исключительно при попадании чужеродного биоматериала (антигенов) или аномальной мутации своих клеток (рак).

Известна форма аутоиммунного гепатита, частота встречаемости которого не превышает 20 случаев на 100000 обследуемых людей. Заболевание поражает людей вне зависимости от пола и возраста. Природа возникновения остается предметом дискуссий, а подбор эффективных методов лечения составляет серьезнейшую проблему в современной гепатологии. Согласно данным статистики, более половины выявленных случаев характеризуются тяжелой стадией, когда цирроз печени уже сформирован. Крайне важно дифференцировать вирусную форму гепатита от аутоиммунной, делать это вправе врач высокой категории.

Злокачественные поражения органов могут привести к выработке неспецифических для патологии иммуноглобулинов, которые ошибочно будут идентифицированы как антитела к вирусу гепатита В или С.

Смешанная инфекция активирует все защитные системы и механизмы в организме человека. Не исключена возможность выявления иммуноглобулинов класса М и G, вырабатываемых в ответ на микроорганизм, не связанный с вирусом гепатита. Ситуация усугубляется при выраженном иммунодефиците у человека.

Как не допустить ошибочного результата

Для исключения риска получения ложных данных ВОЗ рекомендует минимум трехкратное проведение анализа, желательно в разных лабораториях. Современные частные лаборатории при получении сомнительных или положительных результатов назначают бесплатные подтверждающие тесты. При этом сначала лаборатория сама повторяет анализ, а после отправляет биоматериал для исследования в экспертном НИИ.

Пациенту следует ознакомиться с правилами подготовки к сдаче биоматериала и неукоснительно их соблюдать. В случае ежегодного профилактического обследования достаточно сдать анализ методом ИФА, для дифференциальной диагностики предпочтение следует отдавать ПЦР.

Нежелательно проходить исследования в сомнительных частных лабораториях. Каждое лабораторное отделение должно иметь соответствующие лицензии на взятие и проведение медицинских анализов.

При сдаче крови обязательно нужно предупредить сотрудника лаборатории о наличии хронических патологий и аллергических реакций. Желательно за 1 сутки до анализа исключить прием любых лекарственных препаратов после предварительной консультации с врачом. При невозможности отмены следует проинформировать о принимаемых лекарствах лаборанта или врача.

Физические и эмоциональные нагрузки могут повлиять на работу органов и состав крови, поэтому за 12 часов их следует избегать. Спортивную тренировку вечером накануне визита в лабораторию желательно отменить.

Таким образом, получение ложноположительных результатов анализа на гепатит В или С имеет ряд весомых и обоснованных причин. Соблюдая правила подготовки к сбору биоматериала и выбирая компетентных специалистов и лаборатории, пациент существенно повышает точность полученных данных. Недопустима постановка окончательного диагноза по результатам одного исследования, а расшифровку проводит исключительно лечащий врач. Получение положительных результатов диктует необходимость повторных подтверждающих тестов в различных лабораториях.

Источник