Что такое анти кор гепатита

Современная диагностика гепатита В. Выявление HBsAg

Серологическая диагностика гепатита В в настоящее время строится на основании определения маркеров НВ-вирусной инфекции, как правило, с помощью имуноферментного анализа, то есть антигенов вируса гепатита В или антител к ним в биологических субстратах, главным образом, в сыворотке крови. В качестве основных маркеров гепатита В, имеющих самостоятельное значение для серологической диагностики, сегодня признаны:

HBsAg (поверхностный антиген вируса гепатита В) — основной маркер, свидетельствующий о наличии вируса гепатита В. При остром гепатите В HBsAg можно обнаружить еще в продромальном периоде, и длительность его персистенции при неосложненном течении составляет до 10 недель;

HBeAg — показатель высокой степени активности инфекционного процесса. Маркер репликации HBeAg определяется, как правило, при наличии HBsAg, однако циркулирует в крови менее продолжительное время — в среднем 4 недели;

anti-HBc класса IgM — показатель острого инфекционного процесса или, при хронических формах гепатита В, косвенный показатель активной репликации HBV. Возможна их длительная циркуляция;

anti-HBc (суммарные) — так называемые «анамнестические» антитела, образующиеся в результате перенесенного гепатита В, также присутствуют при хроническом гепатите В в комплексе с другими маркерами. В ряде случаев отмечена пожизненная циркуляция;

anti-HBs — свидетельство перенесенной ранее инфекции или поствакцинального иммунитета:

anti-HBe — не являются показателем, характеризующим какое-либо конкретное состояние при гепатите В. Эти антитела могут быть и в конце острого гепатита В и при хроническом гепатите и в случаях, так называемого здорового носительства HBsAg.

Хронический гепатит В: в фазу обострения наблюдается следующий профиль маркеров: HBsAg, HBeAg, DNA HBV, anti-HBc IgM и суммарные. В период стихания процесса обнаруживаются HBsAg, anti-HBc IgG (суммарные), возможна сероконверсия HBeAg на anti-HBe.

В основе всей серологигеской диагностики гепатита В: как острых, так и хронигеских форм—лежит определение HBsAg. Современные иммуноферментные тест-системы позволяют выявлять HBsAg в концентрациях до 0,1 нг/мл. Схема определения у разных тест-систем, как правило, одна и та же. В качестве иммуносорбента используются антитела к HBsAg. Как правило, применяются моноклональные антитела.

Именно они обеспечивают строгую специфичность применяемых в настоящее время диагностических наборов.

Сравнительные исследования чувствительности зарегистрированных во Франции иммуноферментных тест-систем различных производителей, проведенные Французским обществом переливания крови, позволили определить, что лучшие показатели могут быть достигнуты в результате длительной ночной инкубации при комнатной температуре.

Соблюдение таких условий постановки позволило определять HBsAg в концентрации 0,08 нг/мл («Wellcozyme HBsAg», производства «Murex»). Необходимо отметить, что наличие или отсутствие отдельных маркеров HBV может быть обусловлено не только особенностями иммунной системы человека, но и инфицированием мутантным штаммом HBV. Существует значительное количество мутаций вируса, при которых могут отсутствовать маркеры, обязательные при инфицировании дикими штаммами HBV.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) в диагностике гепатита В

Метод полимеразной цепной реакции используют для подтверждения НВ-вирусной инфекции, наличия репликации вируса при остром и хроническом гепатите В, а также определения эффективности курса лечения. Наибольшей чувствительностью обладает двойной нестед-метод, который предполагает использование двух пар праймеров. Чувствительность нестедметода весьма высока и позволяет выявлять несколько копий DNA HBV в образце, что существенно превосходит возможности ИФА.

Сегодня разработаны соответствующие технологии производства отечественные тест-системы для детекции DNA HBV с помощью ПЦР, которые активно применяются в практическом здравоохранении. Высокая чувствительность ПЦР-диагностики при гепатите В расширила возможности раннего определения вируса гепатита В при острой инфекции. Длительность инкубационного периода при гепатите В достигает 6 месяцев, а в ряде случаев и больше. В это время вирус попадает в кровь, проникает в клетки печени, запускается механизм репликации, и в результате размножение приобретает устойчивый характер.

Эти процессы не затрагивают в значительной степени жизнедеятельность печени и других органов в течение длительного времени. В этот период эффекторные реакции иммунной системы организма не задействованы. Число вирусных частиц резко возрастает к концу инкубационного периода и становятся максимальными. В этот период методом ПЦР можно обнаружить в крови вирус гепатита В, тогда как остальные маркеры НВ-вирусной инфекции, главным образом серологические, ещё отсутствуют. Таким образом, с помощью полимеразной цепной реакции стала возможной более ранняя диагностика острого гепатита В.

Видео лабораторная диагностика вирусных гепатитов

Посетите раздел других видео уроков по эпидемиологии.

— Также рекомендуем «Вирус гепатита С и его геном»

Оглавление темы «Диагностика вирусных гепатитов»:

1. Подтверждение или исключение гепатита D и гепатита С у детей
2. ИФА в диагностике вирусных гепатитов. Возможности иммуноферментного анализа
3. Вирус гепатита В и его антигены
4. Мутации вируса гепатита В. Генетическая изменчивость ВГВ
5. Заражение гепатитом В после прививки. Иммунитет к вирусу гепатита В
6. Варианты HBsAg гепатита В и их распространение
7. Современная диагностика гепатита В. Выявление HBsAg
8. Вирус гепатита С и его геном
9. Белки и антигены вируса гепатита С. Диагностика ВГС
10. Современная диагностика вирусного гепатита А. Антигены HAV

Констатация HCV-инфекции базируется на  выявлении специфических серологических маркеров. Это важно не только для дифференциальной диагностики гепатита С, но  и для суждения о стадии заболевания, прогнозировании его течения, оценки активности процесса и эффективности противовирусной терапии.

Наиболее широко практикуется определение антиHCV антител. Принципиальное значение имеет генодиагностика, основанная на детекции РНК HCV. Недавно появилась возможность обнаружения  циркулирующих HCV антигенов.

 Метод ИФА

Выявление антиHCV антител проводят при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на основе комплекса  структурных и неструктурных вирусных пептидов.  В настоящее время применяются диагностические системы 3го поколения,  которые построены из рекомбинантных и/или синтетических фрагментов структурных и неструктурных HCVбелков (С, NS3, NS4 и NS5). Внедрение диагностикумов 3-го поколения позволило сократить сроки первичного выявления антиHCV при острой инфекции, существенно повысить чувствительность и специфичность реакции (рис 1).

  Рис.1 Детекция маркеров HCV тестами разных поколений

Частота выявления анти-HCV среди РНК HCV позитивных образцов крови приближается к 100 %. На фоне хронической инфекции антитела выявляются постоянно,  а после элиминации вируса сохраняются (прежде всего, анти-С) в течение 48 и более лет. Поэтому формальное наличие анти HCV не всегда говорит о присутствии вируса в организме и не позволяет судить об активности процесса. Для суждения о вирусной нагрузке, активности HCV репликации,  риска хронизации, разграничения острого и хронического гепатита, длительности инфекционного процесса и степени поражения печени   предложено использовать  определение спектра антител к различным HCV пептидам, а также наблюдать за их качественной и количественной динамикой. Это дает ориентировочную информацию, которая требует подтверждения другими методами.

Детекция антител  к каждому из HCV антигенов имеет самостоятельное диагностическое значение. Так например известно, что анти core, анти Е и анти NS3 выявляются на самых ранних этапах сероконверсии, анти NS4 и анти NS5, как правило, появляются позднее. По мере развития инфекционного процесса титры выявляемых анти HCV увеличиваются.

Было показано, что наличие в сыворотке анти HCV core является достаточно надежным  маркером вирусной репликации, поскольку имеются данные о том, что  их присутствие коррелирует с наличием в сыворотке специфической м РНК.

Анти НCV core тест может использоваться в качестве подтверждающего теста при тестировании образцов с «неопределенными» результатами. Сыворотки крови, в которых анти НCV core детектируется в  разведении 1:1000 с большой вероятностью содержат вирус и являются реально позитивными. Образцы, являющиеся позитивными в разведении 1:200 и отрицательными в разведении 1:1000, необходимо в дальнейшем исследовать на наличие вирусной РНК. С большой вероятность эти сыворотки можно отнести к реально негативным.  Таким образом, используя предварительный анти HCV core тест можно существенно снизить количество образцов, требующих подтверждения   методом ПЦР.

Анти NS3 могут являться самостоятельным диагностическим маркёром острой НCV инфекции. Высокие титры анти NS3 при остром гепатите С свидетельствуют о  значительной вирусной нагрузке, а длительное сохранение их в острой фазе связано с высоким риском хронизации инфекционного процесса.

Выявление анти NS4 и высокие титры этих антител чаще всего свидетельствуют о длительности инфекционного процесса, и, по всей видимости, коррелируют со степенью поражения печени.

Имеются данные, говорящие о том, что выявление антитNS5 в высоких  титрах часто свидетельствует о присутствии вирусной РНК, а в острой стадии является предиктором хронизации инфекционного процесса. Также имеются данные о  том, что в NS5 области вируса гепатита С имеются последовательности, неспецифически реагирующие с антителами в сыворотках крови человека. При помощи синтетических пептидов было проведено эпитопное картирование этой области, и были найдены последовательности, специфически реагирующие с антителами, вырабатываемыми именно к вирусу гепатита С.

Большое значение для клинической практики может иметь выявление анти Е1/Е2. Выявление анти Е в течение 1 месяца от начала заболевания и быстрое последующее снижение  может свидетельствовать об очищении организма от вирусной РНК, определение анти Е при хроническом гепатите С свидетельствует об активной вирусной репликации.

Для многих вирусных заболеваний, таких как гепатит В, гепатит Д, гепатит А, определение антител класса IgM к различным вирусным маркерам является важным диагностическим показателем острой или хронической инфекции. Важность определения антител этого класса при инфекции вируса гепатита С остается не вполне ясной. Разными авторами получены противоречащие друг другу результаты.  Вопреки ожиданиям IgM ответ в острой фазе  гепатита С не следует классическому пути антителообразования: IgM анти HCV могут выявляться одновременно и даже позднее, чем анти HCV класса IgG. Поэтому обнаружение IgM анти HCV  не может быть использовано как маркер острой HCV инфекции. Вместе с тем длительность циркуляции антикор IgM (35 месяцев)  является фактором, прогнозирующим персистентную инфекцию, а их появление  при хроническом гепатите С свидетельствует о реактивации вируса, т.е. об обострении процесса. Этому соответствует корреляция между темпами снижения антикор IgM и эффективностью противовирусной терапии.

Иммунблотинг

Иммунблотинг (англ. «blot»  пятно) основан на дифференцированном определении антител к различным антигенам (С,  NS3, NS4 и NS5),  которые в виде дискретных фракций  («пятен») фиксируются  на  нитроцеллюлозных полосках и после инкубации с исследуемой сывороткой проявляются мечеными антителами так же, как в «обычном» ИФА. Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам.    

Несмотря на высокую специфичность, современные ИФА-системы не гарантированы от гипердиагностики, т.е. от ложноположительных результатов. Для их исключения  также требуется динамическая оценка на основе  индикации анти HCV к дискретным антигенам (подтверждающие, или конфирмативные тесты).

Наряду с ложноположительными возможны и ложноотрицательные результаты, когда анти HCV антитела не удается обнаружить несмотря на присутствие вируса в организме. Известны по меньшей мере три подобных ситуации:

1) начальный период заболевания (серонегативная фаза острого гепатита  фаза «окна»),

2) больные, получающие иммунодепрессанты (они могут  быть  длительно  инфицированы без сероконверсии),

3) заражение некоторыми HCV генотипами (прежде всего  3  и  4).  

В настоящее время  коммерческие тесты для выявления антител к вирусу гепатита С используют в качестве антигенов рекомбинантные белки или синтетические пептиды, созданные на основе аминокислотной последовательности вируса гепатита C 1-го генотипа.  Однако, растет число наблюдений, что такие тесты могут быть недостаточно эффективны для надежной детекции антител при инфицировании вирусом другого генотипа. Так, например, было показано, что антигены, полученные из  NS3 области  HCV 1-го генотипа, в 5 раз более эффективно узнают антитела в сыворотках больных, инфицированных вирусом HCV 1го генотипа, чем в сыворотках больных, инфицированных вирусом 2го или 3го генотипа. Исследования, проведенные L Bassit  (2002)  продемонстрировали неспособность нескольких коммерческих тестов адекватно детектировать антитела к вирусу гепатита С у больных, инфицированных вирусом 1а и 3а типов. Это наблюдение имеет огромное значение как для регионов, где превалируют вирусы других типов, так и для отдельных популяций.

Таким образом, для эффективной диагностики гепатита С  необходим высокочувствительный тест, способный адекватно реагировать с анти-ВГС любого генотипа. 

Кроме прямого изучения структуры РНК, информация о зараженности конкретным генотипом  может быть получена  на основе изучения антител против генотипоспецифических эпитопов, локализованных в NS5, NS4 и С  белках вируса. Перечень серотипируемых вариантов HCV в настоящее время включает генотипы (субтипы) 1a, 1b, 2a, 2b, 3a и 4а. Результаты серотипирования и РНК-типирования совпадают в 50-95% случаев, в зависимости от генотипа. Осуществляется коммерческий выпуск диагностических препаратов для серотипирования в планшетном варианте ИФА и иммуноблоте.