Что такое маркеры гепатита ифа

Маркеры гепатита С – это частицы вируса и антитела к нему, выявляемые в крови. Антитела представлены иммуноглобулинами (белковые соединения плазмы) классов IgG и IgM. Если они присутствуют в крови, это значит, что человек заражен вирусной инфекцией или перенес ее. Молекулярно-биологические методы диагностики обладают высокой точностью – более 98%. В комбинации с серологическими тестами врачи выявляют вирусные частицы HCV, определяют стадию болезни.

Кому нужно сдавать анализ

При комплексной диагностике в организме больных обнаруживают маркеры двух типов:

1. антигены – частицы РНК вируса, к которым и образуются иммуноглобулины типа IgM и IgG;
2. антитела (anti-HCV) – белковые соединения плазмы крови, действие которых нацелено на уничтожение вируса.

Анализ крови на маркеры вирусного заболевания проводится при:

• перенесенном гепатите неуточненного происхождения;
• повышении в крови концентрации печеночных трансаминаз (АЛТ, АСТ);
• скрининговом обследовании;
• явных признаках вирусного поражения печени;
• профосмотре работников медучреждений;
• обследовании людей с высоким риском заражения HCV;
• контроле эффективности антивирусной терапии;
• переливании донорской крови;
• рождении ребенка от больной матери;
• планировании беременности;
• сомнительных данных других исследований.

Выявление anti-HCV в крови еще не подтверждает наличие вирусного заболевания. Ключевое значение в диагностике имеет анализ на РНК. Его присутствие указывает на положительный результат теста на маркеры инфицирования HCV.

Как подготовиться к диагностике

Для подтверждения диагноза HCV-инфекции назначаются лабораторные исследования – анализ на серологические и молекулярные маркеры HCV. Для их проведения осуществляют забор крови из локтевой вены. Чтобы исключить погрешности в результатах, проходят подготовку:

• за 2 недели до сдачи анализа отказываются от любых спиртосодержащих напитков;

• в течение 7-10 суток соблюдают диету №5 по Певзнеру, при которой из рациона исключаются жирное мясо, жареные и острые блюда;

• за полсуток до забора крови не курят, стараются не волноваться;

• анализ на маркеры ВГС делают в утренние часы натощак.

Чтобы избежать ложных результатов, необходимо сообщить врачу о приеме любых медикаментов. При возможности от них отказываются за 2-4 недели до обследования.

Виды анализов на вирус гепатита С

Для выявления маркеров на гепатит С проводят 2 основных типа исследования – молекулярный и серологический. Специфические иммуноглобулины в сыворотке крови сигнализируют о поражении печени инфекцией. Эти исследования выполняются для первичного выявления антигенов и антител к HCV.

Для дифференциальной диагностики проводятся дополнительные исследования, по результатам которых определяют стадию болезни, подходящую тактику лечения.

Серологические маркеры

Серологические показатели гепатита С (антитела) – белковые соединения в крови, которые синтезируются иммунной системой в ответ на проникновение в организм вируса Hepatitis C Virus (HCV). 

В ходе серологического исследования выявляют anti-HCV, то есть антитела к вирусным частицам. Положительные результаты указывают на перенесенную болезнь или активное воспаление печени.

В большинстве современных клиник маркеры вирусного гепатита С определяются в ходе иммуноферментного анализа (ИФА), суть которого заключается в следующем:

1. из сыворотки крови захватывают белковые комплексы;
2. их обрабатывают мечеными ферментами;
3. по наблюдаемой цветной реакции определяют тип антител.

Вне зависимости от генотипа ВГС в ходе ИФА удается определить количество IgG антител класса G и IgM класса M. Специфичность тестов II поколения составляет 95%. Срок обнаружения маркеров HVC core IgM не превышает 9-10 недель после инфицирования.

Иммуноферментный анализ III поколения разработан на базе антигена NS5. Преимущество техники заключается в существенном уменьшении серологического окна – подтвердить наличие маркеров ВГС в крови удается спустя 4-6 недель после заражения. Его чувствительность и специфичность составляет 99%. Если обнаруживаются маркеры HCV типа IgG, это указывает на перенесенную инфекцию или наличие хронического гепатита.

Серологический скрининг – обязательный тест при первичной диагностике вирусного заболевания. Но для подтверждения полученных данных прибегают к дополнительным исследованиям.

Молекулярные маркеры

Молекулярно-биологические методы нацелены на обнаружение частиц возбудителя инфекции. По результатам обследования подтверждают положительный серологический тест на маркеры типа anti-HCV и репликацию, то есть размножение, вируса.

В вирусологии применяют два типа исследований:

1. Качественный – выполняется для исследования крови донора или подтверждения гепатита у лиц с выявленными anti-HCV (результат положительный или отрицательный – вирус есть или вируса нет).
2. Количественный – играет роль маркера инфекционной нагрузки. По концентрации вирионов определяют носителя РНК патогена, активность воспаления печени.

Молекулярные тест-системы позволяют выполнить ПЦР (полимеразную цепную реакцию) в режиме реал-тайм. Степень вирусной нагрузки на организм зависит от стадии болезни и варьируется в диапазоне от 10 до 10 млн. международных единиц в 1 мл крови.

Количественная ПЦР-диагностика служит маркером репликации РНК-вируса при вялотекущем гепатите. Анализ выполняется на 4, 12 и 24 неделях терапии препаратами интерферона. Повторный молекулярный тест проводят спустя 24-48 недель после приема лекарств.

Дополнительные исследования

После подтверждения диагноза определяют генотип возбудителя. От полученных данных зависит методика дальнейшего лечения и прогноз осложнений. Для этого выполняют анализ NS5-участка белка ВГС.

Тест-системы несовершенны, что затрудняет диагностику гепатита с недавно выявленными новыми генотипами.

Дополнительно выполняется пункционная биопсия печени и гистологический анализ взятой ткани. По данным рассмотрения под микроскопом определяют тяжесть изменений в структуре органа, расположение очагов поражения. Структурно гистологические маркеры гепатита Б и С мало чем отличаются друг от друга. Точность предсказания вирусной инфекции по данным тканевого исследования превышает 76%.

Гепатологи выделяют несколько гистологических маркеров HVC-инфекции:

• жировое перерождение гепатоцитов (клеток печени);
• звездчатый фиброз паренхимы;
• ступенчатый некроз гепатоцитов;
• формирование соединительнотканного остова печени.

В случае обнаружения осложнений – гепатоза, гепатоцеллюлярной карциномы – тактику лечения корректируют.

Расшифровка анализов

Точно расшифровать результаты серологического, молекулярного и гистологического анализа может врач – гастроэнтеролог или гепатолог. При интерпретации результатов обязательно учитываются данные дополнительных исследований – биохимического анализа крови, УЗИ и МРТ печени, коагулограммы.

Что означают результаты обследования:

1. Наличие в сыворотке крови серологических маркеров еще не указывает на продолжающееся размножение вируса. Нередко это говорит о перенесенной инфекции.
2. Отсутствие маркеров анти-HCV не доказывает здоровье человека. В ранний период при острой форме болезни или при иммунодефицитах выявить антитела к ВГС не удается.
3. У реципиентов, которым перелили зараженную кровь, нередко обнаруживаются маркеры гепатита С. Но это еще не сигнализирует о заражении вирусной инфекцией.
4. Если одновременно обнаруживаются антитела и РНК, это сигнализирует об остром гепатите или рецидиве вялотекущей инфекции.

Расшифровка комбинаций серологических маркеров HCV

Специалисты предостерегают пациентов от самостоятельной интерпретации данных и от самолечения. Гепатит С – опасная инфекция, которая лечится только под контролем врача.

Может ли исследование на маркеры быть ложным

Определение серологических маркеров не всегда означает, что человек действительно болен гепатитом. Несмотря на высокую точность ИФА, на результаты диагностики могут повлиять:

• тяжелые иммунодефицитные состояния;

• беременность;

• рассеянный склероз;

• прием медикаментов с гепарином;

• обострения респираторных заболеваний;

• вакцинация;

• аутоиммунные системные заболевания соединительной ткани;

• гематологические недоброкачественные опухоли;

• систематическое проведение гемодиализа.

Во избежание ложных результатов диагностики сейчас применяют тест-системы, на которые не влияет наличие в крови С-реактивных протеинов или ревматоидного фактора. Однако такие системы есть пока не во всех клиниках.

Что делать, если маркеры гепатита С положительные

Даже случайное обнаружение антител к возбудителю гепатита требует обращения к врачу. Диагностикой и лечением занимается гепатолог, инфекционист или гастроэнтеролог. Для подтверждения диагноза дополнительно назначаются:

1. коагулограмма;
2. тонкоигольная биопсия печени;
3. молекулярно-биологическое исследование;
4. УЗИ и МРТ печени;
5. биохимический анализ крови;
6. гистологический анализ.

При подтверждении диагноза проводится лечение, которое направлено на уничтожение вирусной инфекции, поддержание функций печени.

В 2011 году на замену старой терапии Рибавирином и Интерфероном пришли препараты прямого противовирусного действия (ПППД) – Асунапревир, Паритапревир, Воксилапревир, Ледипасвир, Дасабувир. Эффективность некоторых из них достигает 95-98%.

Цены на диагностику гепатита С в московских лабораториях

При подозрении на вирусный гепатит врач назначает лабораторные и аппаратные исследования, по результатам которых определяют:

1. наличие ВГС в крови;
2. генотип возбудителя;
3. выраженность воспаления и стадию болезни.

Стоимость обследования зависит от типа медучреждения, вида и количества анализов:

При своевременном выявлении маркеров вирусного гепатита и антивирусном лечении прогноз благоприятный. Игнорирование болезни опасно хронизацией воспаления, осложнениями – гепатозом, гепатоцеллюлярной карциномой, циррозом. Поэтому при подозрении на инфекцию обязательно обращайтесь к гастроэнтерологу.

Вирусом гепатита С заражено около 170 миллионов человек по всему миру. Болезнь коварная – при смазанной симптоматике начала заболевания ее дебют проходит незамеченным. Часто развиваются хронические формы, которые приводят к разрушению клеток печени.

Исходом гепатита С становятся цирроз или рак печени. Для выявления маркеров заболевания в первую очередь назначают иммуноферментный анализ – ИФА на гепатит С.

Что такое ИФА?

Анализ основан на способности специфических антител (белков крови) связываться с антигеном (частицами вируса), при этом один из них «помечен» ферментом. Образовавшийся комплекс реагирует с подкрашенным субстратом, что фиксируется спектрофотометрическими методами.

Иммуноферментный анализ (ИФА) на гепатит С показывает не присутствие самого вируса-возбудителя в крови, а ответ иммунной системы на столкновение с ним. Количество вируса в крови на момент проведения ИФА может быть ничтожно мало, за порогом определения. А антитела – иммуноглобулины, которые выработались при встрече с «агрессором», продолжают циркулировать в кровеносной системе.

Именно присутствие антител определяется при ИФА. Появляются они в срок от нескольких дней до нескольких недель после заражения гепатитом С.

ИФА выявляет циркулирующие иммуноглобулины даже в малой концентрации. По их типу можно судить о давности заболевания. В острый период, когда вирус гепатита активно размножается, определяют иммуноглобулины класса М.

В хронической стадии (спустя 6 мес. от начала заболевания) при ИФА обнаруживают иммуноглобулины класса G. Последний тип также может свидетельствовать не о хронизации процесса, а о самом факте столкновения иммунной системы с вирусом гепатита С в прошлом.

Показания к ИФА на гепатит С

Обследование на маркеры гепатита С, к которым относятся антитела – иммуноглобулины, давно стала рутинной процедурой. ИФА назначают при:

• острых и хронических заболеваниях печени;

• желтухе неясного генеза;

• обследовании перед хирургическими вмешательствами;

• стандартном обследовании доноров крови;

• постановке на учет в женской консультации при беременности. Повторно анализ сдают за 2-4 недели до предполагаемой даты родов;

• прохождении гемодиализа;

• профилактических осмотрах медработникам, контактирующим с компонентами крови и другими биологическими жидкостями;

• незащищенном сомнительном половом контакте;

• рождении детей от инфицированных матерей.

В порядке рекомендаций анализ на гепатит С назначают родственникам больного, близко с ним контактирующим. В 50% случаев парентеральный источник заражения выявить не удается. Инфекционисты предполагают бытовой путь передачи, когда зараженная кровь может попадать в кровоток здорового человека через кожные ранки и трещины. У этой версии много противников.

Как проводится анализ?

За 48 часов до ИФА исключают из пищи алкоголь, жареное, жирное и соленое. За 12 часов до забора крови из вены пациенту необходимо воздержаться от приема каких-либо лекарств. Анализ сдают утром натощак.

Наибольшее распространение получил «твердофазный» ИФА. Твердая фаза – это материал, на котором фиксируют антитела или антигены. В этом качестве используют мембраны, активно собирающие на себя белки (лабораторные планшеты, стенки пробирки, шарики и бусины из полипропилена или поливинилхлорида, нитроцеллюлозу и пр.).

Вне зависимости от разновидности ИФА, в его проведении существует строгая этапность:

1. На первой стадии исследуемый материал «узнается» специфическим антителом и связывается с ним, образуя иммунный комплекс;
2. На второй стадии с образовавшимся иммунным комплексом реагирует помеченный ферментом так называемый конъюгат – антитело или антиген;
3. Заключительная стадия ИФА позволяет уловить и зарегистрировать сигнал от ферментной метки.

Виды ИФА

Вариантов выполнения анализа достаточно много. Их классифицируют:

• По типу реагентов, используемых на первом этапе ИФА:
  a) конкурентный;
  b) неконкурентный;

• По степени однородности среды, в которой происходят реакции ИФА:
  a) гомогенные;
  b) гетерогенные;

• 3) По принципу определения исследуемого вещества:
  a) прямой;
  b) непрямой. Именно непрямой метод ИФА используется при выявлении маркеров гепатита С.

Прямой метод ИФА

При этом методе используют стандартные антитела к вирусу гепатита С, помеченные меткой – ферментом.

1. В лунки лабораторного планшета (если выбрали именно его в качестве твердой фазы) помещают сыворотку крови пациента. Выдерживают 20 минут, чтобы антигены (белки вируса гепатита С) успели прикрепиться к стенкам.
2. Добавляют стандартные помеченные ферментом антитела к гепатиту С. Выдерживают еще несколько часов – за это время образуются иммунные комплексы антиген-антитело с меткой. Чем больше антигенов в исследуемой сыворотке, тем больше таких комплексов образуется.
3. Содержимое лунок промывается от несвязанных белков. Затем добавляют субстрат. Это вещество при реакции с ферментом-меткой меняет цвет. Чем больше комплексов при ИФА образовалось, тем большее количество фермента может воздействовать на субстрат и тем ярче хроматографическая реакция. Она считывается ИФА-ридером и оценивается количественно.

Непрямой метод

При этом методе ИФА стандартный антиген связывается с антителами сыворотки пациента. К образовавшемуся иммунному комплексу добавляют меченые ферментом стандартные антитела к иммуноглобулинам.

1. В лунки лабораторного планшета помещают стандартный антиген гепатита С (частички вируса). Антиген прикрепляется к стенке, незакрепленные белки вымываются лаборантом.
2. В подготовленные таким образом лунки помещают исследуемый материал (сыворотку крови), инкубируют. Есть обязательные контрольные лунки со стандартными реагентами. За время инкубации образуются комплексы антиген-антитело. Непрореагировавшие компоненты опять вымывают.
3. В лунки добавляют меченые ферментом антитела к иммуноглобулинам М и G. Эти белки прореагируют с образовавшимся ранее комплексом, только если в исследуемом образце есть антитела к гепатиту С. Промывают.
4. Добавляют еще один компонент – субстрат. Это химическое соединение разрушается ферментом из комплекса антиген-антитело. При этом образуется окрашенное вещество, количество которого фиксируют специальным прибором – ИФА-ридером. Чем больше фермента, тем сильнее он прореагирует с субстратом и тем ярче будет цветовой сигнал.

Расшифровка результатов

Высокая чувствительность ИФА иногда играет с пациентом злую шутку. Не каждый положительный результат означает заболевание и не каждый отрицательный – гарантия свободы от вируса.

При положительном ИФА определяют генотип вируса и определяют количество циркулирующих в крови вирусов с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Положительный

При ИФА выявляют маркеры острой фазы заболевания (иммуноглобулины класса М (IgM)) и иммуноглобулины класса G (IgG). Последние могут означать, что у пациента хронический гепатит С или то, что иммунная система хотя бы раз в прошлом сталкивалась с этим вирусом и выработался иммунитет.

Выявление одновременно двух типов иммуноглобулинов при ИФА говорит об обострении хронического гепатита С.

Отрицательный

Самый вероятный вариант – пациент не болен и его иммунная система никогда не сталкивалась с вирусом.

Псевдоотрицательный результат при ИФА можно получить в том случае, если пациент инфицировался относительно недавно и защитные антитела просто не успели выработаться. Это так называемое «диагностическое окно». Его срок – 6 месяцев.

Наконец, нельзя полностью исключить ошибку лаборатории.

Ложноположительный

ИФА реже дает погрешности по сравнению с ПЦР. Тем не менее, исследуемые вещества – белки. Реагент может связаться с неспецифическим белком сыворотки крови. Ложноположительный ИФА на гепатит С нередок в случаях:

• выполненной накануне вакцинации;

• при аутоиммунных патологиях или туберкулезе, рассеянном склерозе, склеродермии;

• опухолевом процессе;

• инфекциях, протекающих с гипертермией (грипп, ОРЗ и пр.).

Грешат ложноположительными результатами исследования на маркеры гепатита С у беременных. Довольно часто ИФА дает ложное заключение о наличии антител пациентам со II группой крови.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный: что это значит?

Полимеразная цепная реакция выявляет присутствие вируса в крови и его количество, помогает определить генотип. ИФА «видит» антитела – клетки, вырабатываемые спустя какое-то время после инфицирования и остающиеся в организме после уничтожения «врага».

Вариантов, при которых у пациентов с гепатитом С ПЦР отрицательный, а ИФА – положительный, два. Самый вероятный – сформировался иммунитет к вирусу, а сам он уничтожен иммунной системой или лекарствами.

Второй: нельзя исключить ошибку лаборатории при проведении ПЦР.

Диагностикой заболеваний должен заниматься врач. Он учитывает все нюансы обследования. А лабораторная диагностика, в том числе ИФА – только вспомогательный метод, не лишенный погрешностей.